试验室常用试剂缓冲液配制方法一览表

1、实验常用试剂、缓冲液的配制方法151、1M Tris-HCl质份浓度 1 M Tris-HCl(pH7.4, 7.6, 8.0)邙己制量 1L通己置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约 70mL7.6约 60mL8.04.将溶解定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。约 42mL注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1C,溶液的0.03个单位。2、1.5 M Tris-HCl 质份浓度 1.5 M Tris-HCl(

2、pH8.8)0 己制量 1L通己置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。pH值大约降低2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解3. 用浓盐酸调pH值至8.8。4. 将溶液定容至1L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH值，因为Tris溶液的 pH值随温度的变化差异很大，温度每升高 1C,溶液的pH值大约 降低0.03个单位。3、 10>TE BufferO份浓度 100 mM Tris-HCl , 10 mM EDTA(pH 7.4, 7.6, 8.0)0己制量 1L置方法1.量取下列溶液，置于 1L烧杯中。1 M Tris-HCl Bu

3、ffer ( pH7.4 , 7.6, 8.0) 100mL 500 mM EDTA ( pH8.0) 20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。4、3 M醋酸钠 匚组份浓度3 M醋酸钠(pH5.2)通己制量 100mL通己置方法 1.称取40.8gNaOAc?3H2O置于100200mL烧杯 中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。3. 加入去离子水将溶液定容至100mLo4. 高温高压灭菌后，室温保存。5、 PBS Buffer如份浓度 137 mM NaCl , 2.7mM KCl

4、, 10 mM Na2HPO4 , 2 mM KH2PO40己制量1L0己置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaCl8 gKCl0.2gNa2HPO4 1.42 g KH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定 容至1L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中 补充 1mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2 。6、 10 M醋酸铉O份浓度10 M醋酸铉0己制量100mL型己置方法1.称量77.1g醋酸铉置于100200 mL烧

5、杯中，加 入约30 mL的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 100mL。3. 使用0.22滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铉受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、 Tris- HCl平衡苯酚0己置方法1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸熠便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避 免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160C对其进行重蒸熠除去诸如醍等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯 键的断裂或导致 RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、 RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实

6、验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触 过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性 pH条件下DNA分配于有机相，因 此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH值达到7.8以上，苯酚 平衡操作方法如下：液化苯酚应贮存于-20C，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68 C水浴中使苯酚充分溶解。 加入羟基喳唏(8-Quinolinol )至终浓度0.1%。该化合物 是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂， 同时因其呈黄色

7、。有助于方便识别有机相。 加入等体积的1M Tris-HCl ( pH8.0),使用磁力搅拌器搅 拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的0.1M Tris-HCl ( pH8.0),使用磁力搅拌器 搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。8、苯酚/氯仿/异戊醇0己置方法1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯 /酚/氯仿/异 戊醇(25: 24: 1)。氯仿可使蛋白(25 : 24 : 1)质变性并有 助于液相与有机相的分离

8、，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24: 1)均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4C保存。9、10% ( W/V ) SDS Cffl份浓度 10% (W/V ) SDS0己制量100mL通己置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中， 加入约80mL的去离子水，68 C加热溶解。2. 滴加数滴浓盐酸调节 pH值至7.2。3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。10、2 N NaOH O份浓度 2N NaOH0己制量100mL通己置方法1.量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中(NaOH 溶解

9、过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、 2.5 N HCl顷份浓度 2.5 N HCl0己制量100mL通己置方法1.在78.4mL的去离子水中加入 21.6mL的浓盐酸 (11.6N),均匀混合。2. 室温保存。12、 5 M NaCl如份浓度 5 M NaCl0己制量1L0己置方法 1.称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约 800mL 的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

10、3. 高温高压灭菌后，4C保存。0己制量100mL项己置方法1.称取20g Glucose置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 100mLo3. 高温高压灭菌后，4C保存。14、Solution IO份浓度 25 mM Tris-HCl (pH8.0) , 10mMEDTA , 50mM Glucose(质粒提取用)0己制量1L0己置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1M Tris-HCl(pH8.0)25mL0.5 M EDTA(pH8.0)20mL20 % Glucose(1.11M )45mLdH2O910mL2. 高温高压灭

