28-2ApoB设计开发方案

1、长沙海润生物技术有限公司泗润VN5海润斯团I G 曰 U Z U U LJ P设计开发方案编号：HR-SHSJ0028 项目名称载脂蛋白B测定试剂盒（免疫比浊法）（简称：ApoB）血浆脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白,主要分A、1 C、D E五类，主要在肝（部.分在小肠）合成，载脂蛋白是构成血浆脂蛋白的重要组分。基本功能是运载脂类物质及稳定脂蛋白的结构，某些载脂蛋白还有激活脂蛋白代谢酶、识别受体等功能。按ABC系统命名。ApoB在肝脏和小肠粘膜上皮细胞合成。是LDL受体的配体，其负责 LDL在体内的清理、参与VLDL的合成分泌、向组织运输脂类和胆固醇等。故ApoB反映了富含甘油三酯的极低密度脂

2、蛋白胆固醇、中间密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等致动脉硬 化脂颗粒的数目，可更衣?的反映小而密的LDL-C的数量，代表致动脉硬化的因素。血清中APOB勺正常彳！为（1.00-1.76）g/L（各医院的测试方法不同，参考值不完全相同）。1）冠状动脉粥样硬化性心脏病 冠状动脉粥样硬化性心脏病 （Coronary Atherosclerotic heart disease CHD）是由多种遗传因素与环境因素共同作用所致，使冠状动脉呈现粥样硬化的一种疾病，目前 已成为威胁当代人类健康及生命的重要疾病。既往针对冠心病相关危险因素及预防进行 了大量的研究，明确与冠心病发病及预后相关的因素中，已公认血

3、脂异常是主要的危险因素。早期研究主要集中在脂蛋白中脂质成分，几乎所有降脂治 疗的临床指南均主要基于血浆胆固醇水平制定。然而携带胆固醇的LDL具有不稳定性，产品概述常出现与实际病人测量不一致的情况。1998年Williams研究认为血浆ApoB是冠状动脉粥样硬化风险度的良好指标，血浆ApoB水平升高与冠心病密切相关，因此血浆ApoB水平与冠状动脉病变程度的关系口益受到人们的关注。Faraj等对肥胖妇女的研究中将ApoB与传统因子比较发现其更能早期反应炎症的发生，推测ApoB可能作为冠心病和糖尿病的早期风险因子。Mugii等对611名2型糖尿病白种人患者的研究发现，ApoB与冠状动脉钙化有显著相关

4、性，而LDL-c没有特异性差异，研究认为在2型糖尿病中，ApoB表达水平能特异性的作为评估动脉粥样硬化和心血管疾病的风险因子。Motta等对意大禾J 3288例老年人的回顾性分析发现ApoB是动脉粥样硬化的诊断指标，但是并不能单独作为预防心脑血管并发症的风险因子。故最近人们更加关注 ApoB/ApoAl比值与心血管疾病的相关T研究。Talmud等对2508例男性随访 6年的研究结果显示：TC, TG, ApoB, ApoAl,ApoB/ApoAl比值、LDL-c, HDL-c均能预测冠状动脉事件的发生，但ApoB/ApoAl值的预测能力最弓虽。一个超过170 000瑞典人的前瞻性心血管流行病学

5、研究 （AMORIS研究）显示作为脂蛋白相关的血管疾病危险总结指数，ApoB/ApoAl比值优于任一项胆固醇比值，是所有缺血性事件最强最特异的指标，Goswami等对100名患有冠脉疾病患者与100名正常对照组一比较发现，在鉴定冠脉疾病风险因子中ApoB/ApoAl比值明显优于TC/HDL, TC-HDL/HDL,LDL,TC/HDL ,研究指出 ApoB/ApoAl比值可以替代其他脂质比值来评估冠脉疾病患者 ApoAl , ApoB/ApoAl 比值、LDL-c, HDL-c均能预测冠状动脉事件的 发生，但ApoB/ApoAl值的预测能力最强。故今后 ApoB/ApoAl比值可能对于冠心病患

6、病 风险及其预后具有更高的预测价值。2）高血压高血压的发病的机理很多.其中脂质代谢紊乱是其病因之一。高血压时，ApoAl下降,ApoB明显升高，ApoAl/ ApoB比值明显下降，此三项指标均与正常对照组差异有显著性， 相关分析结果表明与 ApoAl与HDL ApoB与LDL具有显著相关性，ApoA1/ApoB与TC HDL LDL相关性也较显著。3）糖尿病糖尿病患者不仅空腹血糖明显增高，而且存在并发心血管疾病的危险因素一般情况 下，糖尿病患者 ApoB升高（与正常对照组差异有显著性 ），ApoAl及ApoAl/ ApoB下降， 并且随着病史的延续而有逐渐加重的趋势糖尿病患者常伴有心脑并发症及

