山西农业大学饲料分析方法

1、项目一 饲料中水分含量的测定一、实验目的通过实验，要求掌握各类饲料样品中水分（干物质）的测定方法。并实际测出样品中的水分含量。二、实验原理风干样品（注：本实验所用样品均为风干样品）在105±2烘箱中，在一个大气压下烘干到恒重（两次重量之差小于规定数值称为恒重），样品逸失的重量即为水分（即吸附水）。三、实验设备1、样品粉碎机或研钵；2、分析筛：孔径0.42mm（40目）；3、分析天平：电子天平，感量0.0001g；4、电热式恒温烘箱：可控制温度为105±2；5、称样皿：铝盒，直径40mm以上，高25mm以下；6、干燥器：以变色硅胶作干燥剂（干燥时为蓝色，吸水后变为粉

2、红色）。7、手套：称量操作或拿取铝盒时用，以减少用手直接接触时带来的误差。8、凡士林：干燥器的沿口涂敷凡士林可以增加其密闭性。四、测定方法与步骤1、洁净的铝盒（请记住各组的铝盒号），放于105±2烘箱中烘1h（开盖烘干），取出，盖好盖，在干燥器中冷却至室温（时间为30min，注意将盖子盖严），在分析天平上准确称重（盖盖称，记录数据），再放回烘箱烘干30in，同样冷却，称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。2、在已恒重的铝盒内放入约25g样品（约2药匙），用分析天平准确称重（盖上盖子称，注意记录），重量之差即为样品重。3、将装有样品的铝盒放回105±2烘箱中，烘3h

3、（将盖子揭开），取出，盖好盖，在干燥器中冷却至室温（30min，注意将盖子盖严），称重（记录数据）。再同样烘干lh，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.002g。五、结果计算 式中：m1105烘干前样品及铝盒重（g）； m2一105烘干后样品及铝盒重（g）； m0一已恒重的铝盒重（g）。 每个试样，应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。两个平行样测定值相差不得超过0.2%，否则应重做。六、注意事项1、铝盒应放于烘箱之中央，勿靠近箱壁（为什么？）。2、铝盒在烘箱内应敞开盖子，在干燥器中冷却或用天平称重时应盖严（为什么？）。3、取放铝盒时应戴手套操作（为什么？）。4、某些含脂肪高的样品，烘

4、干时间长，反而增重，应以增重前次的重量为准（为什么？）5、含糖分高的、易分解的或易焦化的样品，应采用减压干燥法测定。6、新鲜样品的总水分计算 实验记录表样品名称： 编号： 分析时间：平行样品编号No.No.铝盒编号空铝盒重：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）空铝盒+样品重（g） 样品重（g）烘干后的铝盒+样品重（g） 第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）蒸发水分重量（g）平行样品吸附水（%）重复性（相差%）样品吸附水（%）样品干物质（%）项目二 饲料中粗灰分含量的测定一、实验目的通过饲料样品中粗灰分的测定，掌握粗灰

5、分的测定原理和方法。二、实验原理饲料样品经550的高温灼烧，失去所有有机物，所剩余的残渣即为灰分。残渣中主要是氧化物、盐类等矿物质，也包括混入饲料的砂石、土等，故称粗灰分(CA：crude ash)。三、实验设备1、样品粉碎机2、分样筛，孔径0.42mm（40目）；3、分析天平：感量0.0001g；4、高温炉（茂福炉）：电加热，控制炉温在550±20；5、坩埚：（已标记好号的）瓷质坩埚；6、坩埚钳：镀铬的金属钳，取放坩埚用；7、干燥器：用变色硅胶作干燥剂。8、手套：尼龙手套，称重时使用。9、凡士林：涂抹干燥器盖时使用。四、测定方法与步骤1、将干净坩埚放入茂福炉（揭盖放），在550&#

6、177;20下灼烧30min，取出（用坩埚钳，小心烫伤），放入干燥器，lmin后盖严干燥器盖，冷却30min（盖盖冷却），用分析天平称重（戴手套操作，记录数据）。再重复灼烧，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.0005g为恒重。 2、在已恒重的坩埚中称取12g（约1药匙）样品，在电炉上小心炭化（坩埚盖需留一小缝隙，至无烟为止），再放人茂福炉（揭盖放），于550±20下灼烧3h，取出（用坩埚钳，小心烫伤），放入干燥器，lmin后盖严干燥器盖，冷却30min（盖盖冷却），用分析天平称重（戴手套操作，记录数据）。再同样灼烧1h，称重，直至两次称重之差小于0.001g为恒重。五、结果计算 式

