荧光定量PCR的原理及临床应用学生讲课

1、会计学1荧光定量荧光定量PCR的原理及临床应用学生讲的原理及临床应用学生讲课课功夫功夫耳：认真听老师的说明和讲解耳：认真听老师的说明和讲解看：仔细看老师的操作看：仔细看老师的操作问：有疑问要多提问，多讨论问：有疑问要多提问，多讨论心：要用心去思考心：要用心去思考日月：要每天每月坚持做到日月：要每天每月坚持做到5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT55CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5加热加热5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGA

2、CGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT降温降温5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGAGGTGACGGAGAG GGA

3、CTCGACACT恒温恒温前前15个循环荧光信号的均值，可个循环荧光信号的均值，可手动调节选择手动调节选择默认是第默认是第315个循环的荧光信号的标个循环的荧光信号的标准偏差的准偏差的10倍，也可手动调节倍，也可手动调节扩增过程中，产物的荧光信号达到设定的阈值扩增过程中，产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环数时所经过的扩增循环数ThresholdBaselineCt value荧光强度荧光强度Rn扩增循环数扩增循环数对数增长期对数增长期左图为左图为5个数量级的标准品扩增后得到的荧光曲线，个数量级的标准品扩增后得到的荧光曲线，右图以右图以Ct值为纵坐标，值为纵坐标，lgXs为横坐标，可

4、计算得出标准曲线为横坐标，可计算得出标准曲线FQ10nmFFluorophore,荧光基团荧光基团QQuencher，淬灭基团淬灭基团FQ10nm（12 /3会引起双链之间会引起双链之间氢键解离而变性氢键解离而变性 功夫功夫5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT降温降温5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGAGGTGACGGAGAG GGACTCGACACT恒温恒温气溶气溶胶污胶污染物染物50 2min， 95 灭活加入加入UNG酶酶4放放置或用置或用于于PCR振荡混匀振荡混匀510