实验六体外抑菌实验定ppt课件

1、动物机能学实验动物机能学实验2编者：陈小军编者：陈小军实验内容实验内容实验一实验一 影响药物作用的要素影响药物作用的要素实验二实验二 药物代谢动力学实验药物代谢动力学实验实验三实验三 处方与药物的配伍忌讳处方与药物的配伍忌讳实验四实验四 中毒与挽救实验中毒与挽救实验实验五实验五 药物对离体肠的影响药物对离体肠的影响实验六实验六 抗微生物药物的体外抑菌实验抗微生物药物的体外抑菌实验实验七实验七 生物碱的提取及其药敏实验生物碱的提取及其药敏实验实验八实验八 药物对离体心脏的影响药物对离体心脏的影响实验五、抗菌药物的体外抑菌实验实验五、抗菌药物的体外抑菌实验 【实验目的】 掌握药敏实验的方法，了解药

2、物对常见菌的作用。意义：体外抗菌实验对临床用药具有参考价值。鉴定新药能否具有抗菌活性。耐耐 药药 性性抗抗 菌菌 作作 用用防治作用与不良反响防治作用与不良反响药药 动动 学学 过过 程程抗抗 病病 力力致致 病病 力力【实验原理】【实验原理】【根本原理】 抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微生物的才干。两种测定方法：体外与体内化学治疗实验；评价目的： 1最低抑菌浓度MIC： 可以抑制培育基中细菌生长的最低浓度。 2最低杀菌浓度MBC： 可以杀灭培育基中细菌的最低浓度。【试剂与器材】 细菌菌液如金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌、药液青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、四环素、碘酒、牛肉膏

3、、蛋白胨、氯化钠、氢氧化钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、平皿等。 药敏试纸的预备：青霉素1.6万u/ml 、链霉素1万u/ml 、1%磺氨嘧啶钠、四环素5万 /ml 256/ml青霉素溶液： 【实验步骤】【实验步骤】 一、纸片法一、纸片法 以灭菌小棉签取金黄色葡以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液每萄球菌液每ml约含约含3亿个细亿个细菌，留意不宜蘸取过多，以菌，留意不宜蘸取过多，以刚浸湿整个棉签为度，悄然地刚浸湿整个棉签为度，悄然地从四个不同方向平行交叉划线，从四个不同方向平行交叉划线，使菌液均匀涂布于整个琼脂平使菌液均匀涂布于整个琼脂平板上。同样方法，也可制造大板上。同样方法，也可制造大肠杆

4、菌平板备用。肠杆菌平板备用。 二、纸片法二、纸片法 取曾经制备好的取曾经制备好的4种药敏片：种药敏片：青霉素青霉素1.6万万u/ml 、链霉素、链霉素1万万u/ml 、1%磺氨嘧啶钠、四环素磺氨嘧啶钠、四环素5万万 /ml，放置在已接种细菌，放置在已接种细菌的琼脂平板外表的不同区域。的琼脂平板外表的不同区域。为了位置间隔准确，最好事先为了位置间隔准确，最好事先在平皿底用蜡笔作上记号。在平皿底用蜡笔作上记号。 将培育皿置将培育皿置37培育培育24h，察，察看纸片周围有无抑菌环，并丈看纸片周围有无抑菌环，并丈量抑菌圈的直径，比较各药的量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌效能。样例如以下图：抗菌效能。样例

5、如以下图： 实验结果记录：抑菌直径实验结果记录：抑菌直径mm药物沙门氏杆菌大肠杆菌 二、试管二倍稀释法二、试管二倍稀释法 取灭菌小试管取灭菌小试管10支，按照支，按照1至至10编号，编号，陈列于试管架上。按照无菌操作，从第一陈列于试管架上。按照无菌操作，从第一管到第管到第10管，分别参与牛肉膏汤管，分别参与牛肉膏汤1ml。用吸。用吸管汲取管汲取256/ml的青霉素溶液的青霉素溶液1ml放入第一放入第一管，并反复吹匀；接着从第一管吸出管，并反复吹匀；接着从第一管吸出1ml放放入第二管同样吹匀后吸出入第二管同样吹匀后吸出1ml放入第三管，放入第三管，依次逐管进展稀释到第管，第依次逐管进展稀释到第管

6、，第10管不加管不加青霉素液，作细菌对照组，第管只加药青霉素液，作细菌对照组，第管只加药物，不加菌液，作为药物对照组。物，不加菌液，作为药物对照组。0.500.50.50.50.50.50.50.50.5葡萄球菌液葡萄球菌液ml0弃弃111111111青霉素青霉素ml1111111111牛肉膏汤牛肉膏汤ml 10987654321试管号试管号 1-8，10各参与培育18 h并用牛肉膏汤稀释至5107108 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37培育箱内培育24h后，取出察看细菌生长情况。 以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该细菌的最低抑制浓度MIC。 最低杀菌浓度MBC 结果记

7、录于下表： 记录实验结果记录实验结果【本卷须知】【本卷须知】1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用过的棉签火焰烧灼后丢弃。过的棉签火焰烧灼后丢弃。2. 用试管二倍稀释法测用试管二倍稀释法测MIC值，稀释时留意值，稀释时留意 稀释的顺序；每次移液前留意清洗吸管。稀释的顺序；每次移液前留意清洗吸管。 3. 药敏片之间要间隔适当间隔，以免抑菌圈药敏片之间要间隔适当间隔，以免抑菌圈出现交叉。出现交叉。4. 四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对一种菌的作用，同组每人所接菌种药物对一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，平皿上做好记号。结果记录时将本不同，平皿上做好记号。结果记录时将本组结果综合