7、中，m0己恒重的空坩埚重（g）； m1坩埚加样品重（g）； m2灰化后坩埚加灰分重（g）。每个样品应取两个平行样测定，以其算术平均值为结果。粗灰分含量在5以上时，允许相对偏差为1；粗灰分量在5以下时，允许相对偏差5%。 六、注意事项1、坩埚在茂福炉中尽量往里放，勿靠近炉门。2、坩埚在茂福炉内应揭开盖子，在干燥器或称重时应盖严。3、从茂福炉取放坩埚时应用坩埚钳，小心烫伤。4、炭化时要小火，以防炭化过快，试样飞溅。且坩埚盖稍留一缝隙，不冒烟为止。5、灰化后的残渣一般为灰白色，有红棕色是饲料中含铁高，呈蓝色是含锰高，如有黑色碳粒说明灰化不完全，应延长灼烧时间。6、测定灰分结束后，灰分勿倒掉

8、，保留之待测钙、磷用。7、新坩埚的编号：用细木棍蘸取0.5%FeCI3·6H2O（用蓝墨水做稀释液）溶液在坩埚上标记号码，然后在茂福炉550下灼烧1h，灼烧后其号码不会脱落。思考题1、为何灰化的温度宜控制在550度？（过高会引起部分矿物质如磷、硫、钾、钠等的挥发，过低则又燃烧不完全）2、灰化前为何要进行炭化？（1）防止在灼烧时，因温度高样品中的水分急剧蒸发使试样飞溅；（2）防止糖、蛋白质、淀粉等易发泡膨胀的物质在高温下发泡膨胀而溢出坩埚；（3）不经炭化而直接灰化，饲料中磷酸盐溶化凝成固形物，碳粒易被包住，灰化不完全）实验记录表样品名称： 编号： 分析时间：平行样品编号No.No.坩埚

9、编号空坩埚重：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）空坩埚+样品重（g） 样品重（g）灼烧后的坩埚+灰分重（g） 第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）灰分重（g）平行样品粗灰分（%）重复性（相对偏差%）样品粗灰分（%）项目三 饲料中粗蛋白含量的测定 （半微量凯氏定氮法）一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白质的测定，了解凯氏定氮法测定的基本原理，掌握半微量凯氏定氮法测定饲料粗蛋白质的方法，掌握粗蛋白质含量的计算方法。二、实验原理饲料中的有机物质在还原性催化剂(如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉)的帮助下

10、，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮（在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成NH4+并与H2SO4化合成（NH4）2SO4，而非含氮物质，则以CO 2 ，H2O，SO 2状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出NH3，用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红-溴甲酚绿作指示剂，用HCl标准溶液（ 0.1mol/L）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质(CP：crude protein)的含量。其主要化学反应如下：1、2NH4（CH2）2COOH+13H2SO4（NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2（丙氨

11、酸）2、（NH4）2SO4 +2NaOH2NH 3+2H2O+Na2SO43、4H3BO3+ NH 3NH4HB4O7+5H2O4、NH4HB4O7+HCl+5H2ONH4C1+4H3BO3本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺，铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质表示之。三、仪器设备1、样品粉碎机；2、分析筛：孔径0.42mm(40目)；3、分析天平：电子天平，感量0.0001g；4、称量纸：称量用；5、毒气柜或通风橱；6、消煮炉或电炉；7、滴定管：酸式，25或50ml；或半微量滴定管；8、凯式烧瓶：250或50

12、0m1，消化饲料用；9、凯氏蔗馏装置：半微量水蒸气蒸馏式；10、锥形瓶：150或250m1；接蒸馏液用11、容量瓶：100ml。放消化液用；12、小漏斗：转移消化液用；13、玻璃棒：转移消化液用；14、洗瓶：放蒸馏水用；15、滴管及小烧杯：定容用；16、移液管：10ml，吸取消化液用；17、洗耳球：吸取消化液用；18、量杯：10ml，加40%NaOH用；19、量筒或量杯：20ml，加硼酸用；20、pH试纸：检验是否蒸馏完全用；21、金属镊子：夹取pH试纸用。四、试剂1、硫酸：化学纯（比重1.84）；2、混合催化剂：硫酸铜:硫酸钾或硫酸钠=1:10，均为化学纯；3、40%氢氧化钠溶液：40g氢氧

13、化钠溶于100ml蒸馏水中；4、2%硼酸溶液：2g的硼酸溶于100ml蒸馏水中；5、混合指示剂：由甲基红 0.1%乙醇溶液与溴甲酚绿0.5%乙醇溶液等体积混合配成，贮于棕色瓶中配用。这种指示剂酸性时为紫红色，碱性时为蓝绿色，变色范围很窄且很灵敏。6、盐酸标准溶液：0.05mol/L,4.5ml盐酸注入1000ml蒸馏水中。标定：称取约0.08g在270300灼烧（或在550灼烧4050min）至恒重的无水碳酸钠，加入50mL水使之溶解，加10滴溴甲酚绿一甲基红混合指示剂，用配制的盐酸标准液滴定至溶液由绿色变为紫红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈紫红色。同时做空白试验。盐酸标准溶液的摩

