叶绿素的提取、分离和测定复习课程

1、叶绿素的提取、分离和测定一、叶绿素的提取、分离一、叶绿素的提取、分离（一）原理（一）原理 叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a a和和b b、胡萝卜素及叶黄素）。这些色素胡萝卜素及叶黄素）。这些色素均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用酒精或丙酮等提取。并可根据它们在不酒精或丙酮等提取。并可根据它们在不同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附剂上的吸附能力不同，将它们彼此分离剂上的吸附能力不同，将它们彼此分离开。开。二、叶绿素二、叶绿素a a和和b b含量的测定含量的测定（一）原理（一）原理 叶绿素叶绿素a a

2、、b b在长波方面的最大吸收峰在长波方面的最大吸收峰分别为为分别为为663663nmnm和和645645nmnm。 同时在该波长时叶绿素同时在该波长时叶绿素a a 、b b比吸收系比吸收系数数k k为已知，根据为已知，根据LambertBeerLambertBeer定律列出定律列出浓度浓度C C与光密度与光密度ODOD之间的关系式：之间的关系式：nODOD663663=82.04C=82.04Ca a+9.27C+9.27Cb bnODOD645645=16.75C=16.75Ca a+45.6C+45.6Cb bnC Ca a、C Cb b为叶绿素为叶绿素a a、b b的浓度，单位的浓度，单

3、位mg/L mg/L 解方程式得解方程式得nC Ca a=12.7OD=12.7OD663663-2.69OD-2.69OD645645nC Cb b=22.9OD=22.9OD645645-4.68OD-4.68OD663663nC Ct t=C=Ca a+C+Cb b=20.2D=20.2D645645+8.02D+8.02D663663( (二）步骤二）步骤n1 1、称取、称取0.50.5g g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆叶片，剪碎后置于玻璃匀浆器中加纯丙酮器中加纯丙酮5 5mLmL，研成匀浆，用研成匀浆，用80%80%丙丙酮酮1010mLmL洗匀浆器洗匀浆器，用用80%80%丙酮丙酮定容到

4、定容到2525mLmL，避光静置避光静置5 5minmin。用移液管吸取上面的绿用移液管吸取上面的绿色清液色清液1 1mLmL置于一大试管中，加入丙酮置于一大试管中，加入丙酮4 4mlml稀释，摇动试管，作测定用。稀释，摇动试管，作测定用。n2 2、测量光密度值、测量光密度值n取上述提取液取上述提取液以以80%80%丙酮作为空白对照，丙酮作为空白对照，于于663663及及645645nmnm下读取光密度值下读取光密度值三、实验结果三、实验结果n计算结果计算结果n代入公式求出各叶绿素的含量（单位代入公式求出各叶绿素的含量（单位mg/Lmg/L）n最后计算时需考虑稀释因子最后计算时需考虑稀释因子n叶绿素叶绿素a a含量（含量（mg/gmg/g鲜重）鲜重）= =C CA A* *5 5 * *2525* *2/1000 2/1000 = =0.25C0.25CA An叶绿素叶绿素b b的含量（的含量（mg/gmg/g鲜重