11、菌后，4C保存。3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A (20mg/mL)。15、 Solution II如份浓度 250mM NaOH , 1% (W/V ) SDS(质粒提取用)0己制量500mL通己置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。10% SDS50mL2N NaOH50mL2. 加灭菌水定容至 500mL ,充分混匀。3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。16、 Solution III如份浓度 3M KOAc , 5M CH3COOH(质粒提取用)0己制量500mL项己置方法1.量取下列

12、溶液置于 500mL烧杯中。KOAc147gCH3COOH57.5mL2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至 500mL o4. 高温高压灭菌后，4C保存。17、 0.5M EDTA质份浓度 0.5 M EDTA(pH8.0)通己制量1L0己置方法 1.称取186.1g Na2EDTA?2H2O，置于1L烧杯中。2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值值 8.0 (约 20g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至 1L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。18、

13、1 M DTT 如份浓度 1 M DTT通己制量20mL通己置方法1.称取3.09g DTT ,加入到50mL塑料离心管内。2. 加 20mL 的 0.01 M 的 NaOAc (pH5.2),溶解 后使用0.22 滤器过滤除菌。13、20% ( W/V ) GlucoseO份浓度 20% ( W/V ) Glucose3.适量分成小份后，-20 C保存19、10mM ATP匚组份浓度 10mM ATP通己制量20mL通己置方法 1.称取121mg Na2ATP?3H2O ,加入到50mL塑料离心 管内。2. 加 20mL 的 25mM Tris-HCl (pH8.0),搅拌溶解。3. 适量分

14、成小份，-20C保存。分子生物学实验常用培养基的配制方法6. 加入 1mL Ampicillin (100mg/mL)后均匀混合7. 4 C保存。6、TB培养基如份浓度1.2% (W/V) Tryptone2.4% (W/V)Yeast Extract0.4% (V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO41、Ampicillin如份浓度 100mg/ml Ampicillin(100mg/ml)0己制量50mL0己置方法1.称量5g Ampicillin 置于50mL离心管中。2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22卬礴膜过滤除菌。4.小份分

15、装(1mL/份)后，-20 C保存。2、IPTG如份浓度 24mg/mL IPTG(24mg/mL)通己制量50mL通己制量1L通己置方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4 , 0.72MK2HPO4) 100mLo2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeast Extract24gGlycerol4mL3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。配置方法1.称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL3. 用0.22 滤膜过滤除菌。4. 小份分装(1mL/份)后，-20C保存。3、X- Gal匚组份

16、浓度 20mg/mL X- Gal(20mg/mL )通己制量 50mL0己置方法1.称取1g X-Gal置于50mL离心管中。2. 加入40mL DMF (二甲基甲酰胺)，充分混合 溶解后，定容至 50mL。3. 小份分装(1mL/份)后，-20 C保存。4、LB培养基O份浓度 1 % (W/V ) Tryptone , 0.5% (W/V )Yeast Extract,通己置方法1 % ( W/V ) NaCl0己制量1L1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10gYeast Extract5gNaCl10g2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴力口 5N N

17、aOH (约 0.2mL),调节 pH 值至 7.0。4. 高温高压灭菌后，4C保存。5、LB/Amp培养基匚组份浓度 1 % ( W/V)Tryptone0.5% ( W/V )Yeast Extract1 % ( W/V )NaCl0.1mg/mLAmpicillin0己制量1L通己置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10gYeast Extract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5N NaOH (约 0.2mL),调节 pH 值至 7.0。4. 加去离子水将培养基定容至1L。5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。4. 加去离子水将培

18、养基定容至1L后，高温高压灭菌。5. 待溶液冷却至60 C以下时，加入100mL的上述灭菌 磷酸盐缓冲液。6. 4C保存。7、TB/Apm 培养基 如份浓度 1.2% ( W/V) Tryptone2.4% ( W/V )Yeast Extract0.4% ( V/V )Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin通己制量1L0己置方法1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4 , 0.72M K2HPO4 ) 100mL溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅 拌溶解后，加去离子水定容至100mL,

