31菊花的组织培养

1、 学习目标学习目标 1、熟悉植物组织培养的基本过程、熟悉植物组织培养的基本过程 2、了解植物组织培养的影响因素、了解植物组织培养的影响因素 3、掌握植物组织培养的操作过程、掌握植物组织培养的操作过程 学习重点与难点学习重点与难点 植物组织培养过程中使用的无菌技术。植物组织培养过程中使用的无菌技术。植物组织培养的原理植物组织培养的原理植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性植物体细胞植物体细胞 动物体细胞动物体细胞（一）植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程 离体器官、 组织或细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 根、芽 植物体 细胞分化细胞分化：概念、：概念、实质实质、特点、结果？、特点、结果？

2、什么是脱（去）分化？什么是再分化？什么是脱（去）分化？什么是再分化？ 什么是愈伤组织？有何特点？什么是愈伤组织？有何特点？人参的愈伤组织人参的愈伤组织（二）影响植物组织培养的因素（二）影响植物组织培养的因素1、外植体的选取、外植体的选取不同植物的组织培养难度不同植物的组织培养难度 _ 同一种植物的不同组织培养难度同一种植物的不同组织培养难度_差别很大差别很大不同不同如菊花的组织培养，一般选择如菊花的组织培养，一般选择_植株植株茎茎_。未开花未开花上部新萌生的侧枝上部新萌生的侧枝对于同一种植物材料，材料的对于同一种植物材料，材料的_、 _等也会影响实验结果。等也会影响实验结果。年龄年龄保存时间的

3、长短保存时间的长短2、培、培养基的养基的配制配制常用的一种培养基为常用的一种培养基为_其其主要成分包括：主要成分包括：_元素：元素：C C、H H、O O、N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S S_元素：元素：B B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoCo_ ：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等_ ：生长素、细胞分裂素、赤霉素等：生长素、细胞分裂素、赤霉素等MS培养基培养基大量大量微量微量有机物有机物植物激素植物激素植物激素中植物激素中_和和_是启动细胞分裂、是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。脱分化和再分化的关

4、键性因素。 _、_以及以及_等，都会影响等，都会影响实验结果。实验结果。 不不同植物激素使用顺序和使用量同植物激素使用顺序和使用量生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素植物激素的浓度植物激素的浓度使用的先后顺序使用的先后顺序用量的比例用量的比例使用顺序使用顺序和使用量和使用量实验结果实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于有利于_，但，但_先使用细胞分裂素，后使用生长素先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞既分裂又分化细胞既分裂又分化同时使用同时使用_提高提高不不同植物激素使用顺序和使用量同植物激素使用顺序和使用量细胞分裂细胞分裂细胞不分化细胞不分化分化频率分化频率生长

5、素生长素/ /细胞分裂素比值高时细胞分裂素比值高时 促进促进_，抑制抑制_生长素生长素/ /细胞分裂素比值细胞分裂素比值低低时时促进促进_，抑制抑制_生长素生长素/ /细胞分裂素比值细胞分裂素比值适中适中时时促进促进_ 根分化根分化芽形成芽形成芽分化芽分化根形成根形成促进愈伤组织生长促进愈伤组织生长思思 考考 在植物组织培养的过程中，为什么需在植物组织培养的过程中，为什么需要无菌操作？要无菌操作？思思 考考 植物组织培养所利用的植物材料体积小、植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。抗性差，对培养条件的要求较高。 用于植物组织培养的培养基同样适合于用于植物组织培养的培

6、养基同样适合于某些微生物的生长某些微生物的生长。3、环境因素：环境因素：不同的植物对各种条件的要求往往不同的植物对各种条件的要求往往_。 如进行菊花的组织培养，一般将如进行菊花的组织培养，一般将pHpH控制在控制在_左右；左右；温度控制在温度控制在_ ；并且每天用日光灯照射并且每天用日光灯照射_ 。 不同不同5.8181822 22 12h12h4、无菌环境、无菌环境在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境。在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境。无菌技术包括对无菌技术包括对_和和_ 的消毒灭菌的消毒灭菌。 培养基培养基外植体外植体整个过程必须在无菌条件下进行整个过程必须在无菌条件下进行 （

7、一）制备（一）制备MS培养基培养基 （二）外植体消毒（二）外植体消毒 （三）接种（三）接种 （四）培养（四）培养 （五）移栽（五）移栽 （六）栽培（六）栽培实验操作流程：实验操作流程：2、实验具体操作、实验具体操作（1）制备）制备MS固体培养基固体培养基 实验室一般使用实验室一般使用_保存的配制好的保存的配制好的培养基培养基母液母液来制备来制备配制各种母液配制各种母液 配制母液时，大量元素浓缩配制母液时，大量元素浓缩_ _ ，微量，微量元素浓缩元素浓缩_ _ ，常温保存常温保存。激素类、维生素。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照类以及用量比较小的有机物可以按照_的质的质量浓度单独配

