化学发光法技术概要PPT课件

1、2021/7/231化学发光法技术概要及自动化免疫分析仪技术要点科华生物研发中心光免小组科华生物研发中心光免小组李李 基基2010.7.142010.7.1422021/7/23化学发光法反应基本原理化学发光法反应基本原理抗原抗原-抗体反应抗体反应 抗体能够特异性识别相对应的抗原，并与之结合，这种反应称之为抗原抗体反应。 抗原-抗体反应具有特异性、敏感性、可逆性等特点。酶促底物发光酶促底物发光 将检测试剂中的抗原或抗体用碱性磷酸酶（AP）加以标记，通过发光底物测定相对光子数（RLUs值），来检测目标抗体或抗原的浓度。32021/7/23化学发光法反应模式化学发光法反应模式n 一步法 （15mi

2、n反应+15min显色） 夹心法夹心法 竞争法竞争法n 两步法 （15min+15min反应+15min显色） 间接法间接法 捕获法捕获法42021/7/23一步法：夹心法一步法：夹心法52021/7/23一步法：竞争法一步法：竞争法62021/7/23两步法：间接法两步法：间接法72021/7/23两步法：捕获法两步法：捕获法82021/7/23化学发光法反应介质化学发光法反应介质固相介质：磁珠固相介质：磁珠酶标记物：碱性磷酸酶（酶标记物：碱性磷酸酶（AP）发光底物：发光底物：AMPPD92021/7/23磁珠磁珠p基本材质：基本材质：Fe3O4/Fe2O3，褐色磁性物质p直径大小：直径大小

3、：1m左右p磁珠类型：磁珠类型： 分为氨基磁珠、羧基磁珠、苯甲磺酰基磁珠和链霉亲和素磁珠等四种磁珠p磁珠特性：磁珠特性： 不同供应商的不同类型磁珠，亲水性不同，在溶液中的状态也不同，所需的磁吸时间也不同。磁吸时间过短，会造成丢磁；磁吸时间过长，会造成磁珠聚集，不宜分散。102021/7/23碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（AP）及发光底物）及发光底物nRLUs值范围 板式发光范围1,000-20,000,000RLUs 管式发光范围0-10,000,000RLUsn分辨率要求 对于测定不同浓度的标本，至少在试剂盒标准曲线范围内能明显区分两者的RLUs。112021/7/23市场上主要全自动仪器机型及应

4、用（市场上主要全自动仪器机型及应用（1）n雅培公司Axsystem: 基于粒子的荧光偏振技术。Architect系列：基于磁分离的化学发光检测。n拜尔公司ADVIA Centaur：基于磁分离的化学发光检测。n贝克曼公司Access系列：基于磁分离的化学发光检测。n生物梅里埃公司Vidas系列：管式包被的酶促荧光检测。122021/7/23市场上主要全自动仪器机型及应用（市场上主要全自动仪器机型及应用（2）n德灵公司Dimension系列：多种技术的复合体，基于粒子的酶标检测及粒子增强与非增强的免疫比浊测定等。nDPC公司Immulite系列：基于粒子离心分离技术的化学发光检测。n强生公司Vi

5、tros系列：管式包被的化学发光检测技术。n罗氏公司Elecsys系列：基于磁分离的电化学发光检测技术。132021/7/23各种全自动仪器主要技术参数各种全自动仪器主要技术参数HCG第一个结果报告时间（min ）检测通量（T/hour）Axsym1068-120Architect i200015.6200Architect ci820015.61200ADVIA Centaur18240Access15100Access215100Vidas3060Dimension Xpand16250Dimension RXL16165700Immulite15120Immulite200035200V

6、itros2490Elecsys 2010988Elecsys 1010955142021/7/23全自动仪器实验流程要求（全自动仪器实验流程要求（1 1）n主要实验流程（主要实验流程（1）一步法一步法样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37孵育530分钟；洗涤3-5次；加入发光底物，5-15分钟检测。152021/7/23全自动仪器实验流程要求（全自动仪器实验流程要求（2 2）n主要实验流程（主要实验流程（2）一步半法一步半法样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37孵育530分钟；加入试剂3， 37孵育530分钟；洗涤3-5次；加入发光底物， 5-15分钟检测。162021/7/23全自动仪器实

7、验流程要求（全自动仪器实验流程要求（3 3）n主要实验流程（主要实验流程（3）两步法两步法样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37孵育530分钟；洗涤3-5次，加入试剂3（或试剂3+试剂4）， 37孵育530分钟；洗涤3-5次；加入发光底物， 5-15分钟检测。172021/7/23全自动仪器其他要求全自动仪器其他要求样品加量10l200 l，试剂加量50l200 l，随检测项目不同而有所增减。洗涤液加量不小于350 l。发光检测恒温为宜。PMT能达到实验所需要求。带有内置计算浓度功能及校准功能。182021/7/23需要解决的关键点（需要解决的关键点（1）n洗涤模块：洗涤模块： 洗涤次数？洗涤液种类？洗涤液体积？洗涤是否带超声？洗涤流速？是否预洗？加液速度？n磁分离模块：磁分离模块： 底吸还是侧吸？磁力大小的选择？磁分离时间？永磁还是顺磁？192021/7/23需要解决的关键点（需要解决的关键点（2）n混匀模块：混