p基因在急性白血病的表达及临床意义实用教案

1、1研究背景研究背景研究目的研究目的2 23实验结果及讨论实验结果及讨论44 结结 论论5研究研究(ynji)方法方法第1页/共22页第一页，共23页。研究研究(ynji)(ynji)背景背景v白血病（白血病（leukemialeukemia）是一类造血干细胞的）是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病。目前，白血病的确切病因恶性克隆性疾病。目前，白血病的确切病因尚不明了，但肿瘤的发生均与肿瘤相关基因尚不明了，但肿瘤的发生均与肿瘤相关基因的异常表达密切相关，异常表达的肿瘤相关的异常表达密切相关，异常表达的肿瘤相关基因所产生的蛋白质由于不适当地模拟正常基因所产生的蛋白质由于不适当地模拟正常蛋白的生长作用方

2、式及细胞生长、分化紊乱，蛋白的生长作用方式及细胞生长、分化紊乱，而导致而导致(dozh)(dozh)肿瘤发生。如何提高白血肿瘤发生。如何提高白血病诊断及治疗水平，提高患者生存质量，一病诊断及治疗水平，提高患者生存质量，一直是医生十分关注的问题。直是医生十分关注的问题。第2页/共22页第二页，共23页。研究研究(ynji)(ynji)背景背景抑癌基因抑癌基因p53p53代谢代谢过程过程细胞细胞增殖增殖DNADNA转录转录细胞细胞生长生长一些肿瘤中，则有一些肿瘤中，则有其它的因素改变阻其它的因素改变阻断断p53p53的功能以促进的功能以促进肿瘤的发生肿瘤的发生p73p73基因基因P53P53抑癌机

3、制抑癌机制(jzh)(jzh)第3页/共22页第三页，共23页。 研究研究(ynji)(ynji)背景背景 p73 p73基因基因(jyn)(jyn)是是19971997年年KaghadKaghad等在筛选介导胰岛素信等在筛选介导胰岛素信号传递因子号传递因子(IRS21)(IRS21)时偶然发现的，定位于人类时偶然发现的，定位于人类1 1号染色体号染色体1p36.331p36.33。测序发现其序列与。测序发现其序列与p53p53基因基因(jyn)(jyn)有高度同源有高度同源性。性。 1p36 1p36是多种人类肿瘤基因是多种人类肿瘤基因(jyn)(jyn)缺失热点区域，且认为缺失热点区域，且

4、认为该区存在多个抑癌基因该区存在多个抑癌基因(jyn)(jyn)。由于其特殊定位及其与。由于其特殊定位及其与p53p53基因基因(jyn)(jyn)结构和功能的高度同源性，结构和功能的高度同源性，p73p73基因基因(jyn)(jyn)被认为可能是抑癌基因被认为可能是抑癌基因(jyn)(jyn)。 但有学者提出但有学者提出p73p73基因基因(jyn)(jyn)在肝癌、结肠癌、膀胱癌在肝癌、结肠癌、膀胱癌组织中表达明显增高，其表达水平与肿瘤恶性程度明显相组织中表达明显增高，其表达水平与肿瘤恶性程度明显相关。而且关。而且p73p73基因基因(jyn)(jyn)在不同肿瘤中表达水平差异很大，在不同

5、肿瘤中表达水平差异很大，显示了抑癌基因显示了抑癌基因(jyn)(jyn)和癌基因和癌基因(jyn)(jyn)的双重特性。的双重特性。第4页/共22页第四页，共23页。研究背景研究背景-p73-p73的作用的作用(zuyng)(zuyng)机制机制p73基因由于高甲基化而表达缺失。可能是高甲基化改变了基因构型，影响DNA特异序列与转录因子结合，使基因不能转录。低水平或低水平或失表达失表达过度过度表达表达癌基因作用(zuyng)抑癌基因作用(zuyng)c2Abl 酪氨酸激酶可使P73 蛋白的半衰期延长或蛋白磷酸化导致P73 蛋白过表达。发挥对细胞生长的抑制和凋亡作用。p73基因的缺失：p73基因

6、存在杂合性缺失（LOH）。第5页/共22页第五页，共23页。 研究研究(ynji)(ynji)背景背景- -相关肿瘤研究相关肿瘤研究(ynji)(ynji)软组织软组织肉瘤肉瘤血液系统血液系统恶性肿瘤恶性肿瘤乳腺癌乳腺癌宫颈癌宫颈癌膀胱癌膀胱癌肺癌肺癌(fi i)前列前列腺癌腺癌 在恶性肿瘤中，p73基因在不同类型(lixng)细胞的肿瘤中有不同的生物学行为，第6页/共22页第六页，共23页。研究研究(ynji)(ynji)目的目的检测成人急性白血病（检测成人急性白血病（AL）患者）患者p73基因基因mRNA的表达情况的表达情况,从而探讨从而探讨p73基因与白基因与白血病发病、复发及预后的关系

