酶学PPT学习教案

1、一一 酶促反应特点及其分类酶促反应特点及其分类1 酶的催化特性酶的催化特性酶催化效率高酶催化效率高 酶催化的效率比无机催化剂高酶催化的效率比无机催化剂高1051013倍。极倍。极少量的酶可使大量的物质很快地发生化学反应。如少量的酶可使大量的物质很快地发生化学反应。如: 催化催化H2O2分解为分解为H2O和和O2的反应，铁离子的催化的反应，铁离子的催化效率是效率是610-4 摩尔摩尔/摩尔铁摩尔铁秒，过氧化氢酶为秒，过氧化氢酶为5106 摩尔摩尔/摩尔酶摩尔酶秒。用秒。用 -淀粉酶催化淀粉水解，淀粉酶催化淀粉水解，1 g结晶酶在结晶酶在65条件下可催化条件下可催化2106 g淀粉水解。淀粉水解。

2、第1页/共68页酶催化作用具有高度的专一性酶催化作用具有高度的专一性第2页/共68页反应条件温和反应条件温和 酶催化的反应都是在常温、常压和近中性酶催化的反应都是在常温、常压和近中性pH 条件下进行的。酶作为工业催化剂时，不用耐高温条件下进行的。酶作为工业催化剂时，不用耐高温和耐高压的设备，不需耐酸碱的容器，产生安全、和耐高压的设备，不需耐酸碱的容器，产生安全、快速，有利于改善劳动条件和环境保护。快速，有利于改善劳动条件和环境保护。酶催化活性受调节和控制酶催化活性受调节和控制 生命现象表现出生物体内化学反应历程的有序生命现象表现出生物体内化学反应历程的有序性和协调性。生物体内的酶促反应是受多方

3、面因素性和协调性。生物体内的酶促反应是受多方面因素的调节和控制的，以维持正常的代谢平衡，使生命的调节和控制的，以维持正常的代谢平衡，使生命活动的节奏地进行。活动的节奏地进行。第3页/共68页2 酶的命名与分类酶的命名与分类习惯命名法习惯命名法第4页/共68页国际系统命名法国际系统命名法第5页/共68页习惯名称习惯名称系系 统统 名名 称称催催 化化 反反 应应 乳酸乳酸 脱氢酶脱氢酶 谷丙谷丙 转氨酶转氨酶 蔗糖酶蔗糖酶L-乳酸乳酸: NAD+氧氧化还原酶化还原酶L-丙氨酸丙氨酸: -酮戊酮戊二酸转氨酶二酸转氨酶蔗糖蔗糖(: 水水)水解酶水解酶L-乳酸乳酸+NAD+丙丙酮酸酮酸+NADH+H+

4、L-丙氨酸丙氨酸+ -酮戊二酮戊二酸转酸转丙酮酸丙酮酸+L-谷谷氨酸氨酸蔗糖蔗糖+水水葡萄糖葡萄糖+果糖果糖系系 统统 命命 名名 法法第6页/共68页国际系统分类法及编号国际系统分类法及编号第7页/共68页6大类酶编号及作用方式大类酶编号及作用方式编号编号 酶酶 类类作用方式作用方式1 氧化还原酶类氧化还原酶类 AH2+B A+BH22 转移酶类转移酶类 A-R+B A+B-R3 水解酶类水解酶类 A-B+HOH AOH+BH4 裂合酶类裂合酶类 AB A+B 5 异构酶类异构酶类 A B6 合成酶类合成酶类 A+B+ATP AB+ADP+P第8页/共68页二二 酶的结构与功能的关系酶的结构

5、与功能的关系1 酶的化学组成酶的化学组成第9页/共68页第10页/共68页2 酶的活性中心酶的活性中心第11页/共68页第12页/共68页部分酶活中心的必需基团部分酶活中心的必需基团酶酶氨基酸残基数氨基酸残基数酶活性中心必需基团酶活性中心必需基团 牛胰核糖核酸酶牛胰核糖核酸酶A124 His12 His119 Lys41 溶菌酶溶菌酶129 Asp52 Glu35 牛胰凝乳酶牛胰凝乳酶245 His57 Asp102 Ser195 牛胰蛋白酶牛胰蛋白酶238 His46 Asp90 Ser183 木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶212 Cys25 HIs159 弹性蛋白酶弹性蛋白酶240 His45 As

