抗菌药物筛选的实验方法与技术教案ppt课件

1、2021-12-14综合化学实验综合化学实验-化学生物学专题实验化学生物学专题实验 指点指点教师教师：马马林，蔡小玲林，蔡小玲 化化学与学与化化学学工程工程学学院院抗菌药物挑选抗菌药物挑选的实验方法与的实验方法与技术技术 2021-12-14v 一个新的化合物或分别提取有效成分能否有抗菌作用，需一个新的化合物或分别提取有效成分能否有抗菌作用，需求药理实验来证明，首先采用体外实验方法，察看实验物求药理实验来证明，首先采用体外实验方法，察看实验物对细菌有无杀灭作用或抑制造用，体外实验的重要性在于对细菌有无杀灭作用或抑制造用，体外实验的重要性在于方法简便，用药量少，短时间内能判别药物抗菌的广度和方法

2、简便，用药量少，短时间内能判别药物抗菌的广度和强度，为深化体外实验和体内药效研讨提供数据。强度，为深化体外实验和体内药效研讨提供数据。v 体外实验是挑选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。体外实验是挑选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统遭到抑制等，因此出现细菌不生长或部分抑制，可借以统遭到抑制等，因此出现细菌不生长或部分抑制，可借以判别药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。体外实验是判别药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。体外实验是细菌与药物直接接触，没有机体诸要素参与，故体外和体细菌与药

3、物直接接触，没有机体诸要素参与，故体外和体内实验的结果不一定完全一致，需两方面综合分析进展评内实验的结果不一定完全一致，需两方面综合分析进展评价。价。2021-12-14一、实验目的一、实验目的1，掌握培育基的制备、，掌握培育基的制备、高压蒸气灭菌、菌种培高压蒸气灭菌、菌种培育、接种等微生物培育育、接种等微生物培育技术；技术；2，掌握化合物抗菌、抑，掌握化合物抗菌、抑菌活性挑选技术；菌活性挑选技术；3，掌握微孔板法、抑菌，掌握微孔板法、抑菌圈法抗菌最小浓度测试圈法抗菌最小浓度测试等根本操作技术。等根本操作技术。4，学会运用各种仪器设，学会运用各种仪器设备备 。实验中运用的仪器设备：实验中运用的

4、仪器设备：1，手提式高压蒸汽灭菌锅；，手提式高压蒸汽灭菌锅；2，超净任务台；，超净任务台；3，各种移液器；，各种移液器；4，细菌恒温培育箱；，细菌恒温培育箱；5，微生物培育摇床；，微生物培育摇床；6，酶标仪；，酶标仪；2021-12-14二、微生物培育基的配制、灭菌与培育二、微生物培育基的配制、灭菌与培育培育基是指利用人工方法将适培育基是指利用人工方法将适宜微生物生长繁衍成积累代谢宜微生物生长繁衍成积累代谢产物的各种营养物质混合配制产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。主要用于微而成的营养基质。主要用于微生物的分别、培育、鉴定以及生物的分别、培育、鉴定以及菌种保藏等方面。菌种保藏等方面。培

5、育基普通应含有微生物生长培育基普通应含有微生物生长繁衍所需求的碳源、氮源、能繁衍所需求的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等源、无机盐、生长因子和水等营养成分。营养成分。此外，为了满有微生物生长繁此外，为了满有微生物生长繁衍或积累代谢产物的要求，还衍或积累代谢产物的要求，还必需控制培育基的必需控制培育基的pHpH。培育基可分为天然培育基、合成培培育基可分为天然培育基、合成培育基和半合成培育基。育基和半合成培育基。按培育基的物理形状，可将培育基按培育基的物理形状，可将培育基分为固体培育基、半固体培育基和分为固体培育基、半固体培育基和液体培育基。液体培育基。固体培育基是指在液体培育基中参固体培

