2.2动物细胞融合与单克隆抗体的制备

1、 动物细胞融合与单克隆抗体 教案郓城一中 杨雪瑞教学目标：举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。教学重点：单克隆抗体的制备和应用。教学难点：单克隆抗体的制备过程。教法：读书指导法、比较归纳法、反馈校正法学法：自学读书法、讨论法、题组练习法教学过程：一、复习旧知识 导入新课今天我们学习动物细胞融合与单克隆抗体，我们现对相关的旧知识进行复习，同学们做一下学案上的复习题（1、抗体是由 细胞接受抗原刺激增殖分化产生的 细胞分泌的，具有 性，即一种抗体只能识别中和一种抗原。 2、常用诱导植物细胞融合的方法有物理方法和化学方法，物理方法包括 、振荡、 等，化学方法一般是用 (简称 )作为诱导剂来诱

2、细胞融合。3、写出植物体细胞杂交技术的流程图）。（两名学生板演复习题答案）我们看一下黑板上两位同学的答案是否正确。同学们可以与课件上的正确答案对比一下（改正）。在各个过程中，从去壁到形成杂种细胞形成应用的是植物体细胞融合技术，复习了植物体细胞的融合后，我们再来看一下动物细胞的融合过程。二、讲授新知识（一）、动物细胞融合：（课件显示动物体细胞融合的过程）大家认真观察这幅示意图，与植物体细胞的杂交过程做一下比较。看一下两者的原理、过程和诱导方法是否相同。（约一分钟后）（单独提问）植物细胞融合的原理是什么？（膜具有流动性）与动物细胞融合的原理相同吗？（相同）那动物细胞融合与植物细胞融合的过程和诱导方

3、法也相同吗？有没有不同点，（动物细胞融合和植物体细胞杂交的技术方法基本相同，但植物细胞杂交时需要先去细胞壁，不能用灭活的病毒作诱导剂，而动物细胞融合过程不需要去细胞壁，还可以用灭活的病毒作诱导剂。）能不能用未灭活的病毒作诱导剂？（不能）为什么？魏春英（因为不灭活的细胞会感染动物细胞，对其带来损伤）通过旧知识的比较，我们很容易的理解了动物细胞融合，这样我们就完成了本节课的第一个学习目标：理解动物细胞融合的原理和过程。（课件显示教学目标）动物细胞融合技术已经广泛应用于细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等领域，但它最重要的应用就是制备单克隆抗体。下面我们要完成第二个学习目标（课件显示）：举例说

4、出单克隆抗体的制备和应用。（二）、请单克隆抗体：同学们在阅读课本52页的最后一自然段弄清两个问题：1、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？2、B淋巴细胞有什么特点？（课件显示问题）这两个问题的答案在教材上找到了吗？（单独提问）（1、传统的抗体生产方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。这种生产抗体的方法产量和纯度都很低，而且制备的抗体特异性差）同学们背下来了吗？（没有）如果考试时卷面上出现了这个问题，你写出的答案能像教材上描述的一样准确吗？（不能）那我们现在就把教材上的叙述记下来吧！（12分钟后）现在我们来检测一下同学们是否记住了，同学们看课件上的填空，我们

5、一起来答（课件显示本问题的填空）第二个思考题（单独提问）（2、B淋巴细胞能产生抗体，但每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异的抗体。）很好，正是由于B淋巴细胞的这个特点，所以要想获得大量的单一抗体，必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，也就是通过克隆形成细胞群，这些细胞是由同一个细胞无性繁殖得到的，有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体，这就是单克隆抗体在体外培养的条件下，B淋巴细胞能无限增值吗？（不能）那怎样才能得到由单个B淋巴细胞无限增殖的得到的细胞群呢？（学生可能答不出来，可能答出一小部分）这就应用到动物细胞融合的知识，我们来看一下科学家米尔斯坦和柯勒是怎样做的。大家结合课件所演示的问题（课件显

6、示1.两位科学家极富创造性的设想是什么？2.单克隆抗体制备的基本过程如何？） Xxx来回答第一个思考题（1.如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得的融合细胞既能大量增殖，又能产生足够量的特定抗体。） 正是科学家先有了这个极富创造性的设想，然后经过努力把它变成了现实。那么科学家是怎样获得的B淋巴细胞（对小鼠注射抗原，使其发生免疫反应，再从其体内获得B淋巴细胞.）如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起，又有几种融合方式？只考虑两个细胞间的融合。（有B淋巴细胞间的融合，骨髓瘤细胞之间的融合以及。）这三种融合方式形成的杂交细胞中哪一种是我们所需要的？（B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合

