微生物的实验室培养_ ppt课件

1、微生物微生物的类群的类群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌如酵母菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的一切生微生物包含了除植物界和动物界以外的一切生物物无细胞构造无细胞构造真核细胞细菌、蓝藻细菌、蓝藻原核细胞原核细胞课题课题1 微生物的实验室培育微生物的实验室培育1.提供营养和条件提供营养和条件2.防止污染防止污染一.培育基：微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质1.根本成分：根本成分：思索：微生物思索：微生物“吃什么？吃什么？碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源

2、无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：CO2CO2、CO32-CO32-、HCO3-HCO3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NH4NH4、NO3-NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等等注：含注：含CHONCHON的有机物为异养型微生物提供碳源、氮源、能源的有机物为异养型微生物提供碳源、氮源、能源概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁衍的营养基质。一.培育基： 微生物生存的环境和营养物质1.根本成分： 碳源、氮源、水、无机盐2.特殊营养：特殊营养：维生素、

3、碱基等维生素、碱基等牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有3.pH、氧气的需求：、氧气的需求：4.种类：种类：固体培育基固体培育基液体培育基液体培育基有无有无 凝固剂琼脂凝固剂琼脂分别分别 鉴定鉴定工业工业 消费消费化学成分：化学成分：物理性质：物理性质：天然培育基天然培育基 合成培育基合成培育基标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多微生物的分离、计数等半固体培养基加入琼脂较少观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌种等液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分

4、不明确工业生产目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物选择培养基添加（或缺少）某种化学物质 培养、分离出特定的微生物牛肉膏蛋白胨培育基 是一种运用最广泛和最普通的细菌根底培育基。1000ml牛肉膏蛋白胨培育基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g琼脂20.0g分析营养构成？分析营养构成？5. 配制原那么目的明确：目的明确：营养全面、浓度适宜、比例恰当营养全面、浓度适宜、比例恰当适宜的适宜的pH值：值：有机碳源有机碳源异养型：异养型：根据微生物的种类、培育目的选择原料根据微生物的种类、培育目的选择原料自养型：自养型：不加碳源不加碳源参与缓冲

5、剂参与缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸细菌偏碱，真菌偏酸CO2碳源碳源消费 科研巴氏消毒法巴氏消毒法耐高温需坚持枯燥耐高温需坚持枯燥的的 物品，物品，160170 12小时小时接种环、接种针等接种环、接种针等 金属器具金属器具7075、30min 80、15min100、56min消毒灭菌定义方法较为温暖理化方法较为温暖理化方法杀死部分有害菌体杀死部分有害菌体不包括芽孢、孢子不包括芽孢、孢子剧烈的理化方法，剧烈的理化方法，杀死一切微生物杀死一切微生物煮沸消毒法煮沸消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培育基，培

6、育基，100KPa、121、1530min二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：请他判别以下资料或器具能否需求消毒或灭菌。假设需求，请选择适宜的方法。1 培育细菌用的培育基与培育皿2 玻棒、试管、烧瓶和吸管3 实验操作者的双手练习:说出无菌技术及相应的详细方法任务台操作者的手、穿着培育基培育皿玻棒、试管接种环牛奶无菌水饮用水纱布涂布器2.无菌范围：无菌范围： 实验操作空间消毒实验操作空间消毒操作者的手、穿着消毒操作者的手、穿着消毒实验器具灭菌实验器具灭菌实验操作过程实验操作过程二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染1.消毒与灭菌：酒精灯旁操作酒精灯旁操作超

7、净任务台单个单个或少数菌体或少数菌体2.特征：特征：大小、外形、光泽度、大小、外形、光泽度、颜色、透明度等。颜色、透明度等。3.功能：功能：1.定义：定义：三三.菌落菌落鉴定菌种的重要根据鉴定菌种的重要根据固体培育基上固体培育基上大量繁衍大量繁衍子细胞群体子细胞群体1000ml牛肉膏蛋白胨培育基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g琼脂20.0g四.大肠杆菌的纯化培育：制备牛肉膏蛋白胨固体培育基制备牛肉膏蛋白胨固体培育基1.计算：计算： 培育基用量培育基用量依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量2.称量：称量：3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉

8、膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶、少量水加热溶解解取纸取纸蛋白胨、蛋白胨、NaCl 琼脂琼脂 补水定容补水定容4.调调pH、分装、封口：、分装、封口：5.灭菌：灭菌：6.倒平板：倒平板：培育基、培育皿培育基、培育皿分散成单个细胞分散成单个细胞,构成单个菌落构成单个菌落约约50防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基防止瓶口的微生物污染培育基四.大肠杆菌的纯化培育：制备牛肉膏蛋白胨固体培育基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：平板划

9、线法：平板划线法：菌种菌种划划3个平板个平板1个不划线个不划线1.接种：接种：接种环接种环防止划破培育基防止划破培育基反复实验反复实验空白对照空白对照为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作终了时，依然需求灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上能够存在的微生物污染培育物环上能够存在的微生物污染培育物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而经过划线次数的添加，使每次划线时菌而经过划线次数的添加，使每次划线时菌种

10、的数目逐渐减少，以便得到菌落。种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，防止细菌及时杀死接种环上残留的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。污染环境和感染操作者。6支试管，分别参与9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液微量 移液器稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：涂布平板：不超越不超越0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍平板划线法：平板划线

11、法：四.大肠杆菌的纯化培育：制备牛肉膏蛋白胨固体培育基纯化大肠杆菌：1.接种：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.培育：培育：将接种后的培育基和一个未接种的培育基将接种后的培育基和一个未接种的培育基放入放入37恒温箱中培育恒温箱中培育12h24h后，后，察看并记录察看并记录五.菌种的保藏：1.暂时保藏：暂时保藏：试管固体斜面培育基上试管固体斜面培育基上42.长期保管：长期保管：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml甘油甘油1ml菌液菌液20一.培育基： 微生物生存的环境和营养物质1.根本成分： 碳源、氮源、水、无机盐2.特殊营养：特殊营养：维生素、碱基等维生素、碱基等牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有3.pH、氧气的需求：、氧气的需求：4.种类：种类：固体培育基固体培育