6、p93 Ser188 枯草杆菌蛋白酶枯草杆菌蛋白酶275 His64 Ser221 碳酸酐酶碳酸酐酶258His93ZnHis95His117第13页/共68页3 酶原的激活酶原的激活第14页/共68页第15页/共68页三三 酶促反应动力学酶促反应动力学第16页/共68页1 米氏方程米氏方程 在低底物浓度时，反应在低底物浓度时，反应速度与底物浓度成正比，速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。表现为一级反应特征。 继续增加底物浓度时，继续增加底物浓度时，反应速度虽然仍在增加，反应速度虽然仍在增加，但比较缓慢，不再与底但比较缓慢，不再与底物浓度成正比，表现为物浓度成正比，表现为混合级反应。混合

7、级反应。 当底物浓度达到一定值，几乎所有的酶都与底物结当底物浓度达到一定值，几乎所有的酶都与底物结合合, 反应速度达到最大值反应速度达到最大值(Vmax)，此时再增加底物浓，此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。度，反应速度不再增加，表现为零级反应。第17页/共68页 1913年年Michaelis和和Menten根据中间产物学说，根据中间产物学说，对酶促反应进行了动力学分析，对酶促反应进行了动力学分析， 推导出酶促反应速推导出酶促反应速度与底物浓度之间基本的关系式，称为度与底物浓度之间基本的关系式，称为米氏方程米氏方程:式中式中 v 反应初速度反应初速度 Vmax 最大反应速

8、度最大反应速度 S 底物浓度底物浓度 Km 米氏常数米氏常数mKSSVvmax 米氏方程所表达的反应速度米氏方程所表达的反应速度v与底物浓度与底物浓度S的的关系与实验所得关系与实验所得vS关系完全一致。这为酶促反关系完全一致。这为酶促反应历程的中间产物学说提供了动力学依据。应历程的中间产物学说提供了动力学依据。第18页/共68页 根据中间产物学说，酶根据中间产物学说，酶E先与底物先与底物S结合成中间结合成中间产物产物ES，然后，然后ES分解生成产物分解生成产物P并释放出酶，即并释放出酶，即: 式中，式中，k1、k2、k3分别表示各步反应的速度常数。分别表示各步反应的速度常数。 如果以产物如果以

9、产物P的生成速度代表酶反应速度的生成速度代表酶反应速度v，根，根据质量作用定律，则据质量作用定律，则v取决于中间产物的浓度取决于中间产物的浓度ES，即：即： v = k3 ES ( 2 )( 1 )k3k2k1E+PESE+S第19页/共68页 以以E表示酶的浓度，表示酶的浓度，S表示底物浓度，则表示底物浓度，则ES的的生成和分解速度可用下式表示：生成和分解速度可用下式表示： ES生成速度生成速度 = k1ES ES分解速度分解速度 = k2ES + k3ES = (k2+k3)ES 当当ES生成速度等于分解速度时，反应系统达到生成速度等于分解速度时，反应系统达到动态平衡，即动态平衡，即: k

10、1ES = (k2+k3)ES132kkkESSE则则令令132kkkKm代入上式得代入上式得: ESSEKm( 3 )第20页/共68页将将(4)式代入式代入(2)式得式得:03SKSEkvm( 5 )由上式得由上式得:0SKSEESm( 4 )(0ESSESEKm将其代入将其代入(3)式式, 得得: (3)式中式中E和和ES的数值都难测定，需将其从的数值都难测定，需将其从(3)式消去。设酶的总浓度为式消去。设酶的总浓度为E0，则游离酶分子浓度为，则游离酶分子浓度为: E = E0 ES 第21页/共68页 米氏方程是酶促反应最基本的动力学关系式，米氏方程是酶促反应最基本的动力学关系式，表达

