质粒的提取及酶切实用教案

1、会计学1质粒的提取质粒的提取(tq)及酶切及酶切第一页，共15页。2021-12-52 质粒是存在于几乎所有细菌质粒是存在于几乎所有细菌(xjn)中染色体之外的外状中染色体之外的外状DNA分子。质粒通常携带有染色体上所不存在的基因，并表现出一些分子。质粒通常携带有染色体上所不存在的基因，并表现出一些有用的性状，如抗生素抗性，耐受重金属等。质粒拥有自己的复有用的性状，如抗生素抗性，耐受重金属等。质粒拥有自己的复制原点，因此可以不依赖于染色体而进行独立复制。一些小的质制原点，因此可以不依赖于染色体而进行独立复制。一些小的质粒利用宿主细胞的酶进行复制，而较大的质粒则自身携有编码与粒利用宿主细胞的酶进

2、行复制，而较大的质粒则自身携有编码与复制有关的酶。复制有关的酶。第1页/共15页第二页，共15页。第2页/共15页第三页，共15页。2021-12-54第3页/共15页第四页，共15页。2021-12-55This method is based on the different rates of denaturation and renaturation of covalently closed circular plasmid DNA and chromosomal DNA. 当细胞悬浮于当细胞悬浮于 NaOH NaOH 和十二烷基酸钠和十二烷基酸钠(SDS)(SDS)溶液中时，在高溶液中

3、时，在高pH(pH(碱碱) )的作用下的作用下细胞发生裂解，此外，蛋白质和染色体细胞发生裂解，此外，蛋白质和染色体DNADNA发生变性与细胞碎片发生变性与细胞碎片(su pin)(su pin)一起沉淀下来。一起沉淀下来。第4页/共15页第五页，共15页。2021-12-56 加入中和溶液加入中和溶液(rngy)(rngy)(乙酸钾乙酸钾) )溶液溶液(rngy)(rngy)后离心，后离心，则质粒则质粒DNADNA则留在上清液中。则留在上清液中。 当加入当加入(jir)(jir)碱溶液时质粒碱溶液时质粒DNADNA也发生变性，但其两条链仍然靠得也发生变性，但其两条链仍然靠得很近，就像一条链上的

4、两个环链，当加入很近，就像一条链上的两个环链，当加入(jir)(jir)酸性溶液进行中和时，酸性溶液进行中和时，质粒质粒DNADNA的两条链就分别与其互补链重新退火，进而形成原始状态的质粒的两条链就分别与其互补链重新退火，进而形成原始状态的质粒。第5页/共15页第六页，共15页。2021-12-57. Instruments1. Constant temperature incubator（恒温（恒温培养箱）培养箱）2. Constant temperature shaking table （恒温摇床）恒温摇床）3. High speed centrifuge （高速离心机）（高速离心机）4.

5、 Vortex mixer（涡旋（涡旋(w xun)振荡器振荡器）5. Clean Benches（超净工作台）（超净工作台）6. Autoclave （高压灭菌锅）（高压灭菌锅）7. Pipettes （微量加样器）（微量加样器）第6页/共15页第七页，共15页。2021-12-58fresh just prior to use )(0.4M NaOH,2% SDS 新鲜配制新鲜配制(pizh),等体积混和等体积混和)第7页/共15页第八页，共15页。2021-12-59第8页/共15页第九页，共15页。2021-12-5108.8.菌种：含质粒的大肠杆菌菌种：含质粒的大肠杆菌第9页/共15页第十页，共15页。2021-12-511室温室温10 min第10页/共15页第十一页，共15页。2021-12-512第11页/共15页第十二页，共15页。2021-12