19、高温高压灭菌。2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeast Extract24gGlycerol4mL3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。5. 待溶液冷却至60C以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和 1mL Ampicillin (100mg/mL)。6. 均匀混合后4C保存。8、SOB培养基匚组份浓度 2% (W/V ) Tryptone0.5% ( W/V ) Yeast Extract0.05% (W /V ) NaCl2.5mMKCl10mMMgCl20己制量1L通己置方法1.配制250m

20、M KCl溶液。在90mL的去离子水中溶解 1.86g KCl 后，定容至100mL。2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解 19g MgCl2 后，定容至100mL,高温高压灭菌。3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。TryptoneYeast ExtractNaCl20g5g0.5g4.56.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0o7.8.9.加入去离子水将培养基定容至1L。高温高压灭菌后，4C保存。9.使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。SOC培养

21、基成份浓度2% （W/V ）Tryptone0.5% (W/V )Yeast Extract0.05%( W /V )NaCl2.5mMKCl10mMMgCl220mM葡萄糖0己制量100mL0己置方法1.配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22顷滤膜过滤除菌。2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL ,均匀 混合。3. 4C保存。10、2>YT 培养基 O份浓度 1.6% （W/V ） Tryptone, 1 % （W/V）Yeast Extract, 0.5% （W/V ） NaCl0己制量1L0己置方法

22、1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone16gYeast Extract10gNaCl5g2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。4. 加水离子水将培养基定容至1L。5. 高温高压后，4C保存。11、 bx brot暗养基 如份浓度 2% （W/V ） Tryptone , 0.5% （W/V ） Yeast Extract, 0.5% （W/V ） MgSO4?7H2O通己制量1L通己置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone20gYeast Extract5gMgSO4?7H2O5g2. 加入约800mL的去离子水

23、，充分搅拌溶解。3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。4. 加水离子水将培养基定容至1L。12、NZCYM培养基质份浓度0.5% （W/V）Yeast ExtractTryptone10g5. 高温高压后，4C保存。0.1% (W/V)Casamino Acid1% ( W /V )NZ胺0.5% (W /V)NaCl0.2% (W /V)MgSO4?7H2O0己制量1L通己置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中Yeast Extract5gCasamino Acid1gNZ胺10gNaCl5gMgSO4?7H2O2g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5N NaOH溶

24、液（约0.2mL），调节pH值至7.04.加水离子水将培养基定容至1L。5.高温高压后，4C保存。13、NZYM 培养基如份浓度0.5 %(W/V )Yeast Extract项己置方法NZYM1% (W /V)0.5% (W /V)0.2 % (W /V ) 培养基除不含Casamino AcidNZ胺NaClMgSO4?7H2O（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。14、NZM 培养基顷份浓度1% （W /V）NZ胺0.5% ( W /V)0.2% (W /V)NaClMgSO4?7H2O0己置方法 NZM培养基除不含 Yeast Extract （酵母提取物）夕卜， 其他成

25、份与NZYM培养基相同。15、一般固体培养基的项己置方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。配制 Agar （琼脂：铺制平板用）15g/LAgar （琼脂：配制顶层琼脂用）7g/LAgarose （琼脂糖：铺制平板用）15 g/LAgarose （琼脂糖：配制顶层琼脂用）7g/L2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使 琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。3. 待培养基冷却至5060C时，加入热不稳定物质（如 抗生素），摇动容器充分混匀。4.铺制平板（3035mL培养基/90mm 培养皿）。16、LB/Amp/X-Gal

26、/IPTGO份浓度1?W/V)Tryptone平板培养基0.5% （W/V）Yeast Extract1% (W/V)NaCl0.1mg/mLAmpicillin0.5% ( W /V)IPTG0.04mg/mLX-Gal1.5% ( W /V)Agar0己制量1L通己置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中Yeast Extract5gNaCl10g2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。5. 高温高压灭菌后，冷却至 60 C左右。6. 加入 1mL Ampici