6、育基是指在液体培育基中参与一定量的凝固剂与一定量的凝固剂( (常加常加1.5%-2%1.5%-2%的的琼脂琼脂) )经融化冷凝而成。经融化冷凝而成。半固体培育这是指在液体培育基中半固体培育这是指在液体培育基中参与参与0.80.8-1-1左右的琼脂，经融左右的琼脂，经融化冷凝而成。化冷凝而成。液体培育基是指培育基中不加凝固液体培育基是指培育基中不加凝固剂琼脂，培育基呈液体形状。剂琼脂，培育基呈液体形状。 2021-12-14一根本原理一根本原理v正确掌握培育基的配制方法是从事微生物学实验正确掌握培育基的配制方法是从事微生物学实验任务的重要根底。由于微生物种类及代谢类型的任务的重要根底。由于微生物

7、种类及代谢类型的多样性，因此用于培育微生物培育基的种类也很多样性，因此用于培育微生物培育基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差别。多，它们的配方及配制方法虽各有差别。v但普通培育基的配制程序却大致一样，例如器皿但普通培育基的配制程序却大致一样，例如器皿的预备，培育基的配制与分装，棉塞的制造，培的预备，培育基的配制与分装，棉塞的制造，培育基的灭菌，斜面与平板的制造以及接菌等根本育基的灭菌，斜面与平板的制造以及接菌等根本环节大致一样。环节大致一样。 2021-12-14二实验过程二实验过程1 1，液体及固体培育基的配制过，液体及固体培育基的配制过程程 普通培育基的组成普通培育基的组成 牛肉膏

8、牛肉膏 0.5g 0.5g蛋白胨蛋白胨 1g 1g NaCl 0.5g NaCl 0.5g 琼脂琼脂 1.5-2g 1.5-2g水水 100ml 100mlpH 7.2 pH 7.2 液体培育基不加琼脂即可。液体培育基不加琼脂即可。(1)(1)称量及溶化称量及溶化 分别称取蛋白胨、分别称取蛋白胨、NaClNaCl、牛肉膏置于另一小烧杯中，进、牛肉膏置于另一小烧杯中，进展称量。然后参与少量蒸馏水于小烧展称量。然后参与少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化。杯中，加热融化。(2)(2)调调pH pH 待溶液冷至室温时，用待溶液冷至室温时，用0.1mol/L NaOH0.1mol/L NaOH溶液调溶液调p

9、HpH至至7.27.2。(3)(3)定容定容 将溶液倒入量筒中，补充将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。水量至所需体积。(4)(4)固体培育基参与所需量的琼脂，固体培育基参与所需量的琼脂，加热融化，补充失水。加热融化，补充失水。(5)(5)分装、加塞、包扎。分装、加塞、包扎。(6)(6)高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌100 Pa100 Pa灭菌灭菌20 min20 min2021-12-142 2，培育基的分装，培育基的分装液体培育基装入试管培育液体培育基装入试管培育基的量视试管大小及需求基的量视试管大小及需求而定，假设所用试管大小而定，假设所用试管大小为为1515150 mm150 mm时，液体

10、培时，液体培育基可分装至试管高度育基可分装至试管高度1/41/4左右为宜约左右为宜约5ml5ml；分装团体培育基时，在琼分装团体培育基时，在琼脂完全融化后，应趁热分脂完全融化后，应趁热分装于试管中分装量为管高装于试管中分装量为管高1/5(1/5(约约4-5ml)4-5ml)。2021-12-143 3，棉塞的制造及试管、锥形瓶，棉塞的制造及试管、锥形瓶的包扎的包扎 1 1试管棉塞的制造试管棉塞的制造 制棉塞时，应选用大小、制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一快，铺厚薄适中的普通棉花一快，铺展于左手拇指和食指如成的圆展于左手拇指和食指如成的圆孔上，用右手食指将棉花从中孔上，用右手食指将棉花

