发酵液溶磷含量测定

1、发酵液溶磷含量测定SOP、目的：制订发酵液溶磷含量测定标准操作规程，确保发酵液中溶磷含编号共4页制订人制订日期审核人审核日期批准人批准日期颁发部门质量管理部实施日期量检测的准确。二、适用范围：适用于公司发酵液溶磷含量的检验。三、责任者：质量检验部QC操作人员四、内容：1、原理：正磷酸盐在酸性溶液中与铝酸钱反应生成磷铝酸钱,再用抗坏血酸使之还原成低价的铝 蓝，此蓝色溶液符合比尔定律。2、仪器：电子分析天平 分光光度计恒遍水浴竭 容量瓶刻度吸管3、磷标准溶液配置取一定量KH2PO4（A.R）置于称量瓶内,在105°C干燥至恒重,精密称取0.439克，加水 溶解，加入ImL硫酸,于100m

2、L容量瓶中定容至刻度，摇匀,即得lmg/mL隣示准溶液。 有效期10天。准确吸取上述磷标准溶液ImL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度,摇匀,即得 10ug/mL磷标准溶液。此标»溶液现酉砚用。4、定磷腳配制:将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%铝酸跌10%抗坏血酸按体积比1: 2: 1: 1的比 例混匀即得。现配现用。5、绘制磷标准曲线取7支试管,分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45°C水浴20分钟，冷却至室温，按照分光光度计校准使用SOP在660nm波长下测量其0D值。以溶液磷含量为纵坐 标，0D值为横坐标,绘制标准曲线，得到回归方程。管号012345610ug/

3、mL隣标准溶液(mL)00.51.01.52.02.53.0溶液磷含呈(ug )051015202530水(mL )3.02.52.01.51.00.50走隣试齐1(mL )3.03.03.03.03.03.03.0线性回归系数n 0.9996、样品磷含量检测取发酵液离心后上清液O.lmL，至试管中，加2.9 mL水，再加入定磷试剂3mL , 振摇，于45°C水浴20分钟，冷却至室温,以空白做对照,按照分光光度计校准使 用SOP于660波长测OD值。5计算：根据磷标准曲线以及稀释倍数计算磷含量(ug/mL)。五、文件发放范围公司生物产业部质量管理部1份,质量检验部2份,产业部相关领导

4、每人1份, 存档2份。六、变更记录:上版文件编号上版文件实施日期本次变更原因、依据及详细变更内容SL-QAD-248-002003.02.10采用新版格式和编号，增加文件修订内容SLB-QC-010-012006.08.19増加了定磷试剂的配制、标定方法、标定记 录，规定了定磷试剂的有效期磷标准曲线绘制记录批号:编号：SLB-QC-010-02R1隣不准溶液配制：（天平编号：）精密称取0.439克于105°C干燥至恒重的磷酸二氢钾,加水溶解”加入mL硫酸, 于lOOmL容量瓶中定容至刻度,摇匀,即得lmg/mL磷标准溶液。有效期10天配制人：配制日期：年 月 日准确吸取上述磷标准溶液

5、ImL于lOOmL容量瓶中,用水定容至刻度”摇匀， 10ug/mL磷标准溶液。现配现用。配制人：配制日期：年 月 日定磷试剂配制：将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%铝酸咬10%抗坏血酸按体积比2:1:1的比例混匀即得。现配现用。试卿取用数呈：3mol/L硫酸水2.5%铝酸披10%抗坏血酸配制人：配制日期：年 月 日磷标准曲线的绘制:(分洸洸度H编号:)取7支试管，分别按下表加入各讨充分摇匀,45°C水浴20分钟,冷却至室温,于660nm波长处分别测溶液OD值。以溶液磷含量为纵坐标,OD值为横百 标,绘制标准曲线,得到回归方程。管号012345610ug/mL隣标准溶液(mL)0

6、0.51.01.52.02.53.0水(mL )3.02.52.01.51.00.50走隣试齐1(mL )3.03.03.03.03.03.03.0测得溶液OD值为：管号0123456溶液磷含呈(ug )051015202530OD值线性回归方程(磷标准曲线)为：线性回归系数应n 0.999线性回归系数为：符合规定=1不符合规定口标定人：标定日期： 年 月曰复核人：日期：年 月 日发酵液溶磷检验记录编号：SLB-QC-010-02R2品名：批号：操作步骤：取发酵液离心上清液O.lmL至试管中,加2.9 mL水,加定磷试剂3mL ,振摇，于45°C水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照披照分光光度计校准使用SO