超敏反应性疾病及其免疫检测

1、 超敏反应超敏反应/ /变态反应变态反应 Hypersensitivity/AllergyHypersensitivity/Allergy 定义：机体接触到某种抗原并且致敏后，再次受到定义：机体接触到某种抗原并且致敏后，再次受到相同抗原刺激时，出现相同抗原刺激时，出现生理功能紊乱生理功能紊乱或或组织细胞损组织细胞损伤伤的异常适应性免疫应答。的异常适应性免疫应答。变应原变应原(Allergen):(Allergen):引起超敏反应的抗原引起超敏反应的抗原超敏反应分为四型超敏反应分为四型 （依发生机制和临床特点）（依发生机制和临床特点）： 型超敏反应型超敏反应 ( (速发型超敏反应速发型超敏反应)

2、 ) 型超敏反应型超敏反应 ( (细胞溶解型或细胞毒型细胞溶解型或细胞毒型) ) 型超敏反应型超敏反应 ( (免疫复合物型或血管炎型免疫复合物型或血管炎型) ) 型超敏反应型超敏反应 ( (迟发型超敏反应迟发型超敏反应) ) 型超敏反应型超敏反应 特点：特点：1.1.发生快，恢复快；发生快，恢复快；2.2.常引起生理功能紊乱，一般无组织损伤；常引起生理功能紊乱，一般无组织损伤； 3.3.由由IgEIgE介导，介导，肥大细胞肥大细胞和和嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞参与参与4.4.有明显的个体差异和遗传背景。有明显的个体差异和遗传背景。 型超敏反应型超敏反应 一一. .参与参与型超敏反应的成分型超敏反

3、应的成分 ( (一一) )变应原变应原 药物或化学物质药物或化学物质 - - 青霉素、磺胺等青霉素、磺胺等 吸入性变应原吸入性变应原 - - 花粉、屋尘花粉、屋尘( (尘螨、皮屑、尘螨、皮屑、真菌的孢子等真菌的孢子等 食物变应原食物变应原 - - 鱼、虾、肉、蛋、牛奶等鱼、虾、肉、蛋、牛奶等 接触性变应原接触性变应原-工业产品及合成物工业产品及合成物 型超敏反应型超敏反应( (二二) )抗体IgEIgE( (三三) )细胞细胞肥大细胞和嗜碱性粒细胞肥大细胞和嗜碱性粒细胞IgEIgE Fc Fc受体受体嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞 型超敏反应的常见疾病型超敏反应的常见疾病（一）过敏性休克（一）过敏性

4、休克 药物过敏性休克药物过敏性休克 血清过敏性休克血清过敏性休克（二）呼吸道过敏反应（二）呼吸道过敏反应 过敏性鼻炎过敏性鼻炎( (枯草热枯草热) )、支气管哮喘、支气管哮喘（三）消化道过敏反应（三）消化道过敏反应（四）皮肤过敏反应（四）皮肤过敏反应 荨麻疹、湿疹、荨麻疹、湿疹、血管血管神经性水肿。神经性水肿。 荨麻疹荨麻疹 湿湿 疹疹结膜炎结膜炎哮喘病哮喘病 I I型超敏反应免疫学检测项目型超敏反应免疫学检测项目皮肤试验实验原理：变应原 致敏者皮肤 Ag+IgE （M、B) 皮肤挑刺、划痕皮内注射释放生物活性介质20-30m局部皮肤出现红晕、红斑、风团 阳性 皮肤试验皮内试验方法皮肤消毒变应

5、原提取液注入前臂内侧皮内（0.01-0.02ml）2-3mm的皮丘两种间距2.2-5.0cm 15-25分钟观察结果阴性对照-生理盐水阳性对照-盐酸组胺 皮肤试验假阳性原因假阳性原因变应原稀释液偏酸或偏碱患者有皮肤划痕症抗原不纯和被污染抗原量注射过多假阴性原因假阴性原因变应原抗原性丧失或浓度过低患者皮肤反应较低受试者正使用抗组胺类药或激素类药注射部位过深或注射量太少 型超敏反应型超敏反应 临床意义 寻找变应原 预防药物或疫苗过敏 应用评价 过敏原有限 食物过敏与皮肤试验相关性较差 选择过敏原应结合实际情况型超敏反应型超敏反应 血清总IgEIgE检测常用方法：免疫比浊法 化学发光免疫法 酶联免疫