11、从中央压入团孔中制成棉塞，然后央压入团孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。直接压入试管或锥形瓶口。 将装好培育基并塞好棉塞或盖将装好培育基并塞好棉塞或盖好管帽的试管捆成好管帽的试管捆成捆，外面捆，外面包上一层牛皮纸。用铅笔注明包上一层牛皮纸。用铅笔注明培育基称号及配制日期。灭菌培育基称号及配制日期。灭菌待用。待用。2021-12-144 4，培育基的灭菌，培育基的灭菌 高压蒸汽灭菌是微生物学实验、发酵高压蒸汽灭菌是微生物学实验、发酵工业消费、以及外科手术器械等方面工业消费、以及外科手术器械等方面最常用的一种灭菌方法。最常用的一种灭菌方法。 1 1翻开灭菌锅盖，加适量水；翻开灭菌锅盖，加适

12、量水；2 2将待灭菌物品放入灭菌桶内。将待灭菌物品放入灭菌桶内。3 3将盖上的软管插入灭菌桶的槽将盖上的软管插入灭菌桶的槽内，加盖，上下螺栓口对齐，均匀旋内，加盖，上下螺栓口对齐，均匀旋紧螺栓，使锅密闭。紧螺栓，使锅密闭。4 4翻开放汽阀，加热，自锅内开翻开放汽阀，加热，自锅内开场产生蒸汽后再关紧放汽阀，待压力场产生蒸汽后再关紧放汽阀，待压力逐渐上升至所需温度时，控制热源，逐渐上升至所需温度时，控制热源，维持所需压力和温度，并开场计时维持所需压力和温度，并开场计时20 20 minmin后停顿加热。后停顿加热。5 5待压力降至接近待压力降至接近0 0时，渐渐翻开时，渐渐翻开放汽阀放汽阀( (排

13、汽口排汽口) )，开盖，立刻取出灭，开盖，立刻取出灭菌物品。菌物品。2021-12-145 5，斜面和平板的制造，斜面和平板的制造 将巳灭菌装有琼脂培育基将巳灭菌装有琼脂培育基的试管，趁热置于木棒上的试管，趁热置于木棒上，使成适当斜度，凝固后，使成适当斜度，凝固后即成斜面即成斜面( (图图1-3)1-3)斜面长斜面长度不超越试管长度度不超越试管长度1/21/2为为宜。宜。2021-12-14平板的制造平板的制造 2021-12-146 6，斜面培育基接种，斜面培育基接种 斜面培育基接种法斜面培育基接种法普通不用作分别培普通不用作分别培育，仅使细菌繁衍育，仅使细菌繁衍为菌种传代或察看为菌种传代或

14、察看其某些生化特性之其某些生化特性之用。用。 (1)(1)接种灭菌接种灭菌 (2) (2)开开启棉塞启棉塞 (3) (3)管口灭管口灭菌菌 (4) (4)挑起菌苔挑起菌苔 (5)(5)接种接种 (6) (6)塞好棉塞好棉塞。塞。2021-12-147 7，液液体体培培育育基基接接种种法法2021-12-14三、微量稀释法体外抗菌实验三、微量稀释法体外抗菌实验v延续稀释法试管稀释法通常用于测定微生物延续稀释法试管稀释法通常用于测定微生物的最小抑菌浓度的最小抑菌浓度MICMIC，即将微生物的浓度按，即将微生物的浓度按几何级数或数学级数进展递减稀释，然后将不同几何级数或数学级数进展递减稀释，然后将不

15、同浓度的微生物混入含实验菌的液体培育基或固体浓度的微生物混入含实验菌的液体培育基或固体培育基中，经培育后，能抑制实验菌生长的最低培育基中，经培育后，能抑制实验菌生长的最低浓度，即为该微生物的最小抑菌浓度。浓度，即为该微生物的最小抑菌浓度。v微量稀释法微量稀释法 此种方法常用于测定细菌对药物敏此种方法常用于测定细菌对药物敏感性或新药对细菌的抗菌活性实验。普通运用感性或新药对细菌的抗菌活性实验。普通运用9696孔微量稀释板，孔底呈孔微量稀释板，孔底呈U U型，每孔容量为型，每孔容量为0.20-0.20-0.30ml0.30ml。本法操作较便，用培育基量少，可作大。本法操作较便，用培育基量少，可作大

