高中生物 专题5 生态工程 阶段复习课课件 新人教版选修3 (140)

1、DNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定1、DNA分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构.2、DNA分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接.排列在外侧,组成基本骨架,碱基排列在内侧.3、DNA分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对.(原则)DNA在在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的 增 加 而 逐 渐 降 低 ； 在 0 . 1 4 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度较大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以

2、使DNA在盐溶液中溶解或析出。 2、 DNA对酶、高温、洗涤剂的耐对酶、高温、洗涤剂的耐受性受性 3、DNA遇二苯胺（沸水浴）遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色会变成蓝色, ,因此因此, ,二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。的试剂。 1、DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液,但细胞但细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理用这一原理, ,可以提取出含杂质较少可以提取出含杂质较少的的DNA。实实 验验 过过 程程二、二、DNA的释放的释放一、材料的选定三、DNA与蛋白质等分离四、DNA的析出、获取、鉴定一、材料的选定一、材料的选定1、 DNA含量是否

3、较高？含量是否较高？2、材料是否好取材？3、是否容易提取DNA（ 植 / 动 ）？为什么不用哺乳动物的红细胞？如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响？二、DNA的释放获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？为了纯化提取的DNA需要将滤液作怎样的进一步处理？为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质？方案二和方案三的原理有什么不同？三、DNA与蛋白质等物质分离四、DNA的析出、鉴定 1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL玻棒搅拌,离心、分离或静置沉淀。除去血液中的上清液,即血浆2.提取DNA取血细胞5-10mL20mL蒸馏水,用玻棒沿一个方向快速搅拌。纱布

4、过滤：滤液中含DNA和其他核物质,如蛋白质。.提取血细胞核物质.溶解核内的DNA滤液2mol/L的NaCl溶液40mL,玻棒沿一个方向轻缓搅拌。实验步骤.析出含DNA的粘稠物.滤取含DNA的粘稠物. DNA粘稠物的再溶解 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水,并沿一个方向轻轻搅拌,出现丝状物；当丝状物不在增加时,停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。 用多层纱布过滤,含DNA的粘稠物留在纱布上。 20mL2mol/L的NaCl溶液步骤含DNA的粘稠物在20mL烧杯中轻缓搅拌3min,使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。.过滤含有DNA的NaCl溶液用放有两层纱布的漏斗过滤步骤所得

5、的溶液,滤液中含有DNA。.提取含有杂质较少的DNA步骤所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL,用玻棒沿一个方向轻缓搅拌,溶液中（析出）出现乳白色丝状物,用玻棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。3.DNA的鉴定加入二苯胺试剂4mL,用玻棒搅拌使DNA溶解,沸水浴5min,观察溶液是否出现蓝色。1.共有“三次过滤,两次析出,七次搅拌”2.加入“两次蒸馏水,三次NaCl溶液,一次酒精”三、实验小结方法步骤 加入物质 目的 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水 3.溶解细胞核内的DNA 2 m1L 的NaCI溶液40mL 4.析出含DNA的黏稠物

6、蒸馏水 5.滤取含DNA的黏稠物 6.将DNA的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.过滤含DNA的NaCl 溶液 8.提取含有杂质较少的 DNA 冷却的95的酒精50 mL A:(1)向试管中加入0.015 molL 的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺试剂 9.DNA的鉴定 B:(1)向试管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL 二苯胺试剂 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂 溶解DNA 使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出 使含DNA的黏稠物被留在纱布上使含DNA的黏

7、稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含DNA的滤液中的杂质提取DNA A出现蓝色 B无变化2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响?1.在DNA的粗提取实验过程中,两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答：B答：前者是溶解DNA,后者是使DNA析出3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色4.提取鸡血中的DNA时,为什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取,关键是对杂质的去除,由于上清液是血液中的血浆部分,不含DNA,所以要除去上清液(含有蛋白质)。答：D5、关于、关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是法正确的是A、充分溶解、充分溶解DNA的盐溶液是的盐溶液是0.14mol/L的的NaCl溶液溶液B、实验中提取较纯净的、实验中提取较纯净的DNA利用了利用了