14、尔浓度计算：C = m /（V1V2）× 0.0530式中：C盐酸标准溶液的摩尔浓度(mol/L)；m无水碳酸钠的质量（g）；V1样品滴定消耗盐酸标准溶液的体积(mL)；V2空白滴定消耗盐酸标准溶液的体积（mL）；0.0530每毫摩尔无水碳酸钠的克数。五、测定方法与步骤1、称样和消化：称取0.51g试样（可利用差减法），无损地放入凯氏烧瓶中（凯氏瓶上都写上各样品编号，以防拿错），加入混合催化剂约3g（约2药匙），与试样混合均匀，再加硫酸10ml（称样量多于1g者酌情多加，注意安全），凯氏瓶上放一小漏斗，在毒气柜内的消煮炉上小心加热，不时转动凯氏瓶使受热均匀，待样品焦化，泡沫消失，再加

15、强火力（360410）直至溶液澄清后（呈淡蓝色），再加热消化15min。取出，冷却至室温，加蒸馏水20m1转入100ml容量瓶（反复，少量多次用洗瓶的蒸馏水冲洗凯氏瓶），冷却后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液（容量瓶上编号，以防拿错）。试剂空白测定：除不加样品外其他相同。2、准备吸收液：取洁净锥形瓶（三角瓶，注意编号），加入2%硼酸溶液20ml（用量筒或量杯加入），滴入2滴混合指示剂（注意观察颜色，不呈蓝绿色），置于半微量蒸馏装置的冷凝管口下端，并使管口浸入该吸收液中。3、蒸馏蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此液为橙红色，否则应补加少许硫酸。准确移取试样分

16、解液10ml（利用移液管和洗耳球），注入蒸馏装置的反应室中（通过小玻杯），用少量蒸馏水冲洗（用洗瓶），塞好入口玻璃塞，再加40氢氧化钠溶液10ml（用量杯量好加），小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，再用少量蒸馏水冲洗一次，并在小玻杯内加水封密，防止漏气，吸收液变色后（什么颜色，注意观察）蒸馏5min，使冷凝管管口离开吸收液面，再蒸馏1min（是否蒸馏完全，可用pH检查），用蒸馏水清洗管口末端，洗液均流入吸收液。移开锥形瓶待滴定用。关闭冷凝水，关闭电源，然后排放反应室内废液，并清洗干净留给下一组做。（排放废液方法：用右手轻提样品杯中棒状玻塞，使水流入反应室的同时，立即用左手关闭夹子，盖

17、好玻塞。由于反应室外层中蒸汽冷缩、压力降低，反应室内废液通过反应室中插管自动抽到反应室外壳中，再在样品杯中加入2/3体积蒸馏水，如此反复三次既可排尽废液及洗涤液。打开夹子将反应室外壳中积存的废液排出，关闭夹子再使蒸汽通过全套蒸馏仪13min，可进行下一次蒸馏。）4、滴定 微量滴定管内装入0.05mol/L的HCI标准溶液，调整液面，滴定吸收氨后的硼酸溶液（注意操作要领，接近等当点时要逐滴滴入），溶液由蓝绿色变为灰红色为终点（记录盐酸标准液的用量）。5、空白测定在测定饲料样本中含氮量的同时，应做一空白对照测定，即各种试剂的用量及操作步骤完全相同，但不加样本（或用分析纯的蔗糖0.01g），这样可以

18、校正因药品不纯所发生的误差。六、结果计算每m1的lmol/L盐酸标准溶液相当于0.0140g的N。因此， 式中：v2试样滴定时所需盐酸标准溶液的体积（m1）； v1空白滴定时所需盐酸标准溶液的体积(m1)； c盐酸标准溶液的浓度(mol/L)； m一试样的质量（g）； v 试样的分解液总体积（ml）； v试样分解液蒸馏用体积（m1）； 0.0140每ml HCl标准溶液相当于N的克数； 6.25一氮换算成蛋白质的平均系数。 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋质含量在25以上，允许相对偏差为1；当粗蛋白质含量在l025时，允许相对偏差为2；当粗蛋白质含量在10