11、了酶促反应速度表达了酶促反应速度v与底物浓度与底物浓度S之间的关系，之间的关系，通过常数通过常数Km和最大反应速度和最大反应速度Vmax表达了酶的性质及表达了酶的性质及反应条件与反应速度反应条件与反应速度v之间的关系。之间的关系。maxSKSVvm( 7 ) 将将(6)式代入式代入(5)式，得米氏方程：式，得米氏方程： 当底物浓度当底物浓度SE0时时, 所有的酶都被底物所所有的酶都被底物所饱和，即饱和，即E0都以都以ES形式存在。此时，反应速度最形式存在。此时，反应速度最大大(Vmax), Vmax为一常数，与为一常数，与E0成正比，即：成正比，即： Vmax = k3E0 ( 6 )第22页

12、/共68页 在米氏方程中的在米氏方程中的Km称为米氏常数，是由各个速称为米氏常数，是由各个速度常数共同决定的反应总平衡常数，即度常数共同决定的反应总平衡常数，即 Km = (k2+k3)/k1 v=Vmax/2时，代入米氏方程得时，代入米氏方程得Km=S。所以，。所以，Km可定义为反应速度达最大速度一半时的底物浓度。或可定义为反应速度达最大速度一半时的底物浓度。或者说，者说，Km是使反应系统中有一半的酶分子处于被底是使反应系统中有一半的酶分子处于被底物饱和状态时所必需具有的底物浓度。底物浓度单位物饱和状态时所必需具有的底物浓度。底物浓度单位为为mol/L。第23页/共68页 Km在特定的反应条

13、件下，是酶的一个特征常在特定的反应条件下，是酶的一个特征常数，与酶的性质有关而与酶的浓度无关，不同的数，与酶的性质有关而与酶的浓度无关，不同的酶具有不同的酶具有不同的Km值。值。 Km值是在固定的底物、一定的温度、一定的值是在固定的底物、一定的温度、一定的pH等特定的条件下才能作为常数。等特定的条件下才能作为常数。 Km值的大小可代表酶与底物的亲和力，值的大小可代表酶与底物的亲和力，Km值值越大，越大，ES易分解，易分解，E与与S的亲和力小；的亲和力小；Km值越小，值越小，E与与S的亲和力大，反应容易发生。的亲和力大，反应容易发生。第24页/共68页1)温度对酶作用的影响温度对酶作用的影响10

14、2030405060708090020406080100Temperature OCRelative Activity (%) 温度对酶促反应速度的影响有两个方面：一是温度对酶促反应速度的影响有两个方面：一是随着温度的升高，酶促反应速度加快；二是温度升高，随着温度的升高，酶促反应速度加快；二是温度升高，酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失，反应速度降低。至丧失，反应速度降低。 每一种酶都有一个每一种酶都有一个最最适温度适温度。在最适温度条件。在最适温度条件下，反应速度最大。酶的下，反应速度最大。酶的最适温度受作用时间，酶最适温度受作

15、用时间，酶浓度、底物、激活剂、抑浓度、底物、激活剂、抑制剂等因素的影响。制剂等因素的影响。4 影响酶作用的因素影响酶作用的因素第25页/共68页2)pH对酶作用的影响对酶作用的影响 不同酶的最适不同酶的最适pH值不值不同，一般在同，一般在6.08.0之间。之间。最适最适pH是酶的一个特征性是酶的一个特征性参数，并非常数，在一定参数，并非常数，在一定的条件下为某一确定的数的条件下为某一确定的数值。过高或过低的值。过高或过低的pH影响影响酶蛋白分子空间结构的稳酶蛋白分子空间结构的稳定性。定性。第26页/共68页3)酶浓度对酶作用的影响酶浓度对酶作用的影响vE酶浓度酶浓度E与反应速度与反应速度v的关

