酵母菌酒精发酵试验报告

1、实验方案酵母菌酒精发酵的条件研究学院（部）：生物与化学工程学院专业： 生物工程学生姓名：鑫学号：11018150班级：生物工程二班指导教师： W一、实验目的1、学会实验的设计和操作过程2、找到酵母菌发酵时的最优条件二、培养基和实验方法及材料的确定1、玉米粉的糖化方法玉米粉的糖化采用双酶法，其工艺流程如下玉米粉加水液化糖化发酵蒸留成品酒精试验中，发酵培养按照三角瓶 100ml培养。本次工做20组是要，共 需发酵液20*100=2000ml。培养液按照100g玉米粉、300ml水。所以 共需玉米粉700g液化：取10 0 g玉米粉，加入3 0 0 mL的水，液化温度为9 0C, p H值为5.5,

2、液化时间为3 . 5 h ,液化酶的添加量为0.03 5 g/1 0 0g玉米粉糖化：糖化时的工艺条件为：糖化温度为5 8 C, p H值为4 . 5 , 糖化时间为3. 5h，糖化酶的添加量为0. 3g/10 0g玉米粉。2、活化培养基本实验在进行实验时米用察氏（czapck）培养基的配制，配方如下表蔗糖NaN03K2HP04KClMgSO4 7H2OFeS04琼脂蒸馆 水pH3g0.3g0.1g0.05 g0.05 g0.001 g1.5-2 g100ml7表3、扩大培养基扩大培养仍然用察氏（czapck）培养基，由于要用液体的，所 以将其中的琼脂配料去掉。4、发酵培养基糖化液稀释至10%

3、浓度，添加辅料(硫酸铉 0.4%), pH5.5 灭菌三、培养基的制备及酵母的活化1、准备酵母母菌一支常温下存放一天，增加菌种的活力。在母菌存 放期间制作各时期培养基2、 准备固体培养基(察氏培养基)50ml，做成8支试管斜面，扩大 培养基800ml (做扩大培养时使用)。做成8个三角瓶，每瓶200ml。 120C 灭菌 30min。3、发酵液的制备(1) 玉米粉的筛选实验前准备粉碎后的玉米粉700g。(2) 玉米粉的液化按照100g玉米粉、300m 1水的配比对玉米粉进行液化，液化方案上 文已经交代。在1000ml烧杯里，或者500ml烧杯分两次，水浴液化。器材：烧杯500ml两个，玻璃棒一

4、个，水浴锅一个，糖化酶 0.225g步骤：1、将糖化酶，玉米粉，水按照比例配置好在烧杯里。2、将配好的玉米液放于水浴锅中90C液化3.5h。边液化边搅拌。(3) 玉米粉的糖化将液化后的玉米液中按照0.3g/100ml加入液化液中。再在水浴锅中，58C糖化 3.5h。(4) 过滤糖化后的糖化液有可能有没有彻底液化的玉米颗粒，会造成浑浊，这时需要对糖化液进行过滤操作。操作步骤：最后与以上培养基一起进行灭菌处理。灭菌时，清洗 16支移液管， 与培养基一起火菌。(5) 活化步骤器材：酒精灯，接种针，母菌，斜面培养基，消毒酒精。步骤：1、将器材放于实验台上。对双手合桌面进行灭菌。对接种针 进行灼烧灭菌。

5、2、在酒精灯旁按照无菌操作步骤在酒精灯火焰旁取下试管棉塞。3、将灼烧后的接种针伸入母菌试管取粘取少量母菌， 粘取前将接种针放于试管内壁，冷却 56s。4、按照无菌操作将取过 母钟的接种针移入活化试管内并画曲线。5在酒精灯火焰旁将试管棉 塞塞上，塞前将棉塞烧一下。如此接种八支试管。并保存28 C培养2d。四、酵母的扩大培养器材：液体培养基，活化后菌种，酒精灯，接种针，消毒酒精。步骤：1、将器材放于试验台上，并对双手和桌面灭菌，接种针进 行灼烧灭菌。2、在酒精灯旁取下棉塞，并用接种针接种少量菌种 于液体培养基内。3、在酒精灯旁塞好棉塞，并于 28 C培养。根 据发酵单因素的不同，确定培养时间。其中

