单克隆抗体在临床医学上得应用

1、单克隆抗体在临床医学上得应用动物脾脏有上百万种不同得 B 淋巴细胞系 ,重排后具有不同基因不同得B 淋巴细胞合成不同得抗体。 当机体受抗原刺激时 ,抗原分子上得许多决定簇分别激活各个具有不同基因得B细胞。被激活得B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）与记忆B细胞,大量得浆细胞克隆合成与分泌大量得抗体分子分布到血液、 体液中。 如果能选出一个制造一种专一抗体得浆细胞 进行培养 ,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇得抗体 ,称为单克隆抗体。单克隆抗体得特点就是 :理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合得特异性强、 便于人为处理与质量控制 ,并且

2、来源容易。一、作为亲合层析得配体单克隆抗体能与其相应得抗原特异性结合,因而能够从复杂系统中识别出单个成分。只要得到针对某一成分得单克隆抗体,利用它作为配体 ,固定在层析柱上 ,通过亲合层析 ,即可从复杂得混与物中分离、纯化这一特定成分。如用抗人绒毛膜促性腺激素 （hCG）亲合层析柱，就可从孕妇尿中提取到纯得hCG。与其它提取方法 （沉淀法、高效疏水色谱法等 ）相比 ,具有简便、快速、经济、产品活性高等优点。二、作为免疫抑制剂抗人T淋巴细胞单抗（McAb）作为一种新型免疫抑制剂,已广泛应用于临床治疗自身免疫 疾病与抗器官移植得排斥反应。其作用机理有赖于 McAb 得种类及其免疫学特性。注射抗小鼠

3、 Thy-1 抗原得单抗 ,可以抑制小鼠同种皮肤移植得排斥反应。此外,对用于同种骨髓移植得供体骨髓，在体外经抗T细胞单抗加补体处理，能减轻移植物抗宿主病得发生。三、作为研究工作中得探针单克隆抗体只与抗原分子上某一个表位 （即抗原决定簇 ）相结合 ,利用这一特性就可把它 作为研究工作中得探针。此时 ,可以从分子、细胞与器官得不同水平上 ,研究抗原物质得结构 与功能得关系 ,进而并可从理论上阐明其机理。如用荧光物质标记单抗作为探针,能方便地确定与其结合得相应生物大分子（蛋白质、核酸、酶等 ）在细胞中得位置与分布。四、增强抗原得免疫原性抗体对抗原免疫原性得增强作用由来已久 ,60 年代就已发现幼猪对

4、破伤风类毒素难以产 生抗体，注射相应特异性抗体IgG,就能有效地提高对委内瑞拉马脑炎病毒得免疫应答。1984年以来，Celis等发现，抗乙肝病毒（HBs）IgG可增强HBs抗原对特异性人 T细胞克隆得 刺激增殖 ，并可诱生干扰素。在小鼠中发现 ，当低剂量得 HBs 抗原不产生免疫反应时 ，加入抗 HBs抗体组成得复合物，则可有效地诱生免疫反应。根据这一作用 ，现已研制出乙肝得抗原抗体复合物型治疗性疫苗。五、作为医学检验试剂单克隆抗体作为医学检验试剂，更能充分发挥其优势。单克隆抗体得特异性强，大大提高了抗原抗体反应得特异性 ，减少了与其它物质发生交叉反应得可能性，使试验结果可信度更大。单抗得均一

5、性与生物活性得单一性，使抗原抗体区应结果便于控制，利于标准化与规范化。这就是单抗应用最多得领域 肝病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、 有得灵敏度高、特异性好得特点诊断各类病原体，已有大量诊断试剂商品供选择。如用于诊断乙肝病毒、丙EB 病毒与各种微生物、寄生虫感染得试剂等。单抗所具，使其在鉴别菌种得型及亚型、病毒变异株，以及寄生虫不同生活周期得抗原性等方面更具独特优势。肿瘤特异性抗原与肿瘤相关抗原得检测 用于肿瘤得诊断、分型及定位。尽管目前尚未制备出肿瘤特异性抗原得单抗 ,但对肿瘤 相关抗原 （如甲胎蛋白、肿瘤碱性蛋白与癌胚抗原）得单抗早就用于临床检验。随着淋巴细胞杂交瘤技术得应用 ,许多抗人肿瘤标记