16、系的关系第27页/共68页4)激活剂对酶作用的影响激活剂对酶作用的影响第28页/共68页5)抑制剂对酶作用的影响抑制剂对酶作用的影响第29页/共68页不可逆抑制作用不可逆抑制作用第30页/共68页 可逆抑制剂与酶蛋白结合成复合物是可逆的。可可逆抑制剂与酶蛋白结合成复合物是可逆的。可用透析，分子筛过滤等方法除去，恢复酶的活性。用透析，分子筛过滤等方法除去，恢复酶的活性。 竞争性抑制作用竞争性抑制作用 是一种常见的可逆抑制作用。是一种常见的可逆抑制作用。抑制剂分子结构与底物相似，在酶促反应中，抑制剂抑制剂分子结构与底物相似，在酶促反应中，抑制剂(I)、底物、底物(S)竞争与酶的活性中心结合。当抑制

17、剂与竞争与酶的活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结果是酶促反应被抑制了。果是酶促反应被抑制了。 竟争性抑制可以通过增大底物浓度，即提高底物竟争性抑制可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力来消除。由于竞争性抑制剂阻碍的竞争能力来消除。由于竞争性抑制剂阻碍E和和S的的结合，所以结合，所以Km值随值随I加而增大，加而增大，Vmax的数值不变。的数值不变。第31页/共68页第32页/共68页 非竞争性抑制作用非竞争性抑制作用 底物和抑制剂可同时与酶底物和抑制剂可同时与酶发生可逆结合，两者没有竞争作用，难形成发生可逆结合

18、，两者没有竞争作用，难形成EIS三三位一体的复合物：位一体的复合物：ESIESEEIEIS+I+S+I+S 复合物复合物EIS或或ESI不能进一步分解为产物，而不能进一步分解为产物，而使酶促反应速度降低。这类抑制剂与酶活性中心以使酶促反应速度降低。这类抑制剂与酶活性中心以外的基团结合，不能用增加底物浓度的方法解除抑外的基团结合，不能用增加底物浓度的方法解除抑制，可用透析、分子筛过滤方法除去抑制剂。制，可用透析、分子筛过滤方法除去抑制剂。第33页/共68页第34页/共68页两种类型可逆抑制的动力学特点两种类型可逆抑制的动力学特点类型类型公公 式式VmaxKm无抑制无抑制剂剂(正常正常)不变不变不

19、变不变竞争性竞争性抑制剂抑制剂不变不变增大增大非竞争性非竞争性抑制剂抑制剂减小减小不变不变maxSKSVvm)/ 1 (maxSKIKSVvimi)(/ 1 (maxSKKISVvmii第35页/共68页四四 酶作用的机制酶作用的机制 在一个反应体系中，反应物的每一个分子所在一个反应体系中，反应物的每一个分子所含的能量并不相同。根据化学反应的有效碰撞原含的能量并不相同。根据化学反应的有效碰撞原理，只有那些能量达到或超过某一水平的分子才理，只有那些能量达到或超过某一水平的分子才能参加反应，这种分子称为活化态分子。反应物能参加反应，这种分子称为活化态分子。反应物分子由初始能量状态转化为活化状态所需

20、要的自分子由初始能量状态转化为活化状态所需要的自由能称为活化自由能，单位为焦由能称为活化自由能，单位为焦/摩尔。摩尔。第36页/共68页第37页/共68页第38页/共68页 化学反应速度与底物浓度成正比，酶促反应化学反应速度与底物浓度成正比，酶促反应的高效性是由于在酶活性中心区域的底物有效浓的高效性是由于在酶活性中心区域的底物有效浓度比反应体系的底物浓度高得多。有人测得某底度比反应体系的底物浓度高得多。有人测得某底物在溶液中的浓度为物在溶液中的浓度为0.001 mol/L，而在酶活性中，而在酶活性中心的浓度高达心的浓度高达100 mol/L，增大了，增大了105倍。要使反应倍。要使反应进行，还