19、以下时，允许相对偏差为3。 六、注意事项1、测定步骤的检验 精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按测定步骤文字中的各步骤操作，并按公式计算（但不乘系数6.25），测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2，否则应检查加碱，蒸馏和滴定各步骤是否正确。2、消化时应经常转动凯氏瓶,以使得消化进行得迅速而完全。瓶颈上若发现有黑色颗粒，应小心地将凯氏瓶倾斜振摇，用消化液将它冲洗下来。3、蒸馏完毕应先取下接收瓶，然后关闭电源，以免酸液倒流。4、每次蒸馏后必须彻底洗净碱液，以免再次使用时引起误差。实验记录表样品名称： 编号： 分析时间：平行样品编号No.No.样品重（g）凯氏烧瓶编号盛放分解液的容量瓶编号

20、分解液总体积（ml）分解液蒸馏用体积（ml）滴定用盐酸标准溶液体积（ml）平行样品粗蛋白质（%）重复性（相对偏差%）样品粗蛋白质（%）盐酸标准溶液的摩尔浓度(mol/L)：滴定空白时所用盐酸标准溶液体积（ml）：项目四  饲料中粗纤维含量的测定一、实验目的掌握用饲料中粗纤维的测定方法，了解粗纤维测定方法中存在问题及解决的方案。二、实验原理用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醚、乙醇除去醚溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余残渣称为粗纤维(CF: crude fiber)。它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下测出的概略养分。其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和

21、木质素。三、仪器设备1、样品粉碎机；2、分析筛：孔径0.42mm（40目）；3、分析天平：电子天平，感量0.0001g；4、电热恒温箱：烘箱，可控制温度在130；5、茂福炉：电加热，可控制温度在550600；6、坩埚：瓷质坩埚；7、电炉和电热板：可控制温度；8、抽滤装置：抽真空装置，吸滤瓶及布氏漏斗；9、滤器：200目不锈钢网或尼龙网，或G2号玻璃滤器，也可用滤布（本实验用滤布）；10、干燥器：用变色硅胶作干燥剂；11、刻度烧杯：500ml（酸处理及碱处理时用）；12、玻璃棒：酸碱处理及转移时用；13、锥形瓶：3000ml（一瓶用于加热酸，一瓶用于加热H20）；14、表玻璃：酸碱处理时盖上以防

22、水分过多蒸发；15、量筒：200ml（量酸）、50ml（量碱）；16、定量分析滤纸：快速（醇醚处理时用）；17、量杯：10ml（乙醇、乙醚处理时用）；18、手套：尼龙手套（取拿坩埚及称量时用）；19、坩埚钳：取拿灼烧后坩埚用；20、记号笔：烧杯等编号用；21、pH试纸：转移时检查是否至中性；22、金属镊子：夹取pH试纸用23、漏斗架：醇醚处理时用24、漏斗：醇醚处理时用25、小烧杯：接醇醚处理时废液用四、试剂1、1.25%硫酸溶液：量取比重1.84的分析纯硫酸7ml，溶于1000ml水中。2、5%NaOH溶液：称取5g分析纯NaOH，溶于100ml水中。3、乙醇：95%乙醇，化学纯4、乙醚：化

23、学纯5、防泡剂：正辛醇，分析纯。五、测定方法与步骤1、称坩埚和滤纸：洁净的带编号坩埚（注意记住各组的坩埚号）放于105±2烘箱中烘1h（开盖烘干），取出，盖好盖，在干燥器中冷却至室温（30min，注意将盖子盖严），在分析天平上准确称重（盖盖称，记录数据），再放回烘箱烘干30in，同样冷却，称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。然后取定量分析滤纸一张，叠好放入坩埚内，放于105±2烘箱中烘1h（开盖烘干），取出，盖好盖，在干燥器中冷却至室温（30min，注意将盖子盖严），在分析天平上准确称重（盖盖称，记录数据），再放回烘箱烘干30in，同样冷却，称重，直至两次重量之

24、差小于0.0005g为恒重。得出滤纸的重量。2、称样：称取12g试样(采用差减法)，置入500ml刻度烧杯3、 酸处理：量筒量取200ml的预热1.25%硫酸溶液，置于加样品的烧杯中，置电炉上使1-3min沸腾，在电热板上保持微沸30±1min。注意保持硫酸浓度不变，样品不可损失（不断的补充热水，同时冲洗烧杯壁上的样品残渣）。4、抽滤、洗涤和转移：铺滤布于布氏漏斗上，将酸处理后的烧杯拿下，开始抽滤，用热的蒸馏水反复冲洗烧杯及残渣，直到洗至中性（用pH试纸检查滤液不变色）为止。转移残渣到原烧杯（用勺转移），并用热蒸馏水将滤布上的残渣无损转入（注意加水不宜过多，液面勿超过150ml）5、

