实验二环境中的微生物

1、 因为微生物是肉眼看不见的，所以大家常常因为微生物是肉眼看不见的，所以大家常常忽略一些经常接触的微生物。比如：室内外的空忽略一些经常接触的微生物。比如：室内外的空气、水、土壤；试验台面、椅子以及皮肤、头发、气、水、土壤；试验台面、椅子以及皮肤、头发、口腔等等。口腔等等。 这些菌群大多属于正常菌群，与人们朝夕相处，这些菌群大多属于正常菌群，与人们朝夕相处，但有些时候也能引起传染但有些时候也能引起传染（条件致病菌）（条件致病菌），因此，因此大家在以后的学习与实验中一定要特别注意操作大家在以后的学习与实验中一定要特别注意操作步骤。步骤。1. 证明实验室环境和人体表面存在微生物；证明实验室环境和人体表

2、面存在微生物；2. 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；量与类型；3. 观察不同类群微生物的菌落形态特征；观察不同类群微生物的菌落形态特征；4. 体会无菌操作的重要性。体会无菌操作的重要性。 每一种每一种菌落都有它自己菌落都有它自己的特征的特征（如大小、形状、（如大小、形状、边缘、表面、质地、颜边缘、表面、质地、颜色等）色等） ，是衡量菌种纯，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的度、辨认和鉴定菌种的重要依据。可通过平板重要依据。可通过平板培养来检查环境中细菌培养来检查环境中细菌的数量和类型。的数量和类型。 菌落的形态结构、大小、色泽、透明度、菌落的形态

3、结构、大小、色泽、透明度、黏稠度、色素及边缘情况等，因各种细菌黏稠度、色素及边缘情况等，因各种细菌而异。每一种细菌保持有一定的菌落特征，而异。每一种细菌保持有一定的菌落特征，这些菌落特征的区别点都可作为鉴别细菌这些菌落特征的区别点都可作为鉴别细菌的依据之一。的依据之一。 菌落特征菌落特征为有为有呈圆形、凸起、边缘整齐、呈圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有卵黄中心、直径表面光滑、湿润、有卵黄中心、直径23mm、不透明菌落、周围为一混浊带，外、不透明菌落、周围为一混浊带，外层有一透明带。层有一透明带。 细菌、酵母菌细菌、酵母菌不形成菌丝，其菌落仅生长不形成菌丝，其菌落仅生长在固体培养基表面，

4、可用接种工具将其在固体培养基表面，可用接种工具将其全全部挑起，部挑起，即与培养基结合不紧密；即与培养基结合不紧密； 而而放线菌、霉菌放线菌、霉菌的菌体大多分化为的菌体大多分化为营养菌营养菌丝丝与与繁殖菌丝繁殖菌丝，其营养菌丝深入培养基中，其营养菌丝深入培养基中吸取营养，故具有与培养基结合较紧，吸取营养，故具有与培养基结合较紧，不不易挑起易挑起等特征。等特征。 1. 牛肉膏蛋白胨琼脂平板（牛肉膏蛋白胨琼脂平板（2个个/人）、肥人）、肥皂、标签纸、记号笔。皂、标签纸、记号笔。 2. 仪器仪器 培养箱、酒精灯（培养箱、酒精灯（1个个/组）、灭菌棉签、组）、灭菌棉签、接种环等。接种环等。 1.空气中细

5、菌的检查空气中细菌的检查（老师准备）（老师准备） 2.实验台上细菌的检查实验台上细菌的检查 3.手指上细菌的检查手指上细菌的检查 4.头发上细菌的检查头发上细菌的检查 5.口腔中细菌的检查口腔中细菌的检查（二）（二） 细菌的检查细菌的检查 将平板放在实验室台面上，移去将平板放在实验室台面上，移去皿盖，使培养基表面暴露于空气皿盖，使培养基表面暴露于空气中，中，0.5h后盖上皿盖，后盖上皿盖，倒置于倒置于28培养箱培养。培养箱培养。 在酒精灯附近操作，划线的角度要小，移动在酒精灯附近操作，划线的角度要小，移动的压力不能太大。的压力不能太大。 在培养皿底画线，将其在培养皿底画线，将其一分为二一分为二

6、，并贴上相应，并贴上相应的标签；的标签；取出棉签（动作要迅速）；取出棉签（动作要迅速）；先在无菌平板的一个区域内试划几下；先在无菌平板的一个区域内试划几下；然后用然后用同一根棉签同一根棉签在实验台面擦拭在实验台面擦拭2cm2的范围；的范围；在培养皿的另一区域同样划线。在培养皿的另一区域同样划线。用记号笔在平板底部画线，将其用记号笔在平板底部画线，将其平均分成平均分成两部分两部分，标明标明洗手前洗手前与与洗手后洗手后及及姓名、日姓名、日期期；移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板表移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板表面轻轻地来回划线，盖上皿盖。面轻轻地来回划线，盖上皿盖。用肥皂将手清洗干净，用肥皂将