21、需使底物的反应基团与酶活性中心的催进行，还需使底物的反应基团与酶活性中心的催化基团相互严格地定向，当底物与酶活性中心结化基团相互严格地定向，当底物与酶活性中心结合时，酶蛋白发生一定的构象变化，使两者正确合时，酶蛋白发生一定的构象变化，使两者正确地排列并定向，这种定向效应也是酶促反应高效地排列并定向，这种定向效应也是酶促反应高效性的重要原因。性的重要原因。2 决定酶作用高效率的机制决定酶作用高效率的机制1)底物和酶的靠近与定向底物和酶的靠近与定向第39页/共68页第40页/共68页 某些酶能与底物形成一个反应活性很高的共价中某些酶能与底物形成一个反应活性很高的共价中间复合物，这样底物只需越过较低

22、的活化能阈就可间复合物，这样底物只需越过较低的活化能阈就可形成产物，而提高催化反应速度。称为共价催化作形成产物，而提高催化反应速度。称为共价催化作用。共价催化有两种类型：亲核催化和亲电催化。用。共价催化有两种类型：亲核催化和亲电催化。 亲核催化亲核催化 由一个亲核的催化剂提供一对电子由一个亲核的催化剂提供一对电子对底物才能进行的催化反应，称亲核催化作用。这对底物才能进行的催化反应，称亲核催化作用。这种种“亲核亲核”攻击在一定程度上控制反应速度。攻击在一定程度上控制反应速度。 亲电催化亲电催化 亲电催化作用涉及到亲电催化剂从亲电催化作用涉及到亲电催化剂从底物分子中吸取一个电子对。在酶蛋白中只有一

23、种底物分子中吸取一个电子对。在酶蛋白中只有一种特殊的亲电侧链基团，即亲核碱基被质子化了的共特殊的亲电侧链基团，即亲核碱基被质子化了的共轭酸如轭酸如NH3+。2)共价催化作用共价催化作用第41页/共68页 狭义的酸碱催化狭义的酸碱催化 狭义的酸碱催化是指反应狭义的酸碱催化是指反应速度的增加仅仅与速度的增加仅仅与H+或或OH-离子浓度成比例。离子浓度成比例。 广义的酸碱催化广义的酸碱催化 广义的酸碱催化则与质广义的酸碱催化则与质子供体或质子受体的浓度成比例。在催化反应中子供体或质子受体的浓度成比例。在催化反应中, 重要的是广义酸碱催化。重要的是广义酸碱催化。 酶蛋白中起酸碱催化的功能基团有酶蛋白中

24、起酸碱催化的功能基团有: 氨基氨基, 巯巯基基, 酚羟基酚羟基, 羧基和咪唑基等羧基和咪唑基等, 以咪唑基最重要。以咪唑基最重要。 影响酸碱催化反应速度的因素有两个影响酸碱催化反应速度的因素有两个: 一是功一是功能基上的酸碱强度能基上的酸碱强度, 二是功能基提供质子和接受质二是功能基提供质子和接受质子的速度。子的速度。3)酸碱催化酸碱催化第42页/共68页3 决定酶作用专一性的机制决定酶作用专一性的机制 酶分子活性中心的组成和三维构象是酶活性的酶分子活性中心的组成和三维构象是酶活性的结构基础。酶对底物的专一性，可从活性中心的结结构基础。酶对底物的专一性，可从活性中心的结构给予解释。构给予解释。

25、Fischer提出了提出了“锁钥假说锁钥假说”, 认为只认为只有特定的底物才能契入与之互补的酶分子表面的有特定的底物才能契入与之互补的酶分子表面的“缝隙缝隙”中，底物分子象钥匙那样专一地嵌进酶的中，底物分子象钥匙那样专一地嵌进酶的活性中心部位，而且底物分活性中心部位，而且底物分子子化学反应的敏感部位化学反应的敏感部位与酶活性中心的催化基团具有密切互补的关系。锁与酶活性中心的催化基团具有密切互补的关系。锁钥假说可解释立体异构专一性，但不能解释酶专一钥假说可解释立体异构专一性，但不能解释酶专一性的所有现象。性的所有现象。1)锁钥假说锁钥假说第43页/共68页第44页/共68页 Koshland在锁