7、形成的杂交细胞）我们把这种细胞叫做杂交瘤细胞。那么,杂交瘤细胞筛选出来？(先用选择性培养基，只有杂交瘤细胞能在选择培养基上生存)筛选出的杂交瘤细胞一定能产生抗体吗？（不一定）这就需要我们检测一下那个细胞能产生特异性抗体，并通过再一次的筛选把能产生单克隆抗体的细胞选出来。然后就可以对这种杂交瘤细胞进行克隆化培养了。)（单独提问）科学家是如何利用杂交瘤细胞来生产抗体的？(第一种方法是：将杂交瘤细胞在体外大规模培养，从细胞培养夜中就能获取大量的单克隆抗体；第二种方法是：把杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖，再从小鼠腹腔中提取单克隆抗体)完全正确，正是由于这两位科学家的杰出贡献，他们于1984年双双获得诺

8、贝尔生理学或医学奖。如果我们把单克隆抗体的制备与动物细胞融合过程比较一下可以发现，单克隆抗体的制备就是一种特殊动物细胞融合，区别就是进行融合的细胞之一，B淋巴细胞必须经过抗原的处理，实际上，是浆细胞与骨髓瘤细胞的融合）下面，同学们合上教材试着在学案相应位置写一下单克隆抗体的制备过程。（学生填写学案，教师巡视检查）下面，同学们看一下这几位同学填写的是否正确（实物投影几位学生的学案）接下来，我们把这节课涉及到的几个类似的生物技术列表比较一下。（课件显示表格）（30秒后，两名学生回答表格内容）最后通过课件上的几个问题总结一下单克隆抗体的制备这一重点内容。（课件显示几道相关习题） 关于单克隆抗体的应用

9、，请大家阅读教材5455页，并填写相应的学案。Xxx来说一下学案的答案。三、课堂小结 学习方法指导本节课我们在复习植物细胞融合的基础上，通过比较很快就掌握了动物细胞的融合，又通过与动物细胞融合相比较使单克隆抗体的制备之一难点变得容易理解。也就是说，我们在学习是注意新旧知识的连接，注意比较归纳，就会有事半功倍的效果，希望同学们在平时自习时，也能用到这种学习方法。四、课堂定时训练下面我们做一下学案上的题组联系，巩固一下本节内容。（学生完成后核对答案，对个别问题做简单讲解）五、布置课后作业学案： 动物细胞融合与单克隆抗体 学案一、相关知识复习：1、抗体是由 细胞接受抗原刺激增殖分化产生的 细胞分泌的

10、，具有 性，即一种抗体只能识别中和一种抗原。 2、常用诱导植物细胞融合的方法有物理方法和化学方法，物理方法包括 、振荡、 等，化学方法一般是用 (简称 )作为诱导剂来诱细胞融合。3、写出植物体细胞杂交技术的流程图。 二、知识点整理：、动物细胞融合1、概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞融合形成一个细胞的过程。2、结果：融合后的杂交细胞是具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞。3、原理：膜的流动性。、单克隆抗体1、 阅读教材52页53页一段，并思考：、第一个问题传统的抗体生产方法及缺陷是什么？、B淋巴细胞有什么特点？2、单克隆抗体的制备给小鼠注射 从 中分离B淋巴细胞骨髓瘤细

11、胞灭活病毒诱导融合种细胞团选择培养基瘤细胞克隆检测杂交瘤细胞注入培养培养单克隆抗体培养3、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的优点： 强、 高、产量大。、应用:、作为诊断试剂：准确识别各种 物质，并跟一定 发生 结合，具有 、 、 、 的优点。 、用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗 ,有单独使用的，也有与 、 、 结合制成“生物导弹”。 三、题组练习：A组：必做1、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是 （ ）诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不相同 所采用的原理完全相同 都能形成杂种细胞A. B. C.D.2、动物细胞融合的目的中最重要的是 ( ) 3、单克隆抗体是由下列哪种细胞产生

12、的 （ ）A.B淋巴细胞 B.T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D.杂交瘤细胞4、关于单克隆抗体的说法，正确的是 （ ）免疫过的淋巴细胞产生新的抗体 单克隆抗体制备的过程中至少经过两次筛选 单一的抗原进入动物体内后，从动物体内提取的抗体化学性质单一，特异性强，灵敏度高，可用于防病、治病等。A、 B、 C、 D、5、诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是 （ ） A特异性强、灵敏度高 B与抗癌药物结合可制成“生物导弹” C体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体D由效应B细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌B组：选做6、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是（ ）B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞B淋巴细胞自身融合细