7、，为成人血病发病、复发及预后的关系，为成人AL的临床治疗的临床治疗(zhlio)提供更有意义的指导提供更有意义的指导作用。作用。第7页/共22页第七页，共23页。 研究方法及实验研究方法及实验(shyn)技术技术 选取选取20082008年年6 6月月-2009-2009年年3 3月期间在山西医科大学第二月期间在山西医科大学第二医院及山西省肿瘤医院血液科住院的初治及复发或难医院及山西省肿瘤医院血液科住院的初治及复发或难治急性白血病患者治急性白血病患者100100例，经临床及骨髓涂片细胞例，经临床及骨髓涂片细胞(xbo)(xbo)形态学、细胞形态学、细胞(xbo)(xbo)化学检查，按张之南化学

8、检查，按张之南主编血液病诊断及疗效标准确诊。主编血液病诊断及疗效标准确诊。 包括初发未治包括初发未治6464例，复发或难治例，复发或难治3636例，按例，按FABFAB分型，分型，急性髓细胞急性髓细胞(xbo)(xbo)白血病白血病(AML)80(AML)80例例(M2 ,12(M2 ,12例；例；M3 ,35M3 ,35例；例；M4 ,18M4 ,18例；例；M5 ,9M5 ,9例；例；M6 ,6M6 ,6例例) )，急性淋，急性淋巴细胞巴细胞(xbo)(xbo)白血病白血病(ALL)20(ALL)20例。其中男例。其中男6060例，女例，女4040例，中位年龄例，中位年龄4040岁岁(9(

9、96565岁岁) )。对照组为。对照组为2020例非白例非白血病血病(NL)(NL)且骨髓象正常者。且骨髓象正常者。第8页/共22页第八页，共23页。研究研究(ynji)方法及实验技方法及实验技术术AMLAML疗效疗效(lioxio)(lioxio)标准标准第9页/共22页第九页，共23页。研究方法及实验研究方法及实验(shyn)技术技术琼脂糖凝胶电泳计算p73 mRNA在AL细胞及不同细胞类型中表达的阳性率及强度，结合临床分型、治疗效果(xiogu)及预后进行统计学分析确诊确诊AL患者患者100例及例及正常正常(zhngchng)对照对照者者20例骨髓标本例骨髓标本2ml随机引物逆转录合成c

10、DNA；AMV逆转录酶系合成TRizol一步法提取总RNART反转录第10页/共22页第十页，共23页。研究方法及实验研究方法及实验(shyn)(shyn)技术技术 采用采用SPSS13.0SPSS13.0统计软件统计软件(run jin)(run jin)对结果对结果进行统计学分析。进行统计学分析。 对对p73 mRNAp73 mRNA在在ALAL细胞及不同细胞类型中表达细胞及不同细胞类型中表达的阳性病例组与正常对照组阈值进行的阳性病例组与正常对照组阈值进行t t检验，检验，不同类型不同类型ALAL阳性率比较进行阳性率比较进行X2X2检验，阳性表达检验，阳性表达强度进行单因素方差分析。强度进

11、行单因素方差分析。 P0.05 P0.05时说明差异具有统计学意义。时说明差异具有统计学意义。第11页/共22页第十一页，共23页。实验实验(shyn)(shyn)结果及讨结果及讨论论 M 1 2 3 4 5 6 M注：M（marker）；1（阴性对照）；26（AL中p73 mRNA的表达）； p73扩增产物(chnw)长度为390bp图3 RT-PCR检测p73 mRNA表达第12页/共22页第十二页，共23页。实验实验(shyn)(shyn)结果及讨结果及讨论论 表表2 不同类型不同类型(lixng)AL及对照组细胞中及对照组细胞中p73 mRNA的表达的表达组别组别总例数总例数阳性例数阳

12、性例数p73表达阳性率表达阳性率(%)p73/-actinAL1004949.00.630.65ALL20420.00.420.12AML80453M212650.00.460.22M3351851.40.730.46M4181055.60.530.44M59777.81.441.13M66466.70.620.48NL20420.00.430.26一般预后一般预后5622不良预后不良预后282071.41.820.48第13页/共22页第十三页，共23页。实验结果实验结果(ji gu)(ji gu)及讨及讨论论 0 00.50.51 11.51.