26、钥的基础上，提出了诱导契合在锁钥的基础上，提出了诱导契合假说。他认为酶的初始状态的活性基团并非处于假说。他认为酶的初始状态的活性基团并非处于他们起催化作用的最适位置，但是酶分子与底物他们起催化作用的最适位置，但是酶分子与底物分子相互接近时，酶蛋白受底物分子的诱导，其分子相互接近时，酶蛋白受底物分子的诱导，其构象将发生有利于与底物结合的变化，从而使酶构象将发生有利于与底物结合的变化，从而使酶与底物互相契合而进行反应。有些实验证明酶与与底物互相契合而进行反应。有些实验证明酶与底物结合时，确有显著的构象变化。目前公认为底物结合时，确有显著的构象变化。目前公认为诱导契合假说比较符合实际。诱导契合假说比

27、较符合实际。2)诱导契合假说诱导契合假说第45页/共68页第46页/共68页五五 酶活力的测定酶活力的测定 定量描述生物材料或酶制剂中酶的存在数量时定量描述生物材料或酶制剂中酶的存在数量时, 不能直接用质量或体积表示不能直接用质量或体积表示, 通常根据酶专一性催化通常根据酶专一性催化能力的特点能力的特点, 用酶活性来表示酶的存在数量。用酶活性来表示酶的存在数量。酶活力酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。是指酶催化一定化学反应的能力。 酶活力的大小酶活力的大小, 规定用单位制剂中的酶活性单位规定用单位制剂中的酶活性单位数表示。对液体酶制剂，用每毫升酶液中的酶活性数表示。对液体酶制剂，用每毫升酶液

28、中的酶活性单位数单位数(u/ml)表示表示; 对酶的粉剂对酶的粉剂, 用每克酶制剂中的酶用每克酶制剂中的酶活性单位数活性单位数(u/g)表示。酶促反应速度越大表示。酶促反应速度越大, 酶活性越酶活性越高。所以高。所以, 测定酶促反应速度测定酶促反应速度, 可了解酶活力大小。可了解酶活力大小。 第47页/共68页 酶单位酶单位是人为规定的一个对酶进行定量描述的是人为规定的一个对酶进行定量描述的基本度量单位，其含义是在一定反应条件下，单位基本度量单位，其含义是在一定反应条件下，单位时间内完成一个规定的反应所需的酶量。时间内完成一个规定的反应所需的酶量。1961年国年国际生化学会酶学委员会对酶单位做

29、了统一的规定：际生化学会酶学委员会对酶单位做了统一的规定：在酶作用的最适条件在酶作用的最适条件(最适底物、最适最适底物、最适pH、最适缓、最适缓冲液的离子强度及冲液的离子强度及25)下，每分钟内催化下，每分钟内催化1.0mol底物转化为产物的酶量为一个酶活力国际单位底物转化为产物的酶量为一个酶活力国际单位(IU)。国际酶活力单位在应用中比较繁锁，一般采用各自国际酶活力单位在应用中比较繁锁，一般采用各自规定的单位，如我国标准规定的单位，如我国标准QB 546-80中关于中关于-淀粉淀粉酶活力单位规定为：每小时分解酶活力单位规定为：每小时分解1克可溶性淀粉的克可溶性淀粉的酶量为一个酶单位。酶量为一

30、个酶单位。第48页/共68页 单位酶制剂中的酶活单位数单位酶制剂中的酶活单位数, 即为酶的即为酶的比活力比活力。比活力是酶的定量描述的基本方法比活力是酶的定量描述的基本方法, 有多数不同的表有多数不同的表达形式达形式, 而用于不同的场合。如每克酶制剂中的酶活而用于不同的场合。如每克酶制剂中的酶活单位数单位数(u/g)或每毫升酶液中的酶活单位数或每毫升酶液中的酶活单位数(u/ml)都都是比活力是比活力, 是酶学研究、酶制剂生产、流通和应用领是酶学研究、酶制剂生产、流通和应用领域中最常用的酶量表达形式。域中最常用的酶量表达形式。1964年国际酶学委员年国际酶学委员会还将酶的会还将酶的“比活力比活力

