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1、会计学1全血全血DNA的提取及电泳的提取及电泳一、全血DNA的提取第1页/共34页第2页/共34页第3页/共34页第4页/共34页第5页/共34页 提取WBC取1ml 全血等体积3%明胶37静置，510min取上清3000r/min 离心 ，5min弃上清颠倒混匀溶液颜色均一溶液颜色上下分层沉淀颜色为红色第6页/共34页加入2ml TES加10滴10%SDS轻轻敲击管底震荡混匀颠倒混匀溶液全部变为粉红色溶液颜色变暗第7页/共34页加等体积加等体积Tris饱和酚饱和酚颠倒混匀，50次， 3000rpm，离心5min取下层酚溶液，混匀后溶液变为均一的棕色取上清取上清加等体积加等体积氯氯仿：异戊醇仿

2、：异戊醇（24:1）将上清移入将上清移入试管试管颠倒混匀，50次3000rpm，离心5min混匀后溶液变为均一的乳白色上清夜（DNA）蛋白质层 酚溶液上清夜（DNA）蛋白质层 氯仿溶液第8页/共34页加2.5倍无水乙醇吸出絮状沉淀到1.5mlEP管挥干至无色液体通风橱内放置5min加入100 ddH2O溶解缓慢加入后，上下均为无色，但有分层面；吸取上层乙醇，轻轻吹打下层（油状）混匀。无水乙醇与水溶液交界面特点： 1.气泡 2.白色絮状沉淀第9页/共34页1.原理第10页/共34页第11页/共34页第12页/共34页DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。分子的迁移速度与其相对分子量成反比。M

3、 1 2 3 4 5第13页/共34页第14页/共34页第15页/共34页示踪染料：示踪染料： 有致癌性有致癌性: EB， ，吖啶吖啶橙等橙等; 无毒的染料：无毒的染料：goldview I核酸染料等核酸染料等.示踪染料和分子量示踪染料和分子量标标准参照物准参照物EBgoldview第16页/共34页第17页/共34页第18页/共34页.实验仪实验仪器器第19页/共34页凝胶成像系统凝胶成像系统第20页/共34页第21页/共34页第22页/共34页DNA: 8l6loading dye: 2lTotal : 10l 分别吸取上述体积的DNA和6loading dye，至透明胶布的光滑表面，用移液器吹打均一。第23页/共34页第24页/共34页第25页/共34页第26页/共34页第27页/共34页第28页/共34页第29页/共34页第30页/共34页第31页/共34页第32页/共34页 制备凝胶时，倒胶的温度不可太低，否则凝固不均制备凝胶时，倒胶的温度不可太低，否则凝固不均匀；速度也不可太快，否则容易出现气泡。匀；速度也不可太快，否则容易出现气泡。 2.2.胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄坏点样孔。上，不要弄坏点样孔。 3.3.点样时枪头下伸

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