7、手清洗干净，自然干燥后自然干燥后，在平，在平板的另外一部分同样划线。板的另外一部分同样划线。 在揭开皿盖的在揭开皿盖的平板上方平板上方，用手将，用手将头头发拨动数次发拨动数次，使细菌降落到平板表，使细菌降落到平板表面，然后盖上皿盖。面，然后盖上皿盖。 将揭开皿盖的平板放在将揭开皿盖的平板放在离口约离口约68cm处，对着琼脂表面处，对着琼脂表面用力用力咳嗽咳嗽，然后盖上皿盖。，然后盖上皿盖。（三）（三） 细菌的培养细菌的培养 将所有的琼脂平板翻转，使将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上皿底朝上，放入，放入28培养箱培养箱培养培养12d。（四）（四） 结果记录结果记录（五）（五） 实验结果记录实验结果

8、记录 将结果如实记录，并清洗各自的平板。将结果如实记录，并清洗各自的平板。 描述菌落特征时须选择稀疏、孤立的描述菌落特征时须选择稀疏、孤立的菌落，其项目包括菌落，其项目包括大小、形状、边缘情况、大小、形状、边缘情况、隆起形状、表面状态、质地、颜色和透明隆起形状、表面状态、质地、颜色和透明度度等。等。 多数多数细菌菌落细菌菌落圆形，小而薄，表面光圆形，小而薄，表面光滑、湿润、较粘稠，半透明，颜色多样，滑、湿润、较粘稠，半透明，颜色多样，色泽一致，质地均匀，易挑取，常有臭味。色泽一致，质地均匀，易挑取，常有臭味。这些特征可与其他微生物菌落相区别。这些特征可与其他微生物菌落相区别。不同细菌的菌落也具

9、有自己的特有特征：不同细菌的菌落也具有自己的特有特征： 对于产鞭毛、荚膜和芽孢的种类尤为明显。例如，对无鞭毛、不对于产鞭毛、荚膜和芽孢的种类尤为明显。例如，对无鞭毛、不能运动的细菌尤其是各种球菌来说，随着菌落中个体数目的剧增，能运动的细菌尤其是各种球菌来说，随着菌落中个体数目的剧增，只能依靠只能依靠“硬挤硬挤”的方式来扩大菌落的体积和面积，因而就形成的方式来扩大菌落的体积和面积，因而就形成了较小、较厚及边缘极其圆整的菌落。了较小、较厚及边缘极其圆整的菌落。 对长有鞭毛的细菌来说，其菌落就有大而扁平、形态不规则和边对长有鞭毛的细菌来说，其菌落就有大而扁平、形态不规则和边缘多缺刻的特征，运动能力强

10、的细菌还会出现树根状甚至能移动缘多缺刻的特征，运动能力强的细菌还会出现树根状甚至能移动的菌落。的菌落。 有荚膜的细菌，其菌落往往十分光滑，并呈透明的蛋清状，形状有荚膜的细菌，其菌落往往十分光滑，并呈透明的蛋清状，形状较大。较大。 凡产芽孢的细菌，因其芽孢引起的折光率变化而使菌落的外形变凡产芽孢的细菌，因其芽孢引起的折光率变化而使菌落的外形变得很不透明或有得很不透明或有“干燥干燥”之感，并因其细胞分裂后常成链状而引之感，并因其细胞分裂后常成链状而引起菌落表面粗糙、有褶皱感，再加上它们一般都有周生鞭毛，因起菌落表面粗糙、有褶皱感，再加上它们一般都有周生鞭毛，因此产生了既粗糙、多褶、不透明，又有外形

11、及边缘不规则特征的此产生了既粗糙、多褶、不透明，又有外形及边缘不规则特征的独特菌落。独特菌落。 同一种细菌在不同条件下形成的菌落特征会有差别，但在相同的同一种细菌在不同条件下形成的菌落特征会有差别，但在相同的培养条件下形成的菌落特征是一致的。所以，菌落的形态特征对培养条件下形成的菌落特征是一致的。所以，菌落的形态特征对菌种的分类鉴定有重要的意义。菌种的分类鉴定有重要的意义。 菌落还常用于微生物的分离、纯化、鉴定、计数及选种与育种等菌落还常用于微生物的分离、纯化、鉴定、计数及选种与育种等工作。工作。 不同种类的细菌其菌落形态互不相同，表现在不同种类的细菌其菌落形态互不相同，表现在大小、形状、边缘