27、llin (100mg/mL)、1mL IPTG (24mg/mL )、2mL X-Gal ( 20mg/mL )后均匀混合。7. 铺制平板(3035mL培养基/90mm培养基)。8. 4C保存平板。17、TB/Amp/X-Gal/IPTGO份浓度1.2% (W /V)Tryptone平板培养基2.4% (W/V)Yeast Extract0.4% (W/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin0.024mg/mLIPTG0.04mg/mLX-Gal1.5% ( W /V)Agar0己制量1L0己置方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.17M K

28、H2PO4 , 0.72MK2HPO4) 100mLo2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeast Extract24gGlycerol4mL3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。5. 高温高压灭菌后，冷却至 60 C左右。6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mLAmpicillin (100mg/mL)、 1mL IPTG (24mg/mL)、 2mL X-Gal (20mg/mL)后均匀混合。7. 铺制平板(3035mL培养基/90mm培养基)。8. 4C保存平板。生物化学实验常用试剂的配

29、制方法1、0.5mol/L氢氧化钠溶液匚组份浓度0.5mol/L通己制量 2L 置方法1.准确称取氢氧化钠 40g。2. 用去离子水溶解并稀释至 2L。2、 0.5mol/L盐酸溶液匚组份浓度 0.5mol/L通己制量 2L 通己置方法1.准确量取盐酸83.4mL。2. 用去离子水稀释至 2L。4、0.2%葡萄糖标准溶液如份浓度0.2%0己制量1L0己置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70C干燥2小时。2. 干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。3. 准确称取葡萄糖2.000g。4. 用去离子水溶解并定容至1L5. 于4C保存。5、 250卬g/m”血清O份浓度 250卬g/mL

30、白蛋白标准液通己制量2L通己置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。3.4C保存。6、Folin试剂甲CS己置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中， 加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。2. 称取0.5g酒石酸钾钠，溶于 80mL去离子水中，加入0.25g硫酸铜？5水，溶解。3. 将1 : 2:去离子水按20: 4: 1的比例混合即可。4. 4C保存，可用一周。7、Folin试剂乙0己置方法1. 在500mL的磨口回流装置内加入鸨酸钠 ？2水25.0359g,钳酸钠？2水6.2526g,去离子水175mL, 85

31、%磷酸12.5mL, 浓盐酸25mL,充分混合。2. 回流10小时，再加硫酸锂 37.5g，去离子水12.5mL及数滴漠。3. 然后开口沸腾15min，以驱除过量的漠，冷却后定容到250mL。4. 于棕色瓶中保存，可使用多年注意：上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在 2mol/L左右, 几种操作方案都是把 Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为应用 液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18倍，使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是上文称之为的应用液”。Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚猷为指示剂。 用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的

32、标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点， 如果用氢氧化钠去滴 定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿， 再变为灰紫色为终点。8、DNS试剂0己置方法1.取3,5-二硝基水杨酸10g，加入2mol/L氢氧化钠溶液 200mL o (3, 5-二硝基水杨酸试剂)2. 将3, 5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300go3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL,棕色瓶保存。9、 5%蔗糖溶液匚组份浓度5%0己制量1LCJ己置方法 称取蔗糖50g,用去离子水溶解定容至1L。10、 0.1mol/L蔗糖溶液匚组份浓度0.1mol/L0己制量

33、1L0己置方法称取蔗糖34.230g,用去离 子水溶解并定容至1L o11、 20%乙酸溶液匚组份浓度20%己制量1.2L0己置方法 量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至 1200mLo12、30% (W/V ) AcrylamideO份浓度 30% (W/V) Acrylamide 0.05 %0己制量1L置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Acrylamide 290gBIS10g2. 向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解3. 加入去离子水将溶液定容至1L,用0.45卬礴膜滤去杂质。4. 于棕色瓶中4C保存。注意：丙稀铳胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累

34、性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。13、40% (W/V ) Acrylamideffl 份浓度 40% (W/V ) Acrylamide 0.05 %0己制量1L0己置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Acrylamide 380g BIS20g2. 向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解3. 加入去离子水将溶液定容至1L,用0.45卬飕膜滤 去杂质。4. 于棕色瓶中4C保存。注意：丙稀铳胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。1