6、物得杂交瘤细胞株已经建立 ,这为肿 瘤得早期诊断及其阐明肿瘤得发生、发展,了解肿瘤细胞得生物学活性及其定量研究奠定了基础。用抗肿瘤单抗检查病理标本,可协助确定转移肿瘤得原发部位。以放射性核素标记单抗可用于体内诊断，再结合X线断层扫描技术，可对肿瘤得大小及其转移灶作出定量诊断。检测淋巴细胞表面标志用于区分细胞亚群与细胞得分化阶段。例如检测CD系列标志，有利于了解细胞得分化与T 细胞亚群得数量与质量变化 ，这对多种疾病诊断具有参考意义。细胞表面抗原得检测，将对白血病患者得疾病分期、 治疗效果、 预后判断等方面有指导作用。 组织相容性抗原检测就是 移植免疫学得重要内容 ，应用单抗对其进行位点检测可得

7、到更可信得结果。机体微量成分得测定应用单抗结合其它技术 ，可对机体得多种微量成分进行测定。如放射免疫分析，即就是利用了同位素得灵敏性与抗原 -抗体反应得特异性而建立起来得方法，它可以测至10-910-12g,使原来难以测定得激素能够进行定量分析。除了激素 ，还可检测诸多酶类、维生素、药物与 其它生化物质。 这对受检者健康状态判断、 疾病检出、 指导诊断与临床治疗均具有实际意义 单克隆抗体在临床医学上得应用单克隆抗体得特点就是 :理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合得特异性强、便于 人为处理与质量控制 ，并且来源容易。1 作为亲合层析得配体单克隆抗体能与其相应得抗原特异性结合 ，因而能够从

8、复杂系统中识别出单个成分。 只要得 到针对某一成分得单克隆抗体 ，利用它作为配体 ，固定在层析柱上 ，通过亲合层析 ，即可从复杂 得混与物中分离、纯化这一特定成分。如用抗人绒毛膜促性腺激素（hCG亲合层析柱，就可从孕妇尿中提取到纯得 hCGo与其它提取方法（沉淀法、高效疏水色谱法等 ）相比，具有简便、快 速、经济、产品活性高等优点。2 作为生物治疗得导向武器脂质体就是由既亲水又亲油得两亲磷脂组成得连续双分子层微囊，内含水相空间 ，可包裹水溶性物质。包有细胞毒剂得脂质体膜上偶联抗体，可定向攻击靶细胞，称为免疫脂质体。这种“导向治疗”，在动物试验与体外试验中已获得满意效果。如热敏免疫脂质体，由抗人

9、乳癌细胞抗体经疏水长链脂肪酸修饰，抗体带上长得疏水碳链 ，部分插入脂质体得脂双层膜中 ，抗体Fab段仍暴露在膜表面，因而保持了抗体活性。热敏免疫脂质体可特异识别靶细胞（人乳癌细胞），并通过相变温度引起脂质体破裂，从而定向释放药物。 另外，可将化疗药物、细菌毒素、植物毒素或放射性同位素等细胞毒剂与抗肿瘤抗原得单克隆抗体直接交联，利用其导向作用 ，使细胞毒剂定位于肿瘤细胞把它直接杀伤。这不仅提高了体得疗效，也可降低细胞毒剂对正常细胞得毒性反应。如应用抗T细胞单抗与柔红霉素结合物 ，在体外对非T淋巴细胞就无杀伤作用。但就是，要把这种方法应用于临床，目前还存在不少技术难关，包括人体对鼠源单抗得排 异问