12、、隆起、光泽、质地和颜色大小、形状、边缘、隆起、光泽、质地和颜色等方等方面。面。 细菌菌落大小不一，小的不到细菌菌落大小不一，小的不到1毫米，大的可以毫米，大的可以铺满整个培养皿；铺满整个培养皿；菌落菌落形状形状有有圆形、不规则形、卷发状、假根状圆形、不规则形、卷发状、假根状等；等；菌落的菌落的隆起形状隆起形状有有扩展、台状、低凸、乳头状扩展、台状、低凸、乳头状等；等；有的菌落有的菌落有光泽、有的没有有光泽、有的没有；有的菌落；有的菌落较粘较粘，有的，有的则则较脆较脆；菌落一般呈菌落一般呈灰色灰色，少数为，少数为白色、黄色、红色、绿色白色、黄色、红色、绿色和棕色和棕色等。等。 细菌的菌落细菌的

13、菌落细菌细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征等。细菌的菌落特征因种而异。因种而异。 可作为鉴定细菌种的依据。可作为鉴定细菌种的依据。大肠杆菌 由于由于霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大，有的霉菌的霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大，有的霉菌的菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则有一定的局限性，直径有一定的局限性，直径12厘米或更小。菌落质地一般

14、厘米或更小。菌落质地一般比放线菌比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。和边缘与中心的颜色常不一致。 放线菌放线菌的菌落的菌落 放线菌在固体培养基上形成与细菌不放线菌在固体培养基上形成与细菌不同的菌落特征，放线菌菌丝相互交错缠绕同的菌落特征，放线菌菌丝相互交错缠绕形成质地致密的形成质地致密的小菌落，干燥、不透明、小菌落，干燥、不透明、难以挑取难以挑取，当大量孢子覆盖于菌落表面时

15、，当大量孢子覆盖于菌落表面时，就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放线就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放线菌菌落，由于基内菌丝和孢子常有颜色，菌菌落，由于基内菌丝和孢子常有颜色，使得菌落的正反面呈现出不同的色泽。使得菌落的正反面呈现出不同的色泽。放线菌的菌落由菌丝体组成。放线菌的菌落由菌丝体组成。放线菌放线菌菌丝纤细菌丝纤细，生长缓慢，生长缓慢，相互交错，所以形成的相互交错，所以形成的菌落较菌落较小而且质地致密，表面干燥、小而且质地致密，表面干燥、多皱、绒状多皱、绒状。放线菌基内菌丝。放线菌基内菌丝长在培养基内，菌落与培养基长在培养基内，菌落与培养基结合较紧，不易挑起结合较紧，不易挑起 。幼龄。幼

16、龄菌落因气生菌丝尚未分化成孢菌落因气生菌丝尚未分化成孢子丝，所以不易与细菌菌落相子丝，所以不易与细菌菌落相区分。当放线菌形成大量的分区分。当放线菌形成大量的分生孢子而布满菌落表面后，形生孢子而布满菌落表面后，形成表面呈细粉状或颗粒状的典成表面呈细粉状或颗粒状的典型放射状菌落。由于放线菌的型放射状菌落。由于放线菌的菌丝和孢子常产生各种色素，菌丝和孢子常产生各种色素，所以所以菌落正反两面有时会呈现菌落正反两面有时会呈现不同色泽不同色泽。 放线菌放线菌的菌落质地致密，表面呈紧密的绒的菌落质地致密，表面呈紧密的绒状，或坚实、干燥而多皱。由于基内菌丝状，或坚实、干燥而多皱。由于基内菌丝长在培养基内，所以

17、菌落与培养基结合较长在培养基内，所以菌落与培养基结合较紧，不容易被挑起，或者被挑起后不容易紧，不容易被挑起，或者被挑起后不容易破碎。当孢子丝形成大量孢子布满菌落表破碎。当孢子丝形成大量孢子布满菌落表面时，使菌落呈絮状、粉末状或颗粒状，面时，使菌落呈絮状、粉末状或颗粒状，而与细菌菌落判然有别。此外，如用放大而与细菌菌落判然有别。此外，如用放大镜仔细观察，可以看见菌落周围有放射状镜仔细观察，可以看见菌落周围有放射状菌丝。菌丝。 乳白色，圆状凸起乳白色，圆状凸起的，的，闻一下闻一下 有股有股酸味酸味！ 大多数酵母菌的菌落特征大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌与细菌相似，但比细菌菌落落大而厚大而厚，菌落，菌落表面光滑、表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都边