6、变量是菌龄的一瓶瓶 号1、2要求培养时间分别为：对数期1:1516h,对数期2:1618h, 缓冲期：2024h,稳定期：2426h。其他菌种培养20h进行接种。五、发酵培养1、不同菌龄下的发酵器材：扩大菌种的四个不同阶段即对数期 1： 1516h,对数期2:1618h, 缓冲期：2024h,稳定期：2426h。移液管四个，酒精灯，发酵液， 洗耳球。步骤：1、将对数期1的菌种和其他设备放于实验台上。2、用移液管 按照发酵液的10%勺比例移取扩大培养液到发酵液中。3、塞好棉塞 将发酵液放于30C条件下培养2d。4、按照以上步骤将不同菌龄的扩 大菌种移接到发酵液中进行发酵培养。之后进行酒精检测。2

7、、不同菌虽下的发酵器材：扩大菌种，移液管四个，酒精灯，发酵液，洗耳球。步骤：1、将实验器材放于实验台上。2、用移液管移取8%勺扩大菌 种到发酵液中。3、塞好棉塞，将发酵液存放于 30C条件下发酵2dc4、按照以上步骤，分别移取10% 12% 14%勺扩大菌种到发酵液中， 30C培养2d,之后进行酒精检测。3、不同醪液浓度下的发酵器材：扩大菌种，移液管四个，酒精灯，发酵液，洗耳球。步骤：1、将实验器材放于实验台上。2、用移液管移取10%勺扩大菌 种到4个发酵液中。3、制作不同浓度的醪液，分别按照1:2,1:3,1:41:5。3、塞好棉塞，将四个发酵液三角瓶编号 1、2、3、4。将发酵 液按照序号

8、存放于30C条件下发酵2d。4、对发酵后的发酵液进行酒 精检测。4、不同发酵时间下的发酵器材：扩大菌种，移液管四个，酒精灯，发酵液，洗耳球。步骤：1、将实验器材放于实验台上。2、用移液管移取10%勺扩大菌 种到4个发酵液中。3、塞好棉塞，将发酵液将四个发酵液三角瓶编 号1、2、3、4。存放于30C条件下发酵。按照序号分别培养2d、2.5d、 3d、3.5d。4、对发酵后的发酵液进行酒精检测。六、酒精检测器材：蒸馆设备一套，200ml量筒4个，酒精检测器一个，步骤：1、将100ml发酵液配制成200ml溶液于蒸馆烧瓶中。2、对 200ml发酵液进行蒸馆，蒸馆出100ml酒精溶液。3、取一定量的蒸

9、 留出的酒精溶液于试管中放于酒精检测器中进行酒精检测并记录数据，以上的四种发酵方法，均使用这种检测方法。数据记录于下表二 中：表二注：发酵温度：T 发酵时间：D 接种量：S 菌龄：H进行发酵培养是，除变量以外，其他条件按照，T=30C、S=10% H=2024h、D=2d瓶号1234S/%8101214广单H对数期1对数期2缓冲期稳定期料液比1:21:31:41:5广单D/d22.533.5七、最优条件的培养及最优条件确定1、以上四种最优条件共同作用下的发酵器材：扩大培养液2024h菌龄，发酵液，移液管，洗耳球步骤：1、将实验器材放于实验台上。2、用移液管移取8%勺扩大菌 种到发酵液中。3、塞好棉塞，将发酵液存放于 30C条件下发酵2d 之后进行酒精检测，检测方法与六中相同。2、最优条件的确定、八、实验进程及任务按拍&9:进入实验室进行仪器交接，同时取出母菌，进行活 化前的预处理。&10:上午准备实验仪器和实验所用的药品进行灭菌处理和玉米粉的液化和糖化等，下午进行活化的