替莫唑胺白蛋白纳米粒在大鼠体内的药代动力学研究

1、替莫卩坐胺白蛋白纳米粒在大鼠体内的药代动力学研究（浙江大学医学院附属儿童医院 浙江 杭州310003）【摘要】目的：研究替莫卩坐胺白蛋白纳米粒（tmz-bsa-nps）经大鼠尾静脉 注射给药后的药物动力学特性。方法：制备tmz-bsa-nps和tmz-sol,给药后hplc 测血药浓度并计算、比较二者的药动学参数，研究tm乙bsa-nps的药代动力学特 性。结果：经药动学参数计算，tmz-sol在体内的代谢过程符合二室模型， tmz-bsa-nps的代谢过程符合单室模型。结论：经药动学参数分析，tmz-bsa-nps 的牛物利用度好于tm乙sol, tmz-bsa-nps能够发挥更好的药效并且

2、减少不良反 应的发生。【关键词】替莫哇胺；白蛋白；纳米载体；血浆药代动力学【中图分类号】r965【文献标识码】a【文章编号】2095-1752 （2016） 35-0048-02替莫哇胺可有效透过血脑屏障，直达病灶，是公认的治疗效果最好的抗胶质 细胞瘤药物，现阶段国内的替莫卩坐胺药物都是胶囊制剂，而手术患者常不适 用固体药物，因此有必要改用其他给药方式。由于tmz在水中溶解性差、水溶 液稳定性差，木硏究根据纳米载体具有缓释性、特别是能够有效传递水难溶性药 物的特点，使用bsa制备tmz-bsa-nps,考察其药代动力学行为，为其缓释、减 毒的特性提供实验依据。1 实验材料1.1仪器与试剂agi

3、lentl200高效液相色谱仪；agilent extend-c18色谱柱（4.6mm×250mm, 5μm）；替莫卩坐胺（纯度>99%）；牛血清白蛋白 （纯度98%）；其他试剂均为分析纯。1.2实验动物spf级雄性sd大鼠，体重300±30g（浙江中医药大学实验中心提供）。2方法2.1血药浓度测定2.1.1样品制备 雄性大鼠12只，随机分成各6只的两组。对照组按8mg/kg 剂量tmz-sol尾静脉注射给药，实验组按同样剂量tmz-nsa-nps给药,给药后5, lomin 和 0.52.0h （每 0.5h）, 2.0h

4、4.0h （每 lh）, 4h:l4h （每 2h）股动脉插 管取血 iml, 3500rpm/min 离心 20min,分离血浆 200μl,加 100?g/ml 甲硝 卩坐溶液25?l,酸化后置20°c储存备用。2.1.2色谱条件 取样本200&mu儿置离心管中，用600μl乙酸乙酯提取 两次，涡流混合3min, 3500r/min离心5min,取上层液于另一离心管中，40°c n2吹干，加100&mu儿流动相（0.5%乙酸冲醇85： 15）溶解残渣，上样20?l, 柱温：25°c,检测波长：329nmo2.1.3对

5、照品储备液 精密称取tmz标准品lo.omg,置50ml容量瓶中以0.5% 冰乙酸溶解定容成tmz标准储备液，4°c贮存备用。2.1.4专属性考察 选择含内标、tmz标准品、内标与tmz标准品的大鼠空 白血浆上样测定考察方法专属性。2.1.5血浆标准曲线 将tmz标准储备液稀释为50、20、10、2、1、0.5?g/ml 后，吸取各浓度稀释液50?l, 40°cn2吹干，加200&mu儿空白血浆及25&mu儿 内标，上样后记录峰面积，求标准曲线方程。2.1.6精密度与冋收率量取1、10、50?g/mltmz储备液50?l, 40°cn2吹干，加20

6、0&mu儿酸化血 浆上样，id测定5次计算日内精密度，连续测定5d计算日间精密度；上样测定 tmz储备液，根据tmz的测定浓度计算冋收率。2.2纳米胶体溶液配制水相：称取2.5gbsa,溶解于50ml蒸憾水，调ph到5.4并用tmz饱和备用； 油相:精密称取150mgtmz, 200mggtcc并加2mlch2ci2；将水相加入油相,在 750psi下循环10次，即得bsa纳米胶体溶液。2.3药动学数据分析选择das软件2.1版进行药动学参数计算。3 结果3.1血药浓度测定结果实验组和对照组药时关系见图1,药代动力学参数见表lo经das程序计算，对照组药动学过程符合二室模型，实验组符合

7、一室模型。 实验组cmax小于对照组，tmax> mrt （o&nfin;）、auc （0-t）均大于对照组。3.1.1专属性考察 专属性考察色谱图见图2。图2专属性色谱图图中可见内标甲硝畔的保留时间约在9min, tmz的约在6min,图23中甲 硝哩和tmz分离良好，说明在该色谱条件下方法专属性强。3.1.2血浆标准曲线 以浓度c为纵坐标、tmz/甲硝畔峰面积p为横坐标进 行线性冋归，得冋归方程p二0.054300.0036,表明c和p具有良好的线性关系。3.1.3精密度与回收率计算 测定的日内精密度（）分别为722、506、238, 日间精密度（）分别为8.16> 7

8、.22、3.47o回收率（）分别为88.12±4.33> 92.38±4.62、93.44±4.07, rsd 分别为 4.35%、5.22%. 4.19%。4。讨论替莫畔胺在血浆中的半衰期较短，要达到理想的治疗效果需要大剂量给药, 但是大剂量给药容易引起不良反应，同吋替莫卩坐胺的难溶性也为新剂型的研 制造成了障碍。纳米载体作为近年来广受关注的新型载体，具有释药速度可 调、透过性好、能够靶向给药等优点4,是替莫卩坐胺这类代谢迅速u难溶于水 的药物的理想载体。位于细胞膜上的白蛋白受体能够介导细胞的跨膜转运，根据 这一特点，人

9、血清白蛋白纳米粒能够运载药物通过肿瘤血管内皮，富集于肿瘤细 胞中，这一机制可以有效提高肿瘤组织的药物浓度和留存吋间，使其发挥更好的 作用。本实验以bsa代替hsa制备替tmz-bsa-nps,考察这一载药系统在大鼠体 内的药动学过程并观察其减轻毒副作用的效果。本实验中tmz-bsa-nps的cmax小于tmz-sol,说明前者由于其较小的血药 浓度，更不容易发生不良反应;tmz-bsa-nps的tmax和mrt (0-∞)大于 tm乙sol,说明前者可以通过缓释作用显著延长药物在血液中的留存吋间； tm乙bsa-nps的auc (0-t)大于tm乙sol,说明tmz通过白蛋白纳米粒给药吋生 物利用度好于单纯的溶液给药。【参考文献】1 曾宪起，中长虹，浦佩玉等应用替莫卩坐胺对照司莫司丁治疗恶性脑胶质 瘤的疗效观察j中华神经外科杂志,2006, 22(4):204-207.2 周保元，毛庆，王鹏，王翔，谢飞，刘艳辉替莫卩坐胺