16、批量药敏实验。批量药敏实验。2021-12-14( (一实验过程一实验过程1 1实验菌的预备。实验菌的预备。选取大肠杆菌选取大肠杆菌(Escherichia (Escherichia coli)coli)、金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌(Staphylicoccus aureus)(Staphylicoccus aureus)、白色葡萄球菌白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)(Staphylococcus albus)、蜡状芽孢杆菌菌种在营养琼蜡状芽孢杆菌菌种在营养琼脂斜面培育基上传代培育一脂斜面培育基上传代培育一次后，再将其接种至营养肉次后，再将其接种至营养肉汤培育基中汤

17、培育基中3737培育培育6-12 h6-12 h，冰箱备用。，冰箱备用。2 2抗菌化合物的初步挑抗菌化合物的初步挑选，按下表取选，按下表取9696孔培育板孔培育板一块，进展编号，将一块，进展编号，将4444种种化合物由有机化学研讨化合物由有机化学研讨所其他教师和研讨生提供所其他教师和研讨生提供用用DMSODMSO或蒸馏水配制成或蒸馏水配制成5050mol/mlmol/ml，也可用无，也可用无菌过滤器过滤后放置在菌过滤器过滤后放置在灭菌的小离心管中。灭菌的小离心管中。2021-12-14挑选实验过程挑选实验过程3 3在超净任务台内，酒精灯下在超净任务台内，酒精灯下，将液体培育的细菌菌种用培育液，

18、将液体培育的细菌菌种用培育液进展稀释，稀释度为进展稀释，稀释度为1 1：10001000或或1:5001:500。用无菌的移液器吸咀经。用无菌的移液器吸咀经过灭菌处置将稀释的液体菌种过灭菌处置将稀释的液体菌种198198l l参与到除了参与到除了A1,B1A1,B1以外的孔以外的孔内，内，2 2l l各种化合物溶液各种化合物溶液DMSODMSO配配置，置，A1,B1,C1,D1A1,B1,C1,D1加加200 200 l l培育培育液，震荡混合后液，震荡混合后3737培育培育12h-18h, 12h-18h, 用酶标仪用酶标仪630nm630nm侧吸光度。侧吸光度。DMSODMSO的的最终浓度

19、坚持在最终浓度坚持在1%1%。每个样品设两。每个样品设两个平行孔。个平行孔。2021-12-1496孔细胞培育板加样安排孔细胞培育板加样安排1 12 23 34 45 56 67 78 89 9101011111212A A培育液培育液200200l l样品样品1 12 23 34 45 56 67 78 89 910101111B B培育液培育液200200l l样品样品1 12 23 34 45 56 67 78 89 910101111C C培育液培育液200200l l样品样品12121313141415151616171718181919202021212222D D培育液培育液20

20、0200l l样品样品12121313141415151616171718181919202021212222E E菌对照菌对照(2(2l DMSO)l DMSO) 样品样品23232424252526262727282829293030313132323333F F菌对照菌对照(2(2l DMSO)l DMSO) 样品样品23232424252526262727282829293030313132323333G G菌对照菌对照(2(2l DMSO)l DMSO) 样品样品34343535363637373838393940404141424243434444H H菌对照菌对照(2(2l DM

21、SO)l DMSO) 样品样品34343535363637373838393940404141424243434444样品浓度样品浓度0.02mmol/ml 0.02mmol/ml 样品分子量样品分子量/100.mg /100.mg 用用DMSODMSO配成配成0.5ml0.5ml即可，每即可，每次实验用次实验用2 2l l，9696孔板的孔体积孔板的孔体积200200l l，样品的最终浓度为，样品的最终浓度为200200mol/Lmol/L，大于该浓度那么无价值。大于该浓度那么无价值。2021-12-14实验用样品实验用样品v环丙沙星 v2,4,3-三羟基二苯甲酮 v2,4,4-三羟基二苯甲

