正交实验法优选女贞子多糖提取工艺

1、正交实验法优选女贞子多糖提取工艺摘 要目的优选女贞子多糖的提取工艺。方法 实验中对女贞子的多糖提取采用超声波提取法，并以具有实 验次数少，数据点的分布很均匀，可用相应的极差分析法， 方差分析法，回归分析法等对实验结果进行分析引出许多有 价值结论的正交实验法，以多糖为评价性指标，用分光光度 法进行测定。结果实验通过超声提取女贞子多糖的方法获 得了女贞子多糖的最佳工艺条件为80%功率下，料液比为1： 40,提取时间20 mine结论对提取率的影响最大的是料液 比，其次是超升功率。超声提取使提取率提高了约1.4倍， 该法值得应用和推广。关键词正交实验；女贞子多糖；超声波提取女贞子始载于东汉神农本草经

2、列为上品，应用历史 悠久。本草纲目记载：”此木凌冬青翠，有贞守之操， 故以女贞状之近时以放蜡虫，故俗称为蜡树1。”本 草经疏载：”女贞子，气味俱阴，正入肾除热补精之要品, 肾得补，则五脏自安，精神自足，百病去而身肥健矣。”本 草述载：”女真实，固入血海益血，而和气以上荣 由 肾主肺，并以淫精于上下，下独髭须为然也，即广嗣方中， 多用之矣2。”本经逢原载：”女真，性禀纯阴，味 偏寒滑脾胃虚人服之，往往减食作泻。”可以看出女贞子的 医用价值不可小觑，而学者们对于女贞子中齐墩果酸的药理 研究比较多，近现代有研究显示女贞子多糖具有提高免疫、 抗炎、抑菌等药理作用，为了给研究者提供方便，论文选择 了对女

3、贞子多糖进行提取研究。1实验材料与仪器1.1材料女贞子果实采自于杭州，经鉴定为木犀科植物 女贞。95%乙醇，三氯乙酸，重蒸酚，浓硫酸，盐酸，葡萄 糖，30%过氧化氢，1, 10-菲林试剂，邻苯三酚，三（尧甲 基）氨基甲烷等均为分析纯。1.2主要仪器超声波发生器（昆山市超声仪器有限公 司）,紫外可见分光光度计（日本岛津）,旋转蒸发器（re- 52b,上海亚荣生化仪器厂），低速大容量离心机（wtl,江 苏金坛市金城国胜实验仪器厂），真空干燥箱（dzf-6021, 上海一恒科学仪器有限公司）。2实验方法2.1女贞子样品前处理女贞子干燥成熟果实药材，去 杂，用纯化水浸泡，沥干，于50 £烘箱

4、中烘干，粉碎，过 40目筛，保存在阴凉干燥处待实验备用。2.2多糖的测定方法2. 2. 1标准曲线的制备3：准确称取经105*干燥至恒 重的无水葡萄糖0. 1000g,定容于1000ml容量瓶中，再分别 吸取 0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml,加水至 1.00ml, 加1. 00ml5%苯酚和5. 0ml浓硫酸，摇匀,静置15min,在490nm 处测其吸光度，建立回归方程为y=0. 0986x-0. 003 , r2=0. 9998。标准曲线如图2.1。2. 2.2样品中多糖的测定：准确吸取样品液1.00ml按 照标准曲线的步骤测定其吸光度，重复3次，根据回归方程 计算溶

5、液浓度，进而计算出多糖提取率。2.3女贞子多糖提取工艺路线工艺线路：女贞子果实 去杂浸泡一晾干粉碎过40目筛f取样称量f超声波提取一 分离纯化一除蛋白一浓缩一乙醇沉淀一抽滤一称取浸膏一 定容一标准曲线法定量分析4。2.4正交实验方案设计对于超声波提取女贞子多糖的 方法，经过综合考虑影响女贞子多糖提取效果的各因素，正 交试验选取了主要影响因素（a：超声功率，b：料液比，c： 提取时间，）进行研究。选取每一个因素的三个水平，按l9（3） 4正交试验设计，对女贞子多糖进行提取实验。因素水 平见表1。2. 5制备工艺 取经“2. 1”项处理好的女贞子2. 0g,精 密称定9份，分别按正交实验法进行实验

6、。根据料液比关系 女贞子粉末（g）： 20%乙醇溶液（ml）,如：女贞子粉l.og 对应20%乙醇溶液20ml于锥形瓶中进行超声浸取，静置，再 用低速大容量离心机进行分离，提取液浓缩至原体积30%后, 加入4倍体积的95%的乙醇沉淀，沉淀物依次用无水乙醇、 丙酮及乙瞇洗涤，用蒸馆水复溶，用三氯乙酸法去除粗多糖 中大量蛋白质后，再用sevag法去除少量的残留蛋白质，脱 蛋白后的多糖液反复用95%乙醇沉淀，抽滤得到女贞子多糖 浸膏，精密称定，计算浸膏得率。结果见表2。2.6样品含量测定 取所得浸膏样品，置于研钵中研细 后，精密称取20mg,蒸馆水定容于looml量瓶中。将超声波 提取液按“2.2”项多糖含量测定法进行测定。结果见表2。3结果与分析3.1结果在单因素影响女贞子多糖提取率的基础上，选 取了超声功率，提取时间，料液比几个单因素，在温度6(rc 下，采用正交试验法确定超声提取多糖的优化工艺条件。实 验结果如下：由表2可以看出，各因素列的r值明显大于空列r值， 说明各因素对女贞子中多糖的提取均有明显的影响，比较r 值的大小可以看出，因素影响顺序为料液比超声功率提取 时间，比较k值的大小可以看出，女贞子多糖提取的优化条 件是a3b3c1,即功率80hz,料液比1： 40,提取时间20min。 结果表明，料液比对女贞子多糖提取率的影响达