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1、会计学1大肠杆菌感受态细胞制备及转化大肠杆菌感受态细胞制备及转化第1页/共20页第2页/共20页细菌产生感受态的类型细菌产生感受态的类型第3页/共20页第4页/共20页第5页/共20页u +质粒DNA420C热击复苏Amp+细菌处于00C,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,外源DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸盐混合物黏附于细胞表面,经短时间420C热击处理,促进细胞吸收DNA复合物。将细菌放在非选择性培养基上保温一段时间，使抗氨苄青霉素的表型表达后再转到含氨苄青霉素的选择性培养基上，长出来的菌即为转入了外源基因的菌株。第6页/共20页X10 x1000第7页/共20页第8页/共20页

2、制备好的感受态细胞每制备好的感受态细胞每100uL分装一支分装一支EP管管 轻轻混匀轻轻混匀-可以用可以用tip头轻轻搅匀头轻轻搅匀. 4保存（不加甘油）保存（不加甘油），可保存一周；，可保存一周； 加加30%甘油，甘油，-20 保存，可保存一月；保存，可保存一月； 加加30%甘油，甘油， 80 保存，可保存六月；保存，可保存六月；第9页/共20页第10页/共20页第11页/共20页1、接单菌落到接单菌落到5ml LB5ml LB液体培养基中，液体培养基中，37370 0C C、190rpm190rpm振荡培养过夜振荡培养过夜2 2、5%5%（250 ul) 250 ul) 菌液接种到含菌液接

3、种到含5 ml LB5 ml LB的试管中，的试管中， 37 370 0C C振荡培养振荡培养1-21-2小时，至小时，至ODOD600 600 0.4-0.5 0.4-0.5 （已完成）（已完成）3 3、将菌液转移到离心管中将菌液转移到离心管中4 4、离心离心 5000rpm 5000rpm ，4 40 0C C，5min5min5 5、倒出培养液倒出培养液第12页/共20页大肠杆菌大肠杆菌DH5感感受态的制备受态的制备第13页/共20页大肠杆菌DH5受态的制备-1 ml-20 min第14页/共20页第15页/共20页第16页/共20页第17页/共20页第18页/共20页p 如阴性对照中长出菌，可能原因是什么？如阴性对照中长出菌，可能原因是什么？p 菌的密度过高或培养时间过长时菌的密度过高或培养时间过长时 会在阳会在阳性菌的周围长出一些小的卫星菌落，它们是性菌的周

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