10、题等。3 作为免疫抑制剂抗人T淋巴细胞单抗（McAb）作为一种新型免疫抑制剂，已广泛应用于临床治疗自身免疫疾病 与抗器官移植得排斥反应。其作用机理有赖于McAb得种类及其免疫学特性。注射抗小鼠Thy-1抗原得单抗，可以抑制小鼠同种皮肤移植得排斥反应。此外,对用于同种骨髓移植得供体骨髓，在体外经抗T细胞单抗加补体处理，能减轻移植物抗宿主病得发生。4作为研究工作中得探针单克隆抗体只与抗原分子上某一个表位(即抗原决定簇 )相结合 ,利用这一特性就可把它作为研究工作中得探针。此时,可以从分子、细胞与器官得不同水平上,研究抗原物质得结构与功能得关系 ,进而并可从理论上阐明其机理。如用荧光物质标记单抗作为

11、探针,能方便地确定与其结合得相应生物大分子(蛋白质、核酸、酶等 )在细胞中得位置与分布。 5 增强抗原得免疫原性抗体对抗原免疫原性得增强作用由来已久 ,60 年代就已发现幼猪对破伤风类毒素难以产生 抗体,注射相应特异性抗体 IgG就能有效地提高对委内瑞拉马脑炎病毒得免疫应答。1984年以来,Celis等发现，抗乙肝病毒(HBs)lgG可增强HBs抗原对特异性人 T细胞克隆得刺激增殖, 并可诱生干扰素。在小鼠中发现，当低剂量得HBs抗原不产生免疫反应时，加入抗HBs抗体组 成得复合物 ,则可有效地诱生免疫反应。根据这一作用,现已研制出乙肝得抗原抗体复合物型治疗性疫苗。6作为医学检验试剂单克隆抗体

12、作为医学检验试剂 ,更能充分发挥其优势。 单克隆抗体得特异性强 ,大大提高了抗 原抗体反应得特异性 ,减少了与其它物质发生交叉反应得可能性,使试验结果可信度更大。单抗得均一性与生物活性得单一性,使抗原抗体区应结果便于控制,利于标准化与规范化。目前已有许多检验试剂盒用单抗制成 ,其主要用途如下 :(1 )诊断各类病原体这就是单抗应用最多得领域 ,已有大量诊断试剂商品供选择。如用于诊断乙肝病毒、丙肝病 毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、 EB 病毒与各种微生物、寄生虫感染得试剂等。单抗所具有得 灵敏度高、特异性好得特点 ,使其在鉴别菌种得型及亚型、病毒变异株,以及寄生虫不同生活周期得抗原性等方面更具独特优

13、势。(2) 肿瘤特异性抗原与肿瘤相关抗原得检测用于肿瘤得诊断、分型及定位。尽管目前尚未制备出肿瘤特异性抗原得单抗,但对肿瘤相关抗原 (如甲胎蛋白、肿瘤碱性蛋白与癌胚抗原)得单抗早就用于临床检验。随着淋巴细胞杂交瘤技术得应用 ,许多抗人肿瘤标记物得杂交瘤细胞株已经建立 ,这为肿瘤 得早期诊断及其阐明肿瘤得发生、发展 ,了解肿瘤细胞得生物学活性及其定量研究奠定了基 础。用抗肿瘤单抗检查病理标本,可协助确定转移肿瘤得原发部位。以放射性核素标记单抗可用于体内诊断，再结合X线断层扫描技术，可对肿瘤得大小及其转移灶作出定量诊断。(3) 检测淋巴细胞表面标志用于区分细胞亚群与细胞得分化阶段。例如检测CD系列

14、标志，有利于了解细胞得分化与 T细胞亚群得数量与质量变化 ，这对多种疾病诊断具有参考意义。细胞表面抗原得检测，将对白血病患者得疾病分期、 治疗效果、 预后判断等方面有指导作用。 组织相容性抗原检测就是移植 免疫学得重要内容 ，应用单抗对其进行位点检测可得到更可信得结果。(4) 机体微量成分得测定应用单抗结合其它技术 ，可对机体得多种微量成分进行测定。如放射免疫分析 ，即就是利用了同位素得灵敏性与抗原 -抗体反应得特异性而建立起来得方法，它可以测至10-910-12g，使原来难以测定得激素能够进行定量分析。除了激素，还可检测诸多酶类、维生素、药物与其它生化物质。这对受检者健康状态判断、疾病检出、

