内皮抑素在肺癌患者外周血清及支气管肺泡灌洗液中的表达研究

1、内皮抑素在肺癌患者外周血清及支气管肺泡灌洗液中的表达研究 作者：左志通,凌春华,刘皓,季成，王旭,潘顺全,张素娟 【摘要】 目的 探讨内皮抑素(Endostatin)在肺癌患者外周血清及支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的表达以及与肺癌临床病理生理特征的关系。方法 采用酶联免疫吸附法(Enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)检测初诊肺癌47例及肺良性病变18例患者外周血清及BALF中Endostatin的表达水平。结果 肺癌患者外周血清及BALF中Endostatin分别为（131.71±5

2、0.32) ng/ml和(502.56±302.00) ng/ml,显著高于肺良性病变者（P0.01）；肺癌晚期、有淋巴结及远处转移、肺腺癌患者外周血清及BALF中Endostatin高表达；肺癌患者Endostatin在外周血清及灌洗液中的表达呈线性正相关(P0.000)。结论 检测外周血清及支气管肺泡灌洗液中Endostatin均有助于肺癌的诊断及较好提示其生物学行为。 【关键词】 肺肿瘤;内皮抑素;血清;支气管肺泡灌洗液;酶联免疫吸附法1 / 15Expression of Endostatin in Serum and in Bronchoalveolar Lavage Fl

3、uid in Patients with Lung CancerAbstract：Objective To evaluate the expression of endostatin in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and serum in patients with lung cancer. And to analysis the relationship between the levels of it and clinical features as well as pathophysiological characteristics.Met

4、hods The samples of serum and BALF were obtained from 47 patients with untreated primary lung cancer and 18 patients with benign pulmonary diseases. The levels of endostatin were analyzed by enzymelinked immunosorbent assay(ELISA).Results The expression of endostatin in serum was （131.71±50.32)

5、 ng/ml and in BALF was （502.56±302.00) ng/ml in patients with lung cancer.And the expression of endostatin in patients with benign pulmonary diseases was (85.86±36.86) ng/ml and (279.49±135.17) ng/ml,respectively (P<0.01),there was significantly difference between them.The leve

6、ls of endostatin in serum and BALF in advanced stage lung cancer patients were higher than those of early stage patients. In adenocarcinoma patients was significantly higher than that in patients with squamous cell carcinoma and SCLC in serum and BALF. Endostatin concentrations in BALF and in serum

7、were significantly higher in patients with lymph node and distant metastasis than those patients with no metastasis. The expression of endostatin in serum was closely related to that in BALF in patients with lung cancer (P0.000).Conclusion The detection of endostatin in serum and in BALF may be help

8、ful to distinguish the lung cancer from benign pulmonary diseases and to reveal the biological behaviors of lung cancer well.Key words：Lung neoplasms; Endostatin; Serum; Bronchoalveolar lavage fluid; Enzymelinked immunosorbent assay0 引言 肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一。肿瘤血管形成过程是血管形成促进因子和抑制因子相互作用、共同调节的结果。研究表明：血管内皮

9、生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是作用最强、特异性最高的血管生成促进因子 1；内皮抑素(Endostatin)则被认为是迄今为止最有效的内源性血管生长抑制因子 2。本文就Endostatin在肺癌患者支气管肺泡灌洗液及血清中的表达作一研究。1 对象与方法1.1 研究对象2003年10月2004年9月期间住院的肺癌患者47例，男33例，女14例。年龄3287岁，平均60.65岁，中位年龄62岁。全部病例均经病理学证实，其中鳞癌19例，腺癌15例，小细胞癌13例；有淋巴结转移者34例，无淋巴结转移者13例；有远处转移者11例，无远处转移者3

10、6例；期8例，期12例，期16例，期11例。肺癌受试者均为未经放化疗及手术等治疗的初诊者。对照组为同期住院的肺良性病变患者18例，男11例，女7例。年龄2884岁，平均57.6岁，中位年龄58.5岁。其中支气管扩张症7例，支气管异物3例，肺间质纤维化3例，肺炎性假瘤2例，肺结核3例。1.2 标本的采集与处理结合胸片、CT等确定灌洗部位。常规气管镜检查，进镜后在病变处段支气管开口处经活检孔快速注入灭菌生理盐水（常温）20ml，通过回吸收装置回收灌洗液，通常回收5ml即可，必要时增加灌洗量。对气管镜未见病变者，则于右肺中叶或左上叶肺段进行灌洗。灌洗液回收后常规经支气管镜行活检和（或）刷检，以便病理

11、证实，部分病例通过日后手术病理证实。外周血清标本在气管镜检查结束后立即留取。灌洗液回收后用双层纱布滤去黏液，灌洗液及血清标本高速离心（3 000r/min）10min，上清液各分二份。一份送检钾离子，另一份-80冷冻待检Endostatin。1.3 标本检测采用奥地利SLT 型酶标仪ELISA法集中检测Endostatin。Human Endostatin试剂盒购自美国R&D Systems公司。具体操作严格按说明书进行。由于灌洗液灌洗及回收量不同，参照文献 3对之进行标准化，以Endostatin表达的相对量作为每位患者灌洗液中的表达指标。具体公式为：Endostatin标准

