选修专题课题微生物的实验室培养修改PPT学习教案

1、会计学13.细菌的形态第1页/共38页4.细菌的结构多糖多糖肽聚肽聚糖糖拟核区，一个裸露拟核区，一个裸露的大型环状的大型环状DNA核糖核糖体体第2页/共38页二分裂二分裂5.细菌的繁殖6.菌落.定义：单个或者少数细菌（或酵母菌、霉菌等）在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。.特征： 大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。.功能： 每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。第3页/共38页几种菌落及其形态第4页/共38页几种菌落及其形态第5页/共38页有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成

2、一个椭圆形的一个椭圆形的休眠体休眠体，叫做芽孢。，叫做芽孢。芽孢的芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌成一个细菌细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。 第6页/共38页不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参

3、考教材P83附录内容)pH、特殊营养物质（例如:维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶等)以及氧气、二氧化碳、渗透压等 1.概念（P14）2.分类3.4.培养基内所含的基本物质(1)水(2)碳源 (3)氮源(4)无机盐(5)其他条件：（二）培养基（二）培养基第7页/共38页划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性质物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别培养基鉴别培养基不加凝固剂加凝固剂，如琼脂发酵观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种植物组织培养含化学成分不明确的天然物质动物细胞培养培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某

4、种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物基因工程、单克隆抗体的制备在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基2.分类第8页/共38页蛋白质脂肪酸返回不同微生物所利用的碳源不同a. 异养型微生物的碳源为b. 自养型微生物的碳源为碳酸盐、碳酸氢盐、二氧化碳糖类（主要）含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）第9页/共38页蛋白胨牛肉膏尿素返回固氮微生物所利用的氮源是氮气氨气硝酸盐氨盐氮气第10页/共38页（三）无菌技术（三）无菌技术第11页/共38页第12页/共38页1.获得

5、纯净培养物的关键: 2.无菌技术包括的四大方面（认真看教材P14、15）3.区分消毒与灭菌（三）无菌技术（三）无菌技术防止外来杂菌的入侵1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？生物污染外，还有什么目的？无菌技术能有效避免操作者自身被微生物感染。2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。果需要，请选择合适的方法。（1 1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（

6、3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手灭菌灭菌消毒第13页/共38页消毒消毒灭菌灭菌条件条件温和温和强烈强烈作用作用范围范围物体表面或内部一部分物体表面或内部一部分,不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子物体内外所有微生物物体内外所有微生物,包包括芽孢和孢子括芽孢和孢子（三）无菌技术（三）无菌技术3 3、灭菌和消毒的比较、灭菌和消毒的比较第14页/共38页1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌第15页/共38页第2课时【本节目标】掌握微生物培养的实验操作，学会进行结果分析与评价。【重点及难点】微

7、生物培养的实验操作。微生物培养的实验操作。第16页/共38页二、实验操作二、实验操作（一）（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基第17页/共38页1.计算2.称量3.溶化4.灭菌: 将锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。5.倒平板 待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。 保温箱培养2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。第18页/共38页第19页/共38页1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用来左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？倒平板。你用什么办法来估计

8、培养基的温度？2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？什么？活动一：活动一：阅读课本阅读课本P16-17，完成下面问题：，完成下面问题：第20页/共38页1.可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基

9、。3.防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面造成污染。4.空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。活动一：活动一：阅读课本阅读课本P16-17，完成下面问题：，完成下面问题：第21页/共38页微生物接种的常用方法有： 平板划线法； 稀释涂布平板法； 斜面接种； 穿刺接种 等。各种方法的核心都是_。防止杂菌的污染，保证培养物的纯度防止杂菌的污染，保证培养物的纯度二、实验操作二、实验操作（二）（二）纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌第22页/共38页第23页/共38页第24页/共38页第25页/共38页活动二：阅读课本活动二：阅读课本P18-19，完成下面问

10、题：，完成下面问题：1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？什么？2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后其冷却后再进行划线？再进行划线？3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？一次划线的末端开始划线？4.4.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌

11、操作要求，想一想，第划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应如步应如何进行无菌操作？何进行无菌操作？第26页/共38页活动二：阅读课本活动二：阅读课本P18-19，完成下面问题：，完成下面问题：1.1）避免接种环上存在的微生物污染培养物；2）为了杀死上次划线结束时接种环上残留的菌种； 3）能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.防止高温杀死菌种。3.P18：将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，：将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，最终获得单菌落。最终获得单菌落。4.4.应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离

12、要合适、吸管头不要例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。第27页/共38页将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，最终获得单菌落。实验结果：实验结果：第28页/共38页第29页/共38页延伸：延伸：1、该方法的步骤包括？、该方法的步骤包括？1、一般从哪一稀释倍数取菌液进行涂布？、一般从哪一稀释倍数取菌液进行涂布？2、每一稀释倍数菌液涂布时为什么至少涂布、每一稀释倍数菌液涂布时为什么至少涂布3个平个平板？板？3、怎么估算出试管中的活菌数？、怎么估算出试管中的活菌数？P金版金版P19 84、靠这种方法估算

13、出的菌落数比活菌的实际值偏高、靠这种方法估算出的菌落数比活菌的实际值偏高还是偏低？为什么？还是偏低？为什么？系列稀释和涂布平板系列稀释和涂布平板103金版金版P18微点拨微点拨偏低；稀释度数的控制、取样量是否足够、偏低；稀释度数的控制、取样量是否足够、平板的培养条件是否合适，再者两个或多个平板的培养条件是否合适，再者两个或多个细胞连在一起时统计为一个菌落，细胞连在一起时统计为一个菌落，第30页/共38页稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍实验结果：实验结果：培养空白平板的目的是培养空白平板的目的是检验培养基灭菌是否合格检验培养基灭菌是否合格第31页/共

14、38页方法方法优点优点缺点缺点平板划线平板划线法法可以观察菌落的特可以观察菌落的特征、对混合菌进行征、对混合菌进行分离分离不能计数不能计数稀释涂布稀释涂布平板法平板法可以计数，可以观可以计数，可以观察菌落特征察菌落特征操作较麻烦，稀释度操作较麻烦，稀释度不够高时，很难得到不够高时，很难得到单个菌落单个菌落P金版金版18适用于好氧菌适用于好氧菌适用于兼性厌氧菌适用于兼性厌氧菌和厌氧菌和厌氧菌平板划线法是通过连续划线进行稀释细菌，稀释涂布平板法是通过稀释菌液达到稀释的目的。 第32页/共38页接种方法的判断？接种方法的判断？第33页/共38页.培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1

15、2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。.接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。.是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。三、结果分析与评价三、结果分析与评价第34页/共38页临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。长期保存：甘油管藏法，-20冷冻。四、课题延伸四、课题延伸菌种的保存菌种的保存第35页/共38页微微生生物物的的培培养养基础知识实验操作结果分析与评价培养基培养基定义：定义：分类：分类：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质固体培养固体培养基基液体培养液体培养基基无菌技术无菌技术培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法定义：定义：消毒与灭菌消毒与灭菌常