8、制母液。量浓度单独配制母液。 用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，倍数，计算用量计算用量。1mg/ml410倍倍100倍倍配制培养基。配制培养基。2、实验具体操作、实验具体操作植物激素植物激素在菊花组织培养中，可以不添加在菊花组织培养中，可以不添加_ ，原因是菊花茎段组织培养原因是菊花茎段组织培养_ 。比较容易比较容易灭菌灭菌将分装好的培养基连同其他器械一起进行将分装好的培养基连同其他器械一起进行_。高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌（2）外植体消毒）外植体消毒 选取菊花茎段时，要取选取菊花茎段时，要取 _。流水流水冲洗冲洗酒精酒精无菌水无菌水氯化汞

9、氯化汞无菌水无菌水消毒流程：消毒流程：浓度浓度_摇动摇动_次次时间时间_s浓度浓度_时间时间_min至少清洗至少清洗_次次漂净漂净_生长旺盛的嫩枝生长旺盛的嫩枝70%23670.1%123消毒液消毒液 不是。对外植体进行表面消毒时，不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。物的耐受能力。 在外植体消毒过程中，是不是强在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？度越大越好，为什么？ 思思 考考（3）接种）接种 前期准备：用前期准备：用_消毒工作台，点消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器燃酒精灯。所有工作都必

10、须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用械使用前后都要用_灭菌。灭菌。接种操作：插入外植体时接种操作：插入外植体时_端朝上，端朝上，每个锥形瓶接种每个锥形瓶接种_个外植体。个外植体。70的酒精的酒精火焰灼烧火焰灼烧形态学上形态学上78思思 考考（4）培养）培养 接种后的锥形瓶最好放在接种后的锥形瓶最好放在_中中培养。培养期间定期进行培养。培养期间定期进行_，温度控制，温度控制在在_，并且，并且每天每天用日光灯光照用日光灯光照_h h。无菌箱无菌箱182212消毒消毒了解：了解：光照条件光照条件（5）移栽）移栽 移栽生根的试管苗之前，应移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生先打开封口膜，在

11、培养间生长几日；然后用流水清洗长几日；然后用流水清洗_，将幼苗移植，将幼苗移植到到_等环境中生活一段时间，等环境中生活一段时间，进进行壮苗行壮苗。最后进行露天栽培。最后进行露天栽培。根根部的培部的培养基养基消过毒的蛭石或珍珠岩消过毒的蛭石或珍珠岩1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？在

12、整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？思思 考考三、结果分析与评价三、结果分析与评价（一）对接种操作中（一）对接种操作中污染情况污染情况的分析的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？污染物如何处理？成污染的原因有哪些？污染物如何处理？思思 考考四、课题延伸四、课题延伸 微型繁殖微型繁殖作物脱毒作物脱毒人工种子人工种子单倍体育种单倍

13、体育种突变体的利用突变体的利用 外植体的生理状态是成功进行组织外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。思思 考考 在选取菊花茎段的时候，为什么要在选取菊花茎段的时候，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？选取生长旺盛的嫩枝？1.某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为其技术路线为“取材取材消毒消毒愈伤组织培养愈伤组织培养出芽出芽生根生根移栽移栽”。下列有关叙述，错误的是。下列有关叙述，错误的是 （ ）A消毒的原则是既杀死材料

14、表面的微生物，又消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害减少消毒剂对细胞的伤害B在愈伤组织培培养中加入细胞融合的诱导剂，在愈伤组织培培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞可获得染色体加倍的细胞C出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表达的调控达的调控D生根时，培养基通常应含生根时，培养基通常应含萘乙酸等生长素萘乙酸等生长素类调节剂类调节剂巩固练习巩固练习B2、甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，、甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分甲含有效成分A，乙含有效成分，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同。某

15、研究小组拟培育同时含有时含有A和和B的新型药用植物。回答下列问题：的新型药用植物。回答下列问题：（1）为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，）为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用先用 酶和酶和 酶酶 去除细胞壁，获得具有活力去除细胞壁，获得具有活力的的 ，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成细胞进一步培养形成 组织，然后经过组织，然后经过 形成形成完整的杂种植株。这种培育技术称为完整的杂种植株。这种培育技术称为 。（2）上述杂种植株属于多倍体，多倍体是）上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指指 。假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而。假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是是 。（3）这种杂种植株可通过制作