25、碱处理：向烧杯内加入浓度为5%的预热的氢氧化钠溶液50ml，补充热蒸馏水于200ml刻度，依照酸处理方法同样微沸30min。（碱处理时易起泡沫，注意防止外溢）6、抽滤、洗涤和转移：抽滤和洗涤同步骤4，但转移时注意，预先将步骤1所得到的滤纸放于漏斗架上的漏斗内，将碱处理完毕的残渣转入此滤纸内（注意刮净和用少量水冲净残渣）。7、醇、醚处理：待滤纸中水过滤完后，先加10ml乙醇溶液（用量杯），滤净后再加入10ml乙醚冲洗。当乙醚滤净后将残渣用滤纸包好（用镊子操作），移入已称至恒重的原坩埚中。8、烘干并称重：待乙醚挥发完毕，将带有滤纸及残渣的坩埚放入105±2烘箱中烘3h（开盖烘干），取出，

26、于干燥器内冷却30min后称重（记录数据），再烘1h，冷却后称重，直到两次重量之差小于0.001g为恒重。9、炭化和灰化：将坩埚盖半开置于电炉上加热，无烟为止（切忌着火），然后转入茂福炉内，于550±20灼烧1h，取出，于干燥器内冷却30min后称重（记录数据），再灼烧30min，冷却称重至恒重（两次重量之差小于0.001g）。六、结果计算七、注意事项1、酸、碱处理后应稍微静止片刻，待残渣下沉后迅速滤过上清液，并用热水冲洗残渣至中性，否则抽滤困难。2、在酸碱处理的加热过程中，火力不可过猛，保持微沸即可。碱处理加热时小心起泡沫溢出。实验记录表样品名称： 编号： 分析时间：平行样品编号N

27、o.No.坩埚编号空坩埚重：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）坩埚+滤纸：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）恒重的滤纸重（g）样品重（g）烘干后的坩埚+滤纸+残渣重 第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）灰化后的坩埚+灰分重 第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）平行样品粗纤维（%）重复性（相差或相对偏差%）样品粗纤维（%）项目五 Van soest中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的测定传统的粗纤维分析过程中，有部分半纤维素、纤维素和木质素溶解于酸、碱中，

28、使测定的粗纤维含量偏低，同时又增加了无氮浸出物的计算误差。为了改进粗纤维分析方案，Van Soest(1976)提出了用中性洗涤纤维(Neutral Detergent Fiber,缩写NDF)、酸性洗涤纤维(Acid Detergent Fiber, 缩写ADF)、酸性洗涤木质素(Acid Detergent Lignin,缩写ADL)作为评定饲草中纤维类物质的指标。同时将饲料粗纤维中的半纤维素、纤维素和木质素全部分离出来，能更好地评定饲料粗纤维的营养价值。见下图中性洗涤纤维（NDF）：包含全部植物细胞壁成分，如纤维素、半纤维素、木质素、硅酸盐等酸性洗涤纤维（ADF）：包含纤维素、木质素、二

29、氧化硅等ADF-NDF=半纤维素 ADF-ADL=纤维素一、实验目的通过饲料样品中NDF和ADF的测定，掌握各类饲料样品中NDF和ADF的测定原理和方法。二、测定原理植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。三、仪器设备同粗纤维的测

30、定四、试剂1、中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.61g乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA，分析纯）和6.81g四硼酸钠 （Na2B4O710H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和 10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4. 65 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.97.1（pH值一般勿需调整）；2、酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CT

31、AB，分析纯）溶于1000ml已经标定过的0.5mol/L硫酸溶液中，搅动溶解，必要时过滤；3、0.5mol/L硫酸溶液：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），慢慢加入已装有500ml蒸馏水的1000ml容量瓶中，冷却后加水至刻度定容，标定；4、其他试剂：丙酮（化学纯）；无水亚硫酸钠（化学纯）；十氢化萘（防泡剂，化学纯）五、测定方法与步骤1、中性洗涤纤维测定（1）称坩埚和滤纸：洁净的带编号坩埚（注意记住各组的坩埚号）放于105±2烘箱中烘1h（开盖烘干），取出，盖好盖，在干燥器中冷却至室温（30min，注意将盖子盖严），在分析天平上准确称重（盖盖称，记录数据）

32、，再放回烘箱烘干30in，同样冷却，称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。然后取定量分析滤纸一张，叠好放入坩埚内，放于105±2烘箱中烘1h（开盖烘干），取出，盖好盖，在干燥器中冷却至室温（30min，注意将盖子盖严），在分析天平上准确称重（盖盖称，记录数据），再放回烘箱烘干30in，同样冷却，称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。得出滤纸的重量。（2）称样：称取0.51g试样(采用差减法)，置入500ml高型烧杯（烧杯注意编号，也可用三角瓶？）（3）中性洗涤剂处理：量筒量取100ml中性洗涤剂置于加样品的烧杯中，再加2ml十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠，置电炉上

