蛋白质实验技术

1、会计学1蛋白质实验技术蛋白质实验技术n1923年，班丁(FGBanting)和麦克劳德(JJRMac1eod)因为发现胰岛素和使用胰岛素治疗糖尿病而荣获了医学和生理学诺贝尔奖；n1955年，维格纳奥德因为合成多肽激素催产素而获得诺贝尔化学奖；n1958年，桑格因为分离和确定胰岛素的氨基酸组分的构成而荣获诺贝尔化学奖；n1972年，安芬森(CBAnfinsen)等人因为发现氧化被还原的核糖核酸酶肽链能恢复活力而获得诺贝尔化学奖；n1984年，梅里菲尔德(RBMerrifleld)因为发明固相合成方法而获得诺贝尔化学奖。n与糖尿病的关系n与肿瘤的关系Mueckler, M. et al. Scie

2、nce 229, 941945 (1985) Amann, T. & Hellerbrand, C. Expert Opin. Ther. Targets 13, 14111427 (2009) n葡萄糖是地球上各种生物最重要、最基本的能量来源，也是人脑和神经系统最主要的供能物质。 n须依靠转运蛋白这个“运输机器”来完成 5 5，运动功能，运动功能肌肉收缩，细菌鞭毛肌肉收缩，细菌鞭毛6 6，激素，激素胰岛素，生长激素胰岛素，生长激素7 7，防御（免疫），防御（免疫）抗体（免疫球蛋白）抗体（免疫球蛋白）8 8，接受、传递信息，接受、传递信息视觉，味觉视觉，味觉9 9，调节生长发育，调节生

3、长发育蛋白质主要功能导致：婴儿癫痫发作、Fanconi-Bickel综合症、糖尿病、肥胖 Thorens, B. & Mueckler, M. Glucose transporters in the 21st Century. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 298, E141E145 (2010) Macheda, M. L., Rogers, S. & Best, J. D. Physiol. 202, 654662 (2005) 结构解析结构解析n酵母表达系统酵母表达系统 昆虫表达系统昆虫表达系统 哺乳动物细胞表达系统哺乳动物细胞表达

4、系统n表达的蛋白具有正常的表达的蛋白具有正常的活性、构象活性、构象n技术难度较大、耗时、技术难度较大、耗时、耗资耗资n大肠杆菌表达系统大肠杆菌表达系统n实验技术简单，时间实验技术简单，时间较短，费用低，系统较短，费用低，系统比较完备比较完备n不能有效地对重组蛋不能有效地对重组蛋白质进行修饰加工，白质进行修饰加工，易形成包涵体易形成包涵体原核细胞表达系统原核细胞表达系统 真核细胞表达系统真核细胞表达系统表达系统2013年清华大学的颜宁教授课题组报道了人的葡萄糖转运蛋白GLUT1-4在大肠杆菌中的同源蛋白XylE的晶体结构，并且运用生化手段对其工作机理进行了研究。离心机操作注意事项离心机操作注意事

5、项1、确认电源的正确连接，将灭菌锅右侧的电源开关打开，然后按下“POWER ON/OFF”键开机。 2、确认锅内压力为0的情况下，轻轻向下按灭菌器盖的把手，脚踏盖锁解除踏板，把盖打开。向灭菌锅内注水(蒸馏水)直到看到水漫过底盘中心孔的横杠（大约需要2.0升水）。 3、放置待灭菌的物品，盖上盖子到磁封条封好，将盖锁住。注意不要过满，不要有单独的小型颗粒。4、选择运行模式（一般均选择普通灭菌模式，选其他模式需要请示安全员）。5、启动灭菌程序：（1）确定放气瓶内的水位在“HIGH”和“LOW”之间；（2）确定排水瓶内的水位足够低，不会碰到排气管的顶端； （3）按“START/STOP”键启动灭菌程序。7、灭菌完成后，温度降至90度以下（锅内压力为0）的情况下才能打开盖子，拿出灭好的物品。8、按“POWER ON/OFF”键断开电源。1.在压力到达0 MPa之前，不打开灭菌器盖。2.压力表出现异常时，应停止使用。3.打开灭菌锅锅盖时，应充分注意来自灭菌室内的蒸气，防止烫伤。4.放置灭菌物品时要注意不要碰触损伤内胆中的温度探头。5、当放气瓶中的水位高于“HIGH”标记时，在灭菌前将水倒出至“LOW”标记。定期更换水。离心机操作注意事项5、启动灭菌程序：（1）确定放气瓶内的水位在“HIGH”和“LOW”之间；（2）确定排水瓶内的水位足够低，不会碰到排气管的顶端