13、52 22.52.53 3ALALALLALLANLLANLLM2M2M3M3M4M4M5M5M6M6NLNL一般预后一般预后 不良预后不良预后图图4 p734 p73基因蛋白基因蛋白在在不同类型不同类型ALAL及对照组细胞中及对照组细胞中表达表达的强度比较结的强度比较结果果 第14页/共22页第十四页，共23页。实验实验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论 AML细胞(xbo)p73 mRNA表达阳性率56.3%ALL细胞(xbo)p73 mRNA表达阳性率20.0%1 1. . p73 p73基因的失表基因的失表达在达在ALLALL中是高频率中是高频率发生事件，在其形成发生事件，在

14、其形成中起着抑癌基因作用。中起着抑癌基因作用。 在在AMLAML中，中，p73p73基基因表现为过度表达，因表现为过度表达，起着癌基因样作用。起着癌基因样作用。第15页/共22页第十五页，共23页。实验实验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论 2.2.分别比较分别比较ALLALL及及AMLAML患者一般预后组与不良预后组患者一般预后组与不良预后组p73 mRNAp73 mRNA表达表达(biod)(biod)率及强度的差异，均具有统计学意义率及强度的差异，均具有统计学意义(P0.05) (P0.05) 。这说明了这说明了p73p73基因是基因是ALAL中一个新的生中一个新的生物学预后因

15、子物学预后因子这也证实了尽管这也证实了尽管ALL组与组与AML组患者初诊组患者初诊时及治疗后时及治疗后p73基因的表达情况不同，但基因的表达情况不同，但都与其预后有密切关系都与其预后有密切关系第16页/共22页第十六页，共23页。结结 论论p73p73基因在不同类型白血病发病及预后中起的作用基因在不同类型白血病发病及预后中起的作用(zuyng)(zuyng)不同：不同： p73 p73基因在基因在ALLALL患者初诊时有较高患者初诊时有较高的阴性表达率，并在病情缓解后转为阳性表达，起着的阴性表达率，并在病情缓解后转为阳性表达，起着抑癌基因样作用抑癌基因样作用(zuyng)(zuyng)；与之相

16、反，在；与之相反，在AMLAML患者患者中中p73p73基因高水平表达，且其表达水平随病情的缓解基因高水平表达，且其表达水平随病情的缓解而降低，表现为癌基因样作用而降低，表现为癌基因样作用(zuyng)(zuyng)。第17页/共22页第十七页，共23页。 结结 论论p73p73基因的表达在急性白血病的发病中均起着基因的表达在急性白血病的发病中均起着重要作用，且多与较差的预后特征、对化疗反重要作用，且多与较差的预后特征、对化疗反应差、早期治疗失败、较短的生存期有关。应差、早期治疗失败、较短的生存期有关。通过动态检测通过动态检测ALAL患者患者p73p73基因的表达情况，从基因的表达情况，从而尽

17、早决定是否需要使用更有效的治疗手段而尽早决定是否需要使用更有效的治疗手段( (如骨髓移植如骨髓移植BMT)BMT)或针对或针对p73p73基因进行基因治疗，基因进行基因治疗，有希望有希望(xwng)(xwng)提高急性白血病的治愈率。提高急性白血病的治愈率。第18页/共22页第十八页，共23页。1李陕区李陕区,崔大祥崔大祥(d xin),刘变英等刘变英等.结肠癌中结肠癌中P73基因改变的意义基因改变的意义J.第四军医大学第四军医大学学报学报,2000; 21:314-316.2 Liu M,Taketani T,Li R ,et al.Loss of p73 gene expression i

18、n lymphoid leukemia cell lines is associated with hypermethylationJ.Leuk Res,2001,25(6):443.3 Roman Gomez J,Jimenez-Velasco A,Castillejo JA,et al.Promoter hypermethylation of Related genes: a strong independent prognostic factor in acute lymphoblastic leukemiaJ. Blood,2004,104(8):2492-2498.4 Bell HS

19、,Dufes C,OPrey J,et al.A p53-derived apoptotic peptide derepresses p73 to cause tumor regression in vivo.J.J Clin Invest,2007,117(4):1008-1018.5 Chi SG,Chang SG,Lee SJ,et al.Elevated and biallelic expression of p73 is associated with progression of human bladder cancerJ.Cancer Res,1999;59:2791-2793.

20、6 Mendrysa,S. M.,K. A. OLeary, M. K. McElwee, et al. Tumor suppression and normal aging in mice with constitutively high p53 activityJ.Genes Dev.2006.20:16-21.7何勇何勇,童玲童玲,范士志范士志,等等.p73基因与人类肿瘤的研究进展基因与人类肿瘤的研究进展J.肿瘤防治杂志肿瘤防治杂志,2005,12 (7):551-554.参考文献参考文献第19页/共22页第十九页，共23页。8刘明利刘明利,李蓉生李蓉生,林泰秀林泰秀,等等. 儿童急性淋

21、巴细胞白血病患者儿童急性淋巴细胞白血病患者p73基因表达的研究基因表达的研究J.中华血液学杂志中华血液学杂志,2000,23(5):242.9殷小成殷小成,曹励之曹励之. p73基因失活在儿童急性淋巴细胞白血病发病和预后的意义基因失活在儿童急性淋巴细胞白血病发病和预后的意义J.实实用癌症杂志用癌症杂志,2003,18(3):240-244.10 Mingli liu.Taketani Loss of p73 gene exp ression in lymphoid leukemia cell lines is associated with hypermethylationJ.Leukemia Research,2000,25(6):441-447.1