35、4、10% (W/V)过硫酸铉匚组份浓度10% (W/V)过硫酸铉0己制量10mLCS己置方法1.称取1g过硫酸铉。2. 加入10mL的去离子水后搅拌溶解。3. 贮存于4C。注意：10%过硫酸胺溶液在 4C保存时间可使用2周左右， 超过期限会失去催化作用。15、考马斯亮蓝R-250染色液匚组份浓度 0.1% (W/V)考马斯亮蓝R-250, 25% (V/V)异丙醇， 10% (V/V )冰醋酸 0己制量1L0己置方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。2. 量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。3. 加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。4. 加入650mL的去离子水，

36、均匀搅拌。5. 用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。16、考马斯亮蓝染色脱色液匚组份浓度10% (V/V )醋酸，5% (V/V)乙醇0己制量1L0己置方法1.量取下列溶液，置于 1L烧杯中。醋酸 100mL乙醇 50mLdH 2O 850mL2. 充分混合后使用。17、凝胶固定液顷份浓度50% (V/V )甲醇，10% (V/V)醋酸(SDS-PAGE银氨染色用)通己制量100L通己置方法1.量取下列溶液，置于 1L烧杯中。甲醇 500mL醋酸100mLdH 2O 400mL2. 均匀混合后室温保存。18、凝胶处理液O份浓度50% (V/V )甲醇，10% (V/V)戊二醛(SDS-PAGE银氨

37、染色用)0己制量1L通己置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。甲醇50mL戊二醛 10mLdH2O 40mL2.均匀混合后室温保存。19、凝胶染色液匚组份浓度0.4% (W/V)硝酸银，1% (V/V)浓氨水(SDS-PAGE银氨染色用)0.04% ( W/V )氢氧化钠项己制量100L通己置方法1.量取下列试剂，加入100200mL试剂瓶中20%硝酸银2mL浓氨水1mL4%氢氧化钠1mLdH 2O 96mL2. 均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液 会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。3. 本染色液应现用现配，不宜保存。20、显影液O份浓度 0.005% (V/V )

38、柠檬酸，0.02% (V/V)甲醛(SDS-PAGE银氨染色用)通己制量1L通己置方法1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。柠檬酸50mg甲醛0.2mL2. 加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。3. 室温保存。21、 45%乙醇溶液匚组份浓度45%0己制量1L通己置方法量取无水乙醇450mL,加入去离子水550mL,混匀°22、 5 %的十二烷基硫酸钠溶液匚组份浓度5%(W/V )己制量 0.1L配置方法：称取5.0g十二烷基硫酸钠，溶于100mL4%的乙醇溶液中。23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂配置方法 取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇试剂，混匀24、 1.6%乙醛溶液如份

39、浓度1.6%0己制量0.1L0己置方法 取47%乙醛3.4mL,用去离子水定容至 100mL。25、二苯胺试剂通己置方法1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中，2再加入8mL高氯酸混匀。3.临用前加入0.8mL 1.6%乙醛溶液。注意：配制完成后试剂应为无色。26、15%三氯乙酸溶液匚组份浓度15%0己制量2L0己置方法称取三氯乙酸300g,用去离子水溶解定容至 2000mL27、1 %谷氨酸溶液匚组份浓度1%0己制量0.5L通己置方法1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。3. 最后用去离子水定容至 0.5L。28、1 %丙酮酸溶液匚组份

40、浓度 1%0己制量0.5L0己置方法1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。3. 最后用去离子水定容至 0.5L。29、0.1%的碳酸氢钾溶液匚组份浓度0.1%通己制量0.5L型己置方法 称取碳酸氢钾0.5g,用去离子水溶解定容至 0.5L30、0.05%的碘乙酸溶液匚组份浓度0.05%通己制量0.25L型己置方法 称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至 0.25L31、 Locke氏溶液0己制量2L配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾，48g氯化钙,0.3g碳酸氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mLo32、 0.2mol/L的