33、，装上冷凝装置（若无，则盖以表玻璃），使5-10min沸腾，在电热板上保持微沸60min。注意保持硫酸浓度不变，样品不可损失（不断的补充热水，同时冲洗烧杯壁上的样品残渣，注意泡沫外溢）。（4）抽滤、洗涤和转移：煮沸完毕后，取下烧杯，将烧杯中溶液倒入安装在抽滤瓶上的布氏漏斗上的滤布上进行抽滤，将烧杯中的残渣全部移入，并用沸水冲洗烧杯与残渣，直洗至滤液呈中性为止。用20ml丙酮冲洗二次，抽滤（无丙酮时此项步骤可忽略）。预先将步骤1所得到的滤纸放于漏斗架上的漏斗内，将洗涤完毕的残渣转入此滤纸内（注意刮净和用少量水冲净残渣）。（5）烘干并称重：残液滤尽后，用镊子夹取残渣及滤纸放于坩埚内，置于105&#

34、177;2烘箱中烘3h（开盖烘干），取出，于干燥器内冷却30min后称重（记录数据），再烘1h，冷却后称重，直到两次重量之差小于0.001g为恒重。2、酸性洗涤纤维测定（1）称坩埚和滤纸：同上述中性洗涤纤维测定（1）（2）称样：同上述中性洗涤纤维测定（2）（3）酸性洗涤剂处理：量筒量取100ml酸性洗涤剂置于加样品的烧杯中，再加2ml十氢化萘。以下同上述中性洗涤纤维测定。（4）抽滤、洗涤和转移：煮沸完毕后，取下烧杯，将烧杯中溶液倒入安装在抽滤瓶上的布氏漏斗上的滤布上进行抽滤，将烧杯中的残渣全部移入，并用沸水冲洗烧杯与残渣，直洗至滤液呈中性为止。用少量丙酮洗涤残渣至冲下的丙酮液无色为止，并抽净丙

35、酮（无丙酮时此项步骤可忽略）。以下步骤同上述中性洗涤纤维测定。（5）烘干并称重：同上述中性洗涤纤维测定（5）六、结果计算中性洗涤纤维或酸性洗涤纤维含量的计算：中性洗涤纤维实验记录表样品名称： 编号： 分析时间：平行样品编号No.No.坩埚编号空坩埚重：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）坩埚+滤纸：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）恒重的滤纸重（g）样品重（g）烘干后的坩埚+滤纸+残渣重 第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）平行样品NDF（%）重复性（相差或相对偏差%）样品NDF（%）酸性洗

36、涤纤维实验记录表样品名称： 编号： 分析时间：平行样品编号No.No.坩埚编号空坩埚重：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）坩埚+滤纸：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）恒重的滤纸重（g）样品重（g）烘干后的坩埚+滤纸+残渣重 第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）平行样品ADF（%）重复性（相差或相对偏差%）样品ADF（%）项目六 饲料中粗脂肪含量的测定（残余法）一、实验目的通过饲料样品中粗脂肪的测定，掌握各类饲料样品中粗脂肪的测定原理和方法。二、测定原理饲料中脂类均可溶于乙醚，用

37、乙醚反复浸提，使溶于乙醚中的脂肪随乙醚流集于盛醚瓶中，乙醚蒸发后盛醚瓶增加的重量或者的失重即为粗脂肪量。由于提取的物质中，除脂肪外，还有有机酸、磷脂、固醇、脂溶性维生素，叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或醚浸出物（EE：ether extract）。三、仪器设备和试剂1、样品粉碎机；2、分样筛；孔径0.42mm（40目）；3、分析天平：感量0.0001g；4、电热恒温水浴锅，室温100；5、恒温烘箱；6、索氏脂肪浸提器：100或150ml；7、滤纸或滤纸筒：中速，脱脂；8、干燥器：用变色硅胶为干燥剂；9、乙醚：化学纯，无水乙醚。四、测定方法与步骤1、索式浸提器的准备：索式浸提器由三部分组成，下部

38、为盛醚瓶，中间为浸提管，上部为冷凝管。浸提器应洗净烘干，安装在水浴锅上，冷凝管上端加棉花塞，以防乙醚逸出。2、取样、包样和烘样：将脱脂滤纸叠成滤纸筒，滤纸筒的长度约为虹吸管的2/3，以全部浸泡于乙醚中为准。用铅笔在滤纸筒上编号。称取试样12g，准确至0.0002g，放于滤纸筒中包好，然后置入有编号的铝盒内，放入105烘箱中，烘干3h（除去水分，因乙醚难以渗入含水样品的组织内部；若用测完水分的样品则烘干1h即可）后取出，在干燥器中冷却至室温（30min，注意将盖子盖严），称重（记录数据）。再同样烘干lh，冷却，称重，直至两次称重之差小于0.002g。3、浸提：将烘干后包有样品的滤纸筒放入浸提管（