12、值Endostatin实测值×血清钾浓度/灌洗液钾浓度。1.4 统计学处理测定结果以±s表示，两组比较行组内及组间t检验，多组比较行单因素方差分析，方差不齐或非正态分布采用秩和检验，同时，血清与灌洗液等的相关关系予直线回归分析及相关t检验。均采用SPSS10.0统计软件进行处理。2 结果2.1 肺癌与肺良性病变患者灌洗液及外周血清Endostatin表达的比较 肺癌与肺良性病变者灌洗液Endostatin表达均明显高于血清；肺癌患者灌洗液及血清Endostatin表达明显高于肺良性病变者，差异均具有显著性，见表1。表1 肺癌与肺良性病变者灌洗液及外周血清Endostatin

13、表达的比较(略)注：与支气管肺泡灌洗比较, t-5.662，P0.000； t-8.256，P0.0002.2 外周血清及灌洗液中Endostatin水平与肺癌患者临床特征的关系 肺癌患者灌洗液及血清Endostatin表达与患者性别、年龄、受累肺、肺叶等均无明显相关性。而吸烟指数300者血清Endostatin表达明显高于300者，见表2。表2 外周血清及灌洗液中Endostatin水平与肺癌患者临床特征的关系（略）2.3 外周血清及灌洗液中Endostatin水平与肺癌患者病理组织学特征的关系 有淋巴结及远处转移者灌洗液及血清中Endostatin浓度明显高于无转移者；晚期肺癌灌洗液及血清

14、中Endostatin表达高于早期患者；经两两比较，腺癌患者灌洗液及血清Endostatin表达均高于小细胞肺癌（P分别为0.044和0.038）和鳞癌，而小细胞肺癌与鳞癌比较差异均无显著性，见表3。表3 外周血清及灌洗液中Endostatin水平与肺癌患者病理组织学特征的关系（略）2.4 肺癌患者外周血清及灌洗液中Endostatin表达的相关关系 回归方程为85.9270.0911x，r0.547。对回归系数行t检验，t4.380，P0.000，说明肺血清及灌洗液中表达的散点图癌患者外周血清及灌洗液中Endostatin的表达成直线正相关关系，见图1。3 讨论 Endostatin是O&#

15、39;Reilly等 21997年从小鼠血管内皮瘤细胞(Murine hemangioendothelioma cell line,EOMA)的培养上清中分离的一种新的血管内皮细胞生长抑制因子。并被证实是胶原经蛋白酶降解的端部分片段，分子量20KD，含184个氨基酸,其中酸性氨基酸16个，碱性氨基酸29个，由11个精氨酸组成的碱性区可能与其和肝素有高度的亲和力有关。 Endostatin抑制内皮细胞生长的作用非常明显。现有研究表明，Endostatin抑制肿瘤血管形成的可能机制有：Endostatin可阻碍增生内皮细胞与基质蛋白的相互作用，从而诱导内皮细胞凋亡。同时还可减少bcl2、bclXL

16、抗凋亡蛋白的量 4；Endostatin可直接与血管内皮细胞受体结合，引起内皮细胞G1期停滞，从而抑制内皮细胞增殖 5；与VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等血管生成刺激因子竞争性结合生长因子信号传导系统中的硫酸肝素蛋白聚糖受体，从而抑制血管生成；与金属蛋白酶2 (MMP2)的催化活性基团区域结合而抑制其活性 6。文献报道 7肺癌患者血清Endostatin水平明显升高，并与肿瘤的侵袭性及预后有关。动物实验 8证实Endostatin能明显阻止NSCLC的生长。由于它特异性地抑制肿瘤血管内皮细胞增殖和新血管生成，使肿瘤无法获得充足的营养而进入休眠状态。目前，国内外尚无Endostat

17、in在灌洗液中表达研究的报道。 本研究结果显示肺癌患者血清、灌洗液的Endostatin表达明显高于肺良性病变者；肺癌与肺良性病变者灌洗液Endostatin表达均明显高于血清，显示通过灌洗液来反映的Endostatin气道表达较血液表达更敏感。我们认为灌洗液直接来源于气道，而血清等的Endostatin为间接来源，因此检测灌洗液中的Endostatin表达较其在血液中更优越。Endostatin在外周血清及灌洗液中的表达呈明显的线性正相关，说明了在肺癌患者灌洗液及外周血清中表达的一致性。外周血清及支气管肺泡灌洗液中Endostatin的表达与肺癌患者的性别、年龄、受累肺及肺叶等无关，但与肺癌

18、病期、病理类型、淋巴结及远处转移等有关，表明灌洗液、血清中Endostatin表达在肺癌的诊断、病理类型的推断、病情进展的判断等方面具有重要意义。【参考文献】 1Stefanou D, Goussia AC, Arkoumani E, et al. Expression of vascular endothelial growth factor and the adhesion molecule Ecadherin in nonsmall cell lung cancer J.Anticancer Research, 2003,23(6C):47154720.2O'Reilly MS,

19、 Boehm T,Shing Y,et al.Endostatin: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth J.Cell,1997,88(2):277285.3刘丽华,张安成,宋卫东,等.应用钾离子作为支气管肺泡灌洗液标准化参照物的多项指标检测肺癌诊断价值的探讨 J.中华结核和呼吸杂志,1991,14(4):246247.4Dhanabal M,Ramchandran R,Waterman MJ,et al.Endostatin induces endothelial cell apoptosis J. Journal of Biological Chemistry,1999,274(17):1172111726.5Dhana