41、丁酸溶液匚组份浓度0.2mol/L0己制量1L通己置方法1.量取18mL正丁酸试剂。2. 用1mol/L的氢氧化钠中和。3. 再用去离子水定容至1L。33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液如份浓度0.1mol/L0己制量10L通己置方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至 10L34、 0.1mol/L的碘溶液匚组份浓度0.1mol/L0己制量1L通己置方法1.称取碘12.7g和碘化钾25g o2.用去离子水溶解并定容至1L。3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。35、 10%氢氧化钠溶液匚组份浓度10%通己制量2L通己置方法称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至 2L3

42、6、 10 %盐酸溶液匚组份浓度10%0己制量0.2L通己置方法 量取浓盐酸49.3mL,用去离子水定至 0.2mLo37、 0.1%标准丙氨酸溶液匚组份浓度0.1%0己制量0.5L通己置方法称取丙氨酸0.5g,用去离子水溶解并定容至0.5mL38、 0.1%标准谷氨酸溶液匚组份浓度0.1%0己制量0.5L通己置方法称取谷氨酸0.5g,用去离子水溶解并定容至 500mL39、 0.1%水合菌三酮乙醇溶液如份浓度0.1%0己制量1L通己置方法 称取1g水合菌三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。40、酚溶液0己置方法 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入 300g苯酚， 在水浴中加热搅拌、混合

43、至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为 乳状液。静止710小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水 饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。41、 0.5%淀粉溶液匚组份浓度0.5%0己制量0.1L0己置方法 称取淀粉0.5g,用去离子水溶解定容至 0.1L。42、对羟基联苯试剂配置方法 称取对羟基联苯1.5g,溶于100mL0.5%氢氧化钠溶液中，配制成1.5%的溶液。若对羟基联苯颜色较深， 应用丙酮 或无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶， 应摇匀后使用。生物化学实验常用缓冲液的配制方法1、0.2 mol/L磷酸缓冲

44、液如份浓度 0.2mol/L(pH 6.0)0 己制量 1L0己置方法1.称取磷酸氢二钠？12水8.82 g。2. 称取磷酸二氢钠?2水27.34g。3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。2、洗脱液匚组份浓度0.15mol/L(含0.15mol/L氯0己制量10L化钠的0.005mol/L0己置方法1.称取氯化钠87.66gopH 6.0的磷酸缓冲液)2.用0.2mol/L pH6.0的磷酸缓冲液250mL溶解'3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。3、 0.3mol/L磷酸缓冲液如份浓度0.3mol/L(pH7.8)0 己制量0.5L0己

45、置方法1.准确称取磷酸氢二钠？12水49.150g2.磷酸二氢钠？2水2.000g。3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存注意：此为母液，使用时稀释 10倍使用。4、 0.2mol/L乙酸缓冲液如份浓度0.2mol/L(pH4.6)项己制量2L垣己置方法1.准确称取乙酸钠?3水54.44g o2. 加入23mL冰乙酸，溶解。3. 用去离子水溶解并定容至 2L。4C保存5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸匚组份浓度0.2mol/L缓冲液0己制量各1L(pH 2.6、4.6、6.6)通己置方法 1.母液A (0.2mol/L的Na2HPO4溶液)：称取 Na2HPO4?12水143.256g

46、,用去离子水定容至 2L。2. 母液B (0.1mol/L的柠檬酸溶液)：称取柠檬酸 ?1 水42.028g用去离子水溶解定容至2L。3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制:pH 值 A (mL)B (mL)2.6 109.0891.04.6 467.5532.56.6 727.5272.54. 按上表混匀后，4C保存。6、 20 XSSC缓冲液0己制量1L(pH7.0)0己置方法1.准确称取175.2g氯化钠。2. 准确称取88.2g柠檬酸钠？2水。3. 溶解于800mL去离子水中。4. 加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.05. 加去离子水定容至1L。注意：按