31、”定义为定义为: “每毫克蛋白质所含每毫克蛋白质所含酶活单位数酶活单位数(u/mg蛋白质蛋白质)”。第49页/共68页2 酶活力的测定方法酶活力的测定方法 常规测定酶活力的操作程序为常规测定酶活力的操作程序为: 将样品酶液将样品酶液适当稀释适当稀释, 在最适条件下进行酶促反应在最适条件下进行酶促反应, 通过化学通过化学分析或仪器分析的方法测定反应量分析或仪器分析的方法测定反应量, 根据酶单位根据酶单位定义和实验数据计算出酶活力定义和实验数据计算出酶活力, 即每毫升酶液或即每毫升酶液或每克酶粉中的酶活力单位数。每克酶粉中的酶活力单位数。第50页/共68页1)关于酶液的稀释关于酶液的稀释第51页/

32、共68页2)关于酶促反应条件及保证措施关于酶促反应条件及保证措施 测酶活所用的反应条件应该是最佳条件测酶活所用的反应条件应该是最佳条件, 所谓所谓最适条件包括最适温度、最适最适条件包括最适温度、最适pH、足够大的底物、足够大的底物浓度、适宜的离子强度、适当稀释的酶液及严格浓度、适宜的离子强度、适当稀释的酶液及严格的反应时间的反应时间, 抑制剂不可有抑制剂不可有, 辅助因子不可缺。测辅助因子不可缺。测酶活时必须严格地按照标准去做酶活时必须严格地按照标准去做, 这样才能保证分这样才能保证分析结果的可重复性。析结果的可重复性。第52页/共68页3)反应量的测定反应量的测定4)计算酶活力计算酶活力 酶

33、活力计算是将实验中所用各种参数和所酶活力计算是将实验中所用各种参数和所得实验数据换算成每毫升得实验数据换算成每毫升(或每克或每克)酶制剂中所含酶制剂中所含活力单位数。制剂的单位要与剂型相符，液体活力单位数。制剂的单位要与剂型相符，液体酶用毫升，粉剂用克。酶用毫升，粉剂用克。第53页/共68页六六 酶的多样性酶的多样性1 核酶核酶1)酶性酶性RNA第54页/共68页第55页/共68页2)酶性酶性DNA第56页/共68页2 寡聚酶、同工酶和变构酶寡聚酶、同工酶和变构酶 大多数寡聚酶由偶数亚基组成，以四聚体为大多数寡聚酶由偶数亚基组成，以四聚体为常见，奇数亚基者甚少，分子量比较大。不同寡常见，奇数亚

34、基者甚少，分子量比较大。不同寡聚酶分子的亚基类别组成不一样，有些由结构和聚酶分子的亚基类别组成不一样，有些由结构和功能相同的亚基组成，每个亚基上都有酶活中心，功能相同的亚基组成，每个亚基上都有酶活中心，还具有多个与调节因子结合的位点，称还具有多个与调节因子结合的位点，称调节中心调节中心。调节中心负责与调节因子结合，对酶活性进行调调节中心负责与调节因子结合，对酶活性进行调节。有些酶是由结构不同，功能也不同的亚基组节。有些酶是由结构不同，功能也不同的亚基组成。其中一种亚基具有酶活中心，称为成。其中一种亚基具有酶活中心，称为催化亚基催化亚基，另一种亚基只有调节中心，称为另一种亚基只有调节中心，称为调节亚基调节亚基。第57页/共68页 同工酶是指催化同一种化学反应，但酶蛋白分同工酶是指催化同一种化学反应，但酶蛋白分子组成和结构有所不同的一组酶。他们存在于同一子