22、酮 v2,4,2-三羟基二苯甲酮 v2,3,4,2-四羟基二苯甲酮 v2,3,4,3-四羟基二苯甲酮 v2,3,4,4-四羟基二苯甲酮 v2,4,2,4-四羟基二苯甲酮 v2,3,4,2,4-五羟基二苯甲酮 v丹皮酚 v丹皮酚-镍II配合物 v丹皮酚-氧钒V配合物 v丹皮酚-铜II配合物 v丹皮酚-钴II配合物 v丹皮酚-锰II配合物 v丹皮酚-锌II配合物 v苯甲基-N-苯基亚胺 v3-羟基苯甲基-N-苯基亚胺 v4-羟基苯甲基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺 v2-羟基苯甲基-N-3,5-二苯基亚胺 v3,4-二羟基苯甲基-N-苯基亚胺 v4-羟基苯甲基-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺 23.

23、 4-羟基-3-甲氧基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺24. 苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺 3,4-二羟基苯甲基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺4-羟基苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺3,5-二羟基苯甲基-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺2,5-二羟基苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺 2,4-二羟基苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺 2,4-二羟基苯甲基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺4-羟基苯甲基-N-3-羟基苯基亚胺3,5-二羟基苯甲基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺 4-羟基-3-甲氧基-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺 4-羟基苯甲基-N-4-甲基苯基亚胺 4-羟基-3-甲氧基苯甲基-N-4-甲基苯基亚胺 3,5-

24、二羟基苯甲基-N-4-甲基苯基亚胺 2,4-二羟基苯甲基-N-4-甲基苯基亚胺 4-磺酸基-3,4-二羟基偶氮苯4-磺酸基-2,4-二羟基偶氮苯4-硝基-3,4-二羟基偶氮苯4-硝基-2,4-二羟基偶氮苯4-硝基-2,5-二羟基偶氮苯4-溴-3,4-二羟基偶氮苯 对羟基苯甲酸甲酯 2021-12-14挑选数据分析挑选数据分析 测试的样品中，测试的样品中，1 1号样为号样为市场上临床运用的环丙沙市场上临床运用的环丙沙星，浓度为星，浓度为0.005mmol/L0.005mmol/L。 其 他 样 品 浓 度 为。 其 他 样 品 浓 度 为0.02mmol/L0.02mmol/L。 实验中，以培育

25、基为空实验中，以培育基为空白白0%0%，以带菌培育液为对，以带菌培育液为对照照100%100%。假设酶标仪假设酶标仪630nm630nm测试的结果中，测试的结果中，空白为空白为-0.2-0.2，空内液体呈透明清，空内液体呈透明清澈，对照孔的值为澈，对照孔的值为+0.1-0.2+0.1-0.2。假设测试样品的值也同样到达假设测试样品的值也同样到达- -0.20.2，阐明样品在，阐明样品在200200mol/Lmol/L具有具有较好的抗菌活性。较好的抗菌活性。假设测试样品的值在对照孔和空假设测试样品的值在对照孔和空白之间，阐明样品在高浓度有抗白之间，阐明样品在高浓度有抗菌作用，请选取菌作用，请选取

26、1111个抗菌效果较个抗菌效果较好的样品做下面的最小抑菌浓度好的样品做下面的最小抑菌浓度实验。实验。2021-12-14挑选数据分析挑选数据分析 测试的样品中，测试的样品中，1 1号样为号样为市场上临床运用的环丙沙市场上临床运用的环丙沙星，浓度为星，浓度为0.005mmol/L0.005mmol/L。 其 他 样 品 浓 度 为。 其 他 样 品 浓 度 为0.02mmol/L0.02mmol/L。 实验中，以培育基为空实验中，以培育基为空白白0%0%，以带菌培育液为对，以带菌培育液为对照照100%100%。假设酶标仪假设酶标仪630nm630nm测试的结果中，测试的结果中，空白为空白为-0.