15、指导诊断与临床治疗均具有实际意义 单克隆抗体问世以来 ，由于其独有得特征已迅速应用于医学很多领域。主要表现在以下几个 方面。1. 检验医学诊断试剂作为检验医学实验室得诊断试剂 ，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点 ， 广泛应用于酶联免疫吸附试验、 放射免疫分析、 免疫组化与流式细胞仪等技术。 并且单克隆 抗体得应用 ，很大程度上促进了商品化试剂盒得发展。目前 ，应用单克隆抗体制作得商品化试剂盒广泛应用于 : 病原微生物抗原、抗体得检测； 肿瘤抗原得检测 ; 免疫细胞及其亚群得得检测； 激素测定 ； 细胞因子得测定。单克隆抗体对抗原得识别 ,与多克隆抗体有很大得不同。不同试剂盒因使用

16、得单克隆抗 体不同 ,识别抗原得位点不同 ,导致检测结果有一定差异。因此,标准化问题还需要进一步研究。2. 蛋白质得提纯单克隆抗体就是亲与层析中重要得配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性得固相基质（如Speharose 2B、 4B、 6B 等 ）上,并制备成层析柱。当样品流经层析柱时 ,待分离得抗原可与固相 得单克隆抗体发生特异性结合 ,其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后 ,改变洗脱液得 离子强度或pH,欲分离得抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化得抗原。3. 肿瘤得导向治疗与放射免疫显像技术将针对某一肿瘤抗原得单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接,利用单克隆抗体得导向作用,将药物或放疗

17、物质携带至靶器官,直接杀伤靶细胞 ,称为肿瘤导向治疗。 另外 ,将放射性标记物与单克隆抗体连接 ,注入患者体内可进行放射免疫显像,协助肿瘤得诊断。单克隆抗体在医学中得应用 检验医学诊断试剂 作为检验医学实验室得诊断试剂 ,单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均 一性好等优点 ,广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化与流式细胞仪等技 术。并且单克隆抗体得应用 ,很大程度上促进了商品化试剂盒得发展。目前,应用单克隆抗体制作得商品化试剂盒广泛应用于：病原微生物抗原、抗体得检测；肿瘤抗原得检测；免疫细胞及其亚群得得检测 ； 激素测定 ； 细胞因子得测定。单克隆抗体对抗原得识别 ,与多克隆抗体有

18、很大得不同。不同试剂盒因使用得单克隆抗体不同,识别抗原得位点不同 ,导致检测结果有一定差异。因此,标准化问题还需要进一步研究。2、蛋白质得提纯 单克隆抗体就是亲与层析中重要得配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性得固相基质（如 Speharose 2B、4B、 6B 等）上,并制备成层析柱。当样品流经层析柱时,待分离得抗原可与固相得单克隆抗体发生特异性结合 ,其余成分不能与之结合。 将层析柱充分洗脱后 ,改变洗脱液得离子强度或 pH, 欲分离得抗原与抗体解离 ,收集洗脱液便可得到欲纯化得抗原。3、 肿瘤得导向治疗与放射免疫显像技术 将针对某一肿瘤抗原得单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接,利用单克隆抗

19、体得导向作用 ,将药物或放疗物质携带至靶器官,直接杀伤靶细胞 ,称为肿瘤导向治疗。 另外 ,将放射性标记物与单克隆抗体连接,注入患者体内可进行放射免疫显像,协助肿瘤得诊断。目前单克隆抗体主要为鼠源性抗体 ,异种动物血清可引起人体过敏反应。因此,制备人 -人单克隆抗体或人源化抗体更为重要 ,但此方面仍未取得明显进展。什么就是单克隆抗体 答 由经过特定得抗原处理过得效应 B 细胞与骨髓瘤细胞杂交得到得杂交瘤细胞产生得具有 特异性识别某抗原上得某一个特定抗原决定簇得抗体。 由于就是由单一杂交瘤细胞产生得纯 抗体 ,故称单克隆抗体。基因工程抗体又称重组抗体 , 就是指利用重组 DNA 及蛋白质工程技术对编码抗体得基因按 不同需要进行加工改造与重新装配 , 经转染适当得受体细