39、用镊子，每个浸提管可放入34包），加无水乙醚80100ml（浸泡一夜更利于浸提），在6075的水浴(用蒸馏水，否则盛醚瓶底出现水垢)上加热，开通冷凝水，使乙醚回流，控制乙醚回流次数为每小时约10-15次，共回流约50次(含油高的试样约70次)，是否浸提完全，用表玻璃接一滴浸提管流出的乙醚，挥发后不留下油迹即可。4、滤纸筒烘干及称重：脂肪浸提干净后取出滤纸筒，置于原铝盒，揭开盖子晾干2030min，然后放入105±2烘箱中烘干2h，干燥器中冷却30min，称重，再烘干30min,，同样冷却称重，两次称重之差小于0.001g为恒重（记录数据）。5、回收乙醚：继续蒸馏当乙醚积聚到虹吸管高度

40、的2/3时，取下盛醚瓶回收乙醚，直至乙醚全部收完。五、结果计算()式中：m风干样品重（g）； m1浸提后的已恒重的铝盒+滤纸筒+样品重（g）； m2浸提前己恒重的铝盒+滤纸筒+样品重（g）。每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。粗脂肪含量在10以上（含10）时，允许相对偏差为3；粗脂肪含量在10以下时，允许相对偏差为5。实验记录表样品名称： 编号： 分析时间：平行样品编号No.No.铝盒编号滤纸筒编号样品重（g）浸提前铝盒+滤纸筒+样品重：第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次称重（g） 第四次称重（g）浸提后铝盒+滤纸筒+样品重： 第一次称重（g） 第二次称重（g） 第三次

41、称重（g） 第四次称重（g）平行样品粗脂肪（%）重复性（相差%）样品粗脂肪（%）项目七  饲料中钙含量的测定 （高锰酸钾法）一、实验目的通过饲料样品中钙的测定，掌握钙的测定原理和方法。二、实验原理将试样中有机物破坏（本实验采用干灰化法，即采用测过灰分的灰分），使钙变成易溶于水的钙盐（本实验用盐酸溶解灰分，使钙成为CaCl2），钙盐与草酸铵作用生成白色草酸钙沉淀。然后用硫酸溶解草酸钙，再用高锰酸钾标准溶液滴定与钙结合的草酸根离子，根据高锰酸钾溶液的用量可间接测定钙的含量。反应式如下：CaCl2 +(NH4)2C2O4 = CaC2O4+ 2NH4ClCaC2O4 + H2SO

42、4 = CaSO4 + H2C2O45H2C2O4 + 2KMnO4 + 3H2SO4 = 2MnSO4 + K2SO4 + 8H2O + 10CO2三、仪器设备1、样品粉碎机；2、分样筛：孔径0.45mm（40目）；3、分析天平：感量0.0001g；4、电炉；普通，或电热板；5、坩埚：瓷质；6、容量瓶：100ml；7、滴定管：酸式，25或50ml；8、漏斗架：9、玻璃漏斗：6cm直径；10、定量滤纸：中速，79cm；11、移液管：10，20ml；12、洗瓶13、洗耳球14、玻璃棒15、量杯或量筒：10ml；20ml；50ml16、烧杯：250ml；17、滴定管：50ml；18、滴管；19、表

43、玻璃。四、试剂1、1:3盐酸溶液2、1:4氨水溶液3、1:100氨水溶液4、1:4醋酸溶液5、1:3硫酸溶液6、甲基红指示剂：0.1克溶于100ml95%的乙醇中7、4%草酸铵溶液8、0.1%硝酸银溶液9、0.05mol/L高锰酸钾标准溶液。0.05mol/L高锰酸钾标准溶液的配置：取高锰酸钾约1.6克,溶于1000ml水中，缓慢煮沸15分钟,冷却且静置12日，过滤后移至棕色玻璃瓶中，密塞，贴上标签在暗处放置以备标定。标定：称取经105烘干,并于干燥器中冷却至室温的基准试剂草酸钠1.675克， 放入烧杯加入50ml水加热溶解，移入500ml容量瓶，加水至刻度。混匀后用20ml移液管取3份，分别