6、吸附法-适用于中小实验室临床意义：升高见于型超敏反应性疾病， 寄生虫感染， IgE型多发性骨髓瘤应用评价：应建立当地人群IgEIgE水平的参考区间 临床实验室常用型超敏反应型超敏反应 特异性IgEIgE检测（sIgE） 放射变应原吸附试验 免疫印迹测定法 斑点酶免疫印迹法斑点酶免疫印迹法实验原理实验原理 用用NCNC膜作为固相支持物，检测区的不同区域包被有特膜作为固相支持物，检测区的不同区域包被有特异性的过敏原。检测时将稀释的病人血清加入反应槽内，异性的过敏原。检测时将稀释的病人血清加入反应槽内，血清中的血清中的sIgEsIgE与与NCNC膜上的相应过敏原结合，再加入酶标记膜上的相应过敏原结合

7、，再加入酶标记的抗人的抗人IgEIgE抗体，此抗体会与检测区抗体，此抗体会与检测区NCNC膜上的膜上的sIgEsIgE结合，然结合，然后加入底物显色。通过显色区带确定血清中含有哪种后加入底物显色。通过显色区带确定血清中含有哪种sIgEsIgE，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。稀释好的洗液将检测条要充分浸透，放在摇床上摇稀释好的洗液将检测条要充分浸透，放在摇床上摇10分钟分钟倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应1.5小时小时 倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡1

8、0分钟，重复三次分钟，重复三次 每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人IgE，放于摇床上室温反应，放于摇床上室温反应30分钟分钟将碱性磷酸酶标记的抗人将碱性磷酸酶标记的抗人IgE倒掉，用洗液洗三次，每次倒掉，用洗液洗三次，每次10分钟分钟 加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，避光反应约加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，避光反应约10分钟分钟 去掉底物溶液，用纯水洗三次，每次去掉底物溶液，用纯水洗三次，每次5分钟分钟操作步骤操作步骤将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果结果分析结果分析 通过显色区带确定血清中含有哪种通过显

9、色区带确定血清中含有哪种sIgE，进而判断，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。待检者对哪种过敏原过敏。临床意义临床意义 slgE测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于型超敏反应的诊断。该检测条包被有多种特异性过敏原，通型超敏反应的诊断。该检测条包被有多种特异性过敏原，通过检测血浆（血清）中过敏原过检测血浆（血清）中过敏原slgE，筛查待检者对何种过敏，筛查待检者对何种过敏原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。 II II 型超敏反应型超敏反应定义：定义： II型超敏反应又称细胞毒型（cytotoxic type）或细胞溶

10、解型（cytolytic type）超敏反应，它是由靶细胞表面的抗原与相应IgG或IgM类抗体结合后，在补体、巨噬细胞和NK细胞参与下，引起的以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反应。 II II 型超敏反应型超敏反应特点：特点： 1. 直接或间接与细胞有关直接或间接与细胞有关 2. IgG 或或 IgM 介导介导 3. 补体、吞噬细胞、补体、吞噬细胞、NK细胞参与细胞参与 4. 造成细胞溶解或功能紊乱造成细胞溶解或功能紊乱 II II 型超敏反应型超敏反应靶细胞：正常组织细胞、改变的自身组织细胞、修饰的自身组织细胞抗原：同种异型抗原、共同抗原、变性自身抗原、外来抗原 抗体：IgG和IgM类抗