27、2-0.2，空内液体呈透明清，空内液体呈透明清澈，对照孔的值为澈，对照孔的值为+0.1-0.2+0.1-0.2。假设测试样品的值也同样到达假设测试样品的值也同样到达- -0.20.2，阐明样品在，阐明样品在200200mol/Lmol/L具有具有较好的抗菌活性。较好的抗菌活性。假设测试样品的值在对照孔和空假设测试样品的值在对照孔和空白之间，阐明样品在高浓度有抗白之间，阐明样品在高浓度有抗菌作用，请选取菌作用，请选取1111个抗菌效果较个抗菌效果较好的样品做下面的最小抑菌浓度好的样品做下面的最小抑菌浓度实验。实验。2021-12-144 4最小抑菌浓度或最小抑菌浓度或EC50EC50的测试的测试

28、 v操作步骤与试管稀释法类似，普通常用操作步骤与试管稀释法类似，普通常用MHMH培育基，培育基，根据上面挑选实验选取出来的样品，在微孔板孔根据上面挑选实验选取出来的样品，在微孔板孔内用微量移液器直接在微孔板孔内作二倍稀释，内用微量移液器直接在微孔板孔内作二倍稀释，然后接种稀释菌液，其中留一列孔作为药液对照，然后接种稀释菌液，其中留一列孔作为药液对照，另一孔仅加培育基和菌液作为菌对照，实验终了另一孔仅加培育基和菌液作为菌对照，实验终了后，用微量搅拌器震荡混匀后，置后，用微量搅拌器震荡混匀后，置3737温孵温孵12-12-18h18h，用酶标仪，用酶标仪630nm630nm侧吸光度。侧吸光度。20

29、21-12-14样品稀释后的浓度表样品稀释后的浓度表A 培育液培育液200l样品样品1，200M234567891011B 培育液培育液200l样品样品1，100 MC 培育液培育液200l样品样品1，50 MD 培育液培育液200l样品样品1，25 ME 菌对照菌对照(2l DMSO) 样品样品1，12.5 MF 菌对照菌对照(2l DMSO) 样品样品1，6.25 MG 菌对照菌对照(2l DMSO) 样品样品1，3.13 MH 菌对照菌对照(2l DMSO) 样品样品1，1.56 M2021-12-14二数据处置与分析二数据处置与分析抗菌药物的最小抗菌浓度测抗菌药物的最小抗菌浓度测试结果

30、能够出现两种方式：试结果能够出现两种方式：1 1，在某一个稀释的样品浓，在某一个稀释的样品浓度，结果表现出细菌没有生度，结果表现出细菌没有生长，菌液较清可与空白培长，菌液较清可与空白培育基比，而下一个稀释的育基比，而下一个稀释的样品浓度，菌液中细菌生长样品浓度，菌液中细菌生长比较旺盛可与含菌对照比比较旺盛可与含菌对照比，那么，这个稀释的样品，那么，这个稀释的样品浓度就为该样品抗菌的最小浓度就为该样品抗菌的最小浓度。这种化合物的抗菌作浓度。这种化合物的抗菌作用可以称为杀菌作用。用可以称为杀菌作用。如右表中红色值中的样品浓如右表中红色值中的样品浓度就是最小抗菌浓度。度就是最小抗菌浓度。培育液值培育

31、液值-0.2021-0.2021样品样品1 1值值-0.2094-0.2094样品样品2 2值值-0.2066-0.2066培育液值培育液值-0.2027-0.2027样品样品1 1值值-0.2102-0.2102样品样品2 2值值-0.2103-0.2103培育液值培育液值-0.2005-0.2005样品样品1 1值值-0.2068-0.2068样品样品2 2值值-0.2112-0.2112培育液值培育液值-0.2106-0.2106样品样品1 1值值-0.2054-0.2054样品样品2 2值值-0.2022-0.2022菌对照值菌对照值 0.2182 0.2182样品样品1 1值值-0.