44、放入150ml锥形瓶，然后加入1:3硫酸溶液4ml，加热至直到锥形瓶口有蒸气冒出 (约7580，不可超过85)，趁热用待标定的 KMnO4溶液进行滴定。开始滴定时，速度宜慢，在第一滴 KMnO4 溶液滴入后，不断摇动溶液，当紫红色褪去后再滴入第二滴。待溶液中有Mn2+产生后，反应速率加快，滴定速度也就可适当加快，但也决不可使KMnO4溶液连续流下，近终点时，应减慢滴定速度同时充分摇匀，滴定至溶液呈现粉红色，并保持30秒不褪色，即为终点.同时做空白.（当滴定终点时，溶液温度应不低于55）。计算：C（1/5KMnO4）=0.05×20/(V-V0)五、测定方法与步骤1、试样的分解液的制备

45、利用测完粗灰分的灰分进行，首先量取1:3热的盐酸5ml放入盛灰分的坩埚（用量杯量取），再滴加3滴浓硝酸，用玻璃棒轻轻搅动使灰分溶解，静置片刻，漏斗上放入滤纸一张叠好（无灰定量滤纸），漏斗下接入100ml容量瓶，将灰分溶液通过滤纸转移至容量瓶，反复洗涤坩埚及灰分残渣，洗液也收集入容量瓶中，至到用AgNO3溶液检查无Cl-为止（检查方法：在漏斗下用表玻璃接几滴滤液，加1滴AgNO3溶液，如无白色沉淀说明滤纸等已经冲洗干净），冷却至室温；用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液（妥善保存，做完钙后，测磷及别的元素时也用之）。2、沉淀草酸钙 准确移取试样分解液10ml于250ml烧杯中（用移液管），加蒸

46、馏水50ml（用量筒或量杯），加2滴甲基红指示剂（观察颜色变化），滴加1:4氨水溶液至溶液呈橙黄色，再加1:4醋酸溶液使溶液变粉红色（此时pH为2.53.0，酸度过大，则草酸钙生成不完全；酸度过小，如在中性或碱性溶液中形成沉淀的话，有可能是碱式草酸钙或氢氧化钙沉淀，使测定结果不准），置于电炉上小心煮沸，并慢慢滴加热的草酸铵溶液l0ml，不断搅拌使沉淀生成（如溶液变回橙黄色，应补滴醋酸溶液至粉红色）。放置过夜，使沉淀生成完全（或水浴上加热2h）。3、过滤和洗涤将沉淀完全的溶液用定量无灰滤纸过滤，用1:100的氨水溶液20ml洗涤沉淀，再以蒸馏水反复冲洗烧杯及沉淀，至无草酸根离子（表玻璃接滤液数滴

47、，加1滴AgNO3溶液无沉淀即可）。4、溶解与滴定将沉淀和滤纸转入原烧杯，加1:3硫酸溶液10ml和蒸馏水50ml，置于电炉上（或电热板）加热至7580（如何判断？大约在刚开始冒泡时），用0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定，溶液呈粉红色且半分钟不褪色为终点（该反应不需要加指示剂，因为高锰酸钾本身呈深紫色，在水中着色能力很强）（注意如何准确读数）5、空白滴定取一洁净250ml烧杯，加入和步骤3相同的滤纸一张，加1:3硫酸溶液10ml和蒸馏水50ml，置于电炉上（或电热板）加热至7580，用0.05mol/L高锰酸钾标准溶液滴定，溶液呈粉红色且半分钟不褪色为终点。六、结果计算每m1的lmol/

48、L高锰酸钾标准溶液相当于0.02g的Ca。因此， 式中：v2滴定样品时高锰酸钾标准溶液消耗量（m1）； v1滴定空白时高锰酸钾标准溶液消耗量(m1)； c高锰酸钾标准溶液的浓度(mol/L)； m一样品重（g）；（注：同灰分测定） v 试样分解液总体积（ml）； v 滴定时移取试样分解液体积（m1）； 0.02每ml 高锰酸钾标准溶液相当于Ca的克数； 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。含钙量1%以下时，允许相对偏差3%；含钙量1%5%时，允许相对偏差5%；含钙量1%以下时，允许相对偏差10%。七、注意事项1、过滤或洗涤沉淀时，勿使液面超过滤纸高的1/2，否则沉淀易

49、上移至滤纸边沿。2、草酸钙充分溶解后才能开始滴定。3、滴定时温度保持在7580，温度低，反应慢，温度高，易引起草酸分解。4、滴定时最初要慢，过快易使高锰酸钾在酸性溶液中出现分解反应（产生氧气）。5、测草酸钙沉淀是否完全的检查：沾取1-2滴烧杯中的澄清液于表玻璃，加一滴1%CaCl2溶液，若有白色沉淀出现，说明溶液里有多余的草酸根离子，从而证明沉