11、体参与细胞损伤的物质：补体 、吞噬细胞、NK细胞变应原输血反应（输血反应（transfusion reaction） 新生儿溶血（新生儿溶血（hemolytic of the newborn）自身免疫性溶血性贫血（自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolytic anemia）药物过敏性血细胞减少药物过敏性血细胞减少甲状腺机能亢进（甲状腺机能亢进（Graves disease）链球菌感染后肾小球肾炎链球菌感染后肾小球肾炎Type II Hypersensitivity Reactions:Type II Hypersensitivity Reactions:Examples of

12、 DiseasesExamples of Diseases甲状腺机能亢进甲状腺机能亢进(Graves病病) IIII型超敏反应免疫学检测项目型超敏反应免疫学检测项目患者红细胞患者红细胞Coombs试剂试剂检测红细胞上不完全抗体检测红细胞上不完全抗体直接直接Coombs试验试验试管法操作步骤试管法操作步骤用生理盐水配用生理盐水配5%红细胞悬液红细胞悬液取洁净小试管取洁净小试管2支，支，1管加管加1滴滴5%红细胞悬液，另一管加生理盐红细胞悬液，另一管加生理盐水作对照水作对照 在生理盐水和在生理盐水和5%红细胞悬液中分别加入诊断试剂一滴，使其红细胞悬液中分别加入诊断试剂一滴，使其混匀，室温稍待片刻混

13、匀，室温稍待片刻1000r离心离心1 min或或3000r离心离心15s。 取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻轻摇动试管，如有凝集，取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻轻摇动试管，如有凝集，则为阳性结果；如无凝集，应在室温延长则为阳性结果；如无凝集，应在室温延长1530 min的反应时的反应时间，再离心看结果。间，再离心看结果。结果分析结果分析 生理盐水对照不应发生凝集，为均匀浑浊的乳状液。生理盐水对照不应发生凝集，为均匀浑浊的乳状液。在红细胞悬液中，如红细胞凝集成片状，边缘皱褶如花在红细胞悬液中，如红细胞凝集成片状，边缘皱褶如花边状或边缘松散为阳性。如与对照相同，为阴性。边状或边缘松散为阳性。

14、如与对照相同，为阴性。 临床意义临床意义 直接直接Coombs试验用于检测患者红细胞上不完全抗体，试验用于检测患者红细胞上不完全抗体，Coombs试验阳性可见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素试验阳性可见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性综合征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼疮、类风溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤等。湿、恶性肿瘤等。患者血清靶红细胞致敏红细胞Coombs试剂检测血清中的抗红细胞抗体检测血清中的抗红细胞抗体间接间接Coombs试验试验微柱法操

15、作步骤微柱法操作步骤撕开微柱凝胶卡密封纸，标记撕开微柱凝胶卡密封纸，标记加加1%筛选红细胞筛选红细胞50l及受检者血清及受检者血清25l37孵育孵育15min离心机离心离心机离心10min，1000r/min 观察结果，如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳观察结果，如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳性结果；反之，如红细胞沉于凝胶底部（管底尖部），则为性结果；反之，如红细胞沉于凝胶底部（管底尖部），则为阴性结果。阴性结果。结果分析结果分析 - 100%的红细胞沉在微管的底部的红细胞沉在微管的底部+/- 100%的红细胞沉在微管的下端的红细胞沉在微管的下端1/3之内之内1+ 80%的红细

16、胞沉在微管的下端的红细胞沉在微管的下端2/3之内之内2+ 80%的红细胞沉在微管的上端的红细胞沉在微管的上端2/3之内之内3+ 80%的红细胞沉在微管的上端的红细胞沉在微管的上端1/3之内之内4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部凝集的细胞全部处于微管的顶部d.p. 双群双群Hemo. 溶血溶血反应格局及判断标准反应格局及判断标准 临床意义临床意义 间接间接Coombs试验用于检测患者游离血清中的不完试验用于检测患者游离血清中的不完全抗体。此实验多用于检测母体全抗体。此实验多用于检测母体Rh（D）抗体，以便及）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生，亦可对红细胞不相早发现和避免新生儿溶血症的发