32、2028-0.2028样品样品2 2值值 0.2087 0.2087菌对照值菌对照值 0.2068 0.2068样品样品1 1值值-0.2021-0.2021样品样品2 2值值 0.2112 0.2112菌对照值菌对照值 0.2146 0.2146样品样品1 1值值 0.2023 0.2023样品样品2 2值值 0.2088 0.2088菌对照值菌对照值 0.2033 0.2033样品样品1 1值值 0.2036 0.2036样品样品2 2值值 0.2033 0.20332021-12-142 2，实验中，不同稀释的样，实验中，不同稀释的样品浓度的测试结果没有上面品浓度的测试结果没有上面的景象

33、，而是出现规律性的的景象，而是出现规律性的上升。即，这种样品测出的上升。即，这种样品测出的数据是随着样品浓度的下降数据是随着样品浓度的下降而上升，可以根据其数据画而上升，可以根据其数据画出一条细菌的生长曲线，假出一条细菌的生长曲线，假设对照样的值定为设对照样的值定为100%100%，可，可以从曲线上求出抑制以从曲线上求出抑制50%50%时时样品的浓度，所以，我们称样品的浓度，所以，我们称这种这种 抗菌为抑菌作用，阐抗菌为抑菌作用，阐明该化合物不能杀死细菌，明该化合物不能杀死细菌，但可以抑制其生长。但可以抑制其生长。培育液值培育液值-0.2021-0.2021样品样品1 1值值-0.2194-0

34、.2194样品样品2 2值值-0.2166-0.2166培育液值培育液值-0.2027-0.2027样品样品1 1值值-0.2082-0.2082样品样品2 2值值-0.1893-0.1893培育液值培育液值-0.2005-0.2005样品样品1 1值值-0.1694-0.1694样品样品2 2值值-0.1002-0.1002培育液值培育液值-0.2106-0.2106样品样品1 1值值-0.1268-0.1268样品样品2 2值值 0.0022 0.0022菌对照值菌对照值 0.2182 0.2182样品样品1 1值值-0.0428-0.0428样品样品2 2值值 0.0587 0.0587

35、菌对照值菌对照值 0.2068 0.2068样品样品1 1值值-0.0023-0.0023样品样品2 2值值 0.1612 0.1612菌对照值菌对照值 0.2146 0.2146样品样品1 1值值 0.6804 0.6804样品样品2 2值值 0.2088 0.2088菌对照值菌对照值 0.2033 0.2033样品样品1 1值值 0.9 0.9样品样品2 2值值 0.2133 0.21332021-12-14四、琼脂分散法四、琼脂分散法v 此种方法包括纸片法，杯碟法挖洞法等，它们的共同此种方法包括纸片法，杯碟法挖洞法等，它们的共同点均在平皿琼脂内参与适量测试细菌，按上述方法放置点均在平皿琼

36、脂内参与适量测试细菌，按上述方法放置适量药液在菌层上，药物在琼脂周围分散，经孵育后，适量药液在菌层上，药物在琼脂周围分散，经孵育后，细菌生长受抑制，出现抑菌圈，测定抑菌圈直径，能了细菌生长受抑制，出现抑菌圈，测定抑菌圈直径，能了解细菌对药物的敏感程度。解细菌对药物的敏感程度。 v 琼脂分散法可定性或初步判别该化合物的抗菌才干，普琼脂分散法可定性或初步判别该化合物的抗菌才干，普通是将化合物稀释后，加如含实验菌的混菌平板中，由通是将化合物稀释后，加如含实验菌的混菌平板中，由于化合物在琼脂培育基中的分散作用，使化合物周围的于化合物在琼脂培育基中的分散作用，使化合物周围的实验菌不能生长，从而产生抑菌圈或抑菌带。根据抑菌实验菌不能生长，从而产生抑菌圈或抑菌带。根据抑菌圈或抑菌带的大小来评价化合物抗菌作用的强弱。圈或抑菌带的大小来评价化合物抗菌作用的强弱。2021-12-14图图: :规范曲线法规范曲线法 图图 ：链霉素规范曲线：链霉素规范曲线 双碟、钢管与抑菌圈位置图双碟、钢管与抑菌圈位置图S S：规范品：规范品T T：供试品：供试品 抑菌圈直径抑菌圈直径(mm)(mm)2021-12-14一滤纸片法实验过程一滤纸片法实验过程 1 1实验菌的预备。在营养培育实验菌的预备。在营养培育基接种金黄色葡萄球菌