7、视网膜病变， 因此ApoAl和ApoB测定对并发症的诊断、预后有一定的参考价值。4）肝脏疾病肝脏是Apo代谢的中心器官，ApoAl、ApoB100由肝脏合成，当肝脏损害时，其合成 功能降低，因而血清中ApoAl、ApoB含量下降，其下降程度与肝细胞损害程度成正相关。 一般情况下患急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、胆道梗阻时ApoAl明显下降（PV0.05），患胆适梗阻、肝硬化时 ApoB明显下降（PV0.05）,而患急、慢性肝炎时 ApoB下降，但与正 常对照组比较差异无显著性。5）肾病在肾病患者中 ApoAl、ApoAl/ ApoB均明显低于健康人（Pv0. O5）, ApoB在男 性患者有明显增

8、高（PV 0.05）。在女性患者中升高不显著.但女性患者的ApoA1/ApoB较正 常对照组差异有显著性，说明肾脏疾病患者中抗动脉粥样硬化因子降低，而致病因子升 高，因此对肾脏疾病的诊治进程中，应早期观察Apo的变化，在治疗原发病的同时，及时采取相应预防措施，消除或降低引起心血管合并症的危险因素，延长患者的生存时间。对于ApoB的检测，暂时还没有决定性的方法，在临床上，ApoB常规测定方法主要为各种免疫化学方法，如单向免疫扩散法、电免疫分析、免疫浊度法等。其中，比浊法 为最常用的方法，简单快速，可以自动化批量分析，目前，国内外生成的试剂盒大多采 用此法，其原理为在适宜的条件下，样本中Apo B

9、与其相应抗体相遇，形成抗原 -抗体复合物，产生一定浊度。该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。可利用 校准浓度和其生成的浊度在340nm处的吸光度建立吸光度与浓度的校准曲线，从而计算出样本中Apo B的含量。©长沙海润生物技术有限公司泗润VfiUI引用标准 和规范GB/T 191-2009包装储运图示标志YY/T 0466.1-2009医疔器械用于医疔器械标签、标记和提供信息的符号第1部分GB/T 26124-2011临床化学体外诊断试剂（盒）全国临床检验操作规程（第 3版）体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）国食药监械2007229号体外诊断试剂注册管理办

10、法（试行）国食药监械2007240号体外诊断试剂临床研究技术指导原则国食药监械2007240号体外诊断试剂说明书编写指导原则国家食品药品监督管理局令第10号医疔器械说明书、标签和包装标识管理规定产品构成试剂盒由液体双试剂组成试剂1主要成分：三羟甲基氨基甲烷、PEG 600R曲拉通X-100等。试剂2主要成分：抗人 ApoB抗体、三羟甲基氨基甲烷等。预期用途本试剂盒用于体外定量测定人体血清中载脂蛋白B （ApoB）的含量，临床上主要用于评价心血管疾病风险。主要技术参数或指标1、试剂空白：试剂空白吸光度A空白W0. 200 （37C,光径1cm, 340nm）,2、分析灵敏度：浓度为 1.10g/

11、L时，吸光度差值 AA>0.300;3、准确度：质控品测试，测定结果在质控范围内；4、精密度：重复性 CV （% W5%批间差w 8%5、线性范围：在（0.2-2.5 ） g/L线性范围内，r >0.990 o在0.6-2.5 ） g/L范围内 的相对偏差不超过 15%测定结果为（0.2-0.6 ） g/L时的绝对偏差不超过 0.09g/L 。6、稳定性：原包装试剂盒在2c8c密闭避光贮存，有效期为 12个月。开瓶后，28 c避光储存可稳定 2周。检验原理本试剂盒采用免疫比浊法，在适宜的条件下，样本中Apo B与其相应抗体相遇，形成抗原-抗体复合物，产生一定浊度。该浊度的高低在一定

12、量抗体存在时与抗原的含量成 正比。可利用校准浓度和其生成的浊度在340nm处的吸光度建立吸光度与浓度的校准曲线，从而计算出样本中 Apo B的含量。实施方案本项目开发实施计划周期为：2013年07月01日起2015年09月30日止，具体进度安排如下：1、2013年07月01日8月30日完成主要原材料的研究、筛选与采购工作。2、2013年09月05日前完成主要原材料的验收检验工作。3、2013年09月20日前完成配方和工艺的选定，样品小试及试生产验证工作。4、2013年11月20日前完成中试生产放大与验证工作。长沙海润生物技术有限公司I Q |海润*团5、2015年01月31日前完成分析性能评估、稳定性研究及机型验证。6、2014年11月10日2014年12月31日间完成注册及临床样品的生产与自检。7、2015年03月31日前完成产品的注册检验。8、2015年05月31日前完成产品的临床试验。9、2015年06月30日前完成注册申报资料