47、实验需要可分装后高压灭菌。10 SSCX 5XSSC、1XSSC可由20 >SSC做相应稀释得到。7、 0.15mol/L 氯化钠-Cffl份浓度0.15mol/L乙二胺四乙酸二钠0己制量1L缓冲液通己置方法1.准确称取氯化钠8.77g。(pH8.0)2.称取乙二胺四乙酸二钠 37.2g3.溶于800mL去离子水中。4. 用固体的氢氧化钠调 pH值为8.0。5. 加去离子水定容至 1L。8、 1/15mol/L的磷酸盐顷份浓度0.15mol/L缓冲液通己制量1L(pH7.6)0己置方法1.溶液甲(1/15mol/L 的 KH2PO4溶液)：称取 KH2PO4 9.078g,用 去离子水溶

48、解定容至1L。2.溶液乙(1/15mol/L 的 Na2HPO4溶液):称取 Na?HPO4? 2水 11.876g(或磷酸氢二钠？12水23.894g)用去离子水溶解定容至1L3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将和按1.4 : 8.6比例混合即可9、5>aris-GlycineBufferO份浓度 0.125M Tris , 1.25M0.5 % (W/V ) BPB50 % (V/V )甘油 5% (W/V )务筑基乙醇 CH己制量5mL0己置方法1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。1M Tris-HCl 1.25mLSDS 0.5gBPB 25mg 甘油2.5mL2. 加入去离子

49、水溶解后定容至 5mL 03. 小份(500卬份)分装后，于室温保存。4. 使用前将25卬的2-ME加到每小份中。5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右 生物化学实验常用柱料数据及性质1、DEAE阴离子交换纤维素(1) 纤维素的处理取纤维素干品用蒸熠水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀， 过夜。次日再搅匀，静止30min留下沉集部分(重复3次)， 用真空泵抽干。然后用适量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min ,抽干，蒸熠水洗至中性；再用适量的 0.5mol/L 的盐酸溶液浸泡30min,抽干，蒸熠水洗至中性；重复用 0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡 30min

50、,抽干，蒸熠水洗至 中性。最后用0.005mol/L pH6.0的磷酸缓冲液浸泡待用。(2) 纤维素的重生回收的纤维素先用0.5mol/L氯化钠-0.5mol/L氢氧化钠 溶液浸泡，再按上述(1)操作处理，即可再次投入使用。(3) 纤维素的保存回收后，用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡 30min后，蒸 熠水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中60C烘干后，保存。2、SephadexG型葡聚糖凝胶(1)凝胶的特性要点葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度，数值越大交联度越小，吸水量越大。其数值大致为吸水量X的10倍。Sephadex对Glycine , 0.5% ( w/v) SDS(SDS-PAGE电

51、泳缓冲液)0己制量1L0己置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tris15.1gGlycine94gSDS5.0g2. 加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。10、5XSDS-PAGE如份浓度 250mM Tris-HCl (pH6.8)Loading Buffer10% (W/V) SDS碱和弱酸稳定(在 0.1mol/L盐酸中可以浸泡12小时)。 在中性时可以高压灭菌。不同型号中又有颗粒粗细之分。 颗粒粗的分离效果差，流速快。颗粒越细分离效果越好， 但流速也越慢。交联葡聚糖工作时的 pH稳定在211的范 围内。葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级

52、范围为7008X105。 SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表IW®用削HJLizft白EHs谜!昨itanmsiixA1滋IMS g：'至册？I.SIKXIE抻11AZ出3r心m.弦J（M戏Mt!网7:IMSiKUMm"WI«'£1tig11 tilthllblxiOfgMXlE¥扫毒INlittU"IIXIIKWIE岫1邱Mll*5日"£戏Ll>*本表数值取自 Pharmacia Biotech Biodirectory 1996 。* 为 2.6x30cm层析柱在25C用蒸熠水测定之值。D = Darcy's law（2）凝胶的溶胀*G系交联葡聚糖凝胶亲水性强，只能在水中溶胀（仅有少量的有机 溶剂也可以使之溶胀），有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会 改变其孔隙，使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。在水中溶胀时如在室温则需要较长时间，才能达到充分溶胀的程度，但可煮沸到 100 C,以缩短其溶胀时间。见下表00G-15072