17、生，亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。容的输血所产生的血型抗体进行检测。 III III 型超敏反应型超敏反应 定义：定义： III型超敏反应是指由可溶性免疫复合物沉积于局部或全身多处毛细血管基底膜，通过激活补体,并在血小板、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞等的参与下，引起的以充血水肿、局部坏死和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反应和组织损伤。Blood cell antigenAdsorbed drug orDrug metaboliteAntibody to drugcomplementLysis药物过敏性血细胞减少药物过敏性血细胞减少 III III 型超敏反应型超敏反应 特点：特

18、点： 1. 形成中等大小形成中等大小（106 Da）、）、可溶性可溶性（19s）复复合物（合物（IC)， IC沉积在血管基底膜上沉积在血管基底膜上 2. IgG,IgM 或或 IgA介导介导 3. 补体、中性粒细胞参与补体、中性粒细胞参与 4. 造成血管及周围组织炎症造成血管及周围组织炎症 免疫复合物易于形成与沉积的因素免疫复合物易于形成与沉积的因素1.1.抗原成分在体内长期滞留抗原成分在体内长期滞留2.2.血管通透性增强血管通透性增强3.3.组织的解剖学及血流动力学组织的解剖学及血流动力学 免疫复合物易沉积于静脉压较高及形成涡流的毛细血管迂回处，免疫复合物易沉积于静脉压较高及形成涡流的毛细血

19、管迂回处，如肾小球基底膜及关节滑膜、肝、脾、血管等部位。如肾小球基底膜及关节滑膜、肝、脾、血管等部位。4.4.免疫复合物的性质免疫复合物的性质 中等大小，可溶性免疫复合物中等大小，可溶性免疫复合物 组织内沉积组织内沉积。 III III 型超敏反应型超敏反应Arthus反应及类反应及类Arthus反应反应 (局部免疫复合物病局部免疫复合物病)血清病（血清病（serum sickness）链球菌感染后肾小球肾炎链球菌感染后肾小球肾炎类风湿性关节炎（类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis）系统性红斑狼疮（系统性红斑狼疮（SLE）等）等临床常见的临床常见的III型超敏反应性疾病型超

20、敏反应性疾病 III III 型超敏反应型超敏反应 RA RA 患者手指关节实质性损伤患者手指关节实质性损伤IIIIII型超敏反应免疫学检测项目型超敏反应免疫学检测项目 PEG比浊法比浊法实验原理实验原理 本试验是检测抗原非特异性循环免疫复合物的一种方本试验是检测抗原非特异性循环免疫复合物的一种方法。法。PEG是环氧乙烷和水的多聚物，为一种不带电荷的直是环氧乙烷和水的多聚物，为一种不带电荷的直链大分子多糖。终浓度为链大分子多糖。终浓度为3%4%的的PEG能相对选择性地能相对选择性地沉淀沉淀CIC。用分光光度计测定浊度，反应沉淀物含量。用分光光度计测定浊度，反应沉淀物含量。 临床意义临床意义 循

21、环免疫复合物（循环免疫复合物（Circulationimmunecomplex，CIC）又称可溶）又称可溶性免疫复合物，分子量为性免疫复合物，分子量为50万万100万，沉降系数万，沉降系数8.819S，它不易被，它不易被吞噬细胞吞噬，又不能经肾小球排出，可较长时间在血液中循环，一吞噬细胞吞噬，又不能经肾小球排出，可较长时间在血液中循环，一旦大量循环免疫复合物沉积于组织中，则引起组织损伤及相关的免疫旦大量循环免疫复合物沉积于组织中，则引起组织损伤及相关的免疫复合物病。复合物病。CIC阳性常见于：阳性常见于： 1. 部分自身免疫性疾病，如部分自身免疫性疾病，如SLE，类风湿关节炎等；，类风湿关节炎等； 2. 膜增殖性肾炎，链球菌感染后肾炎；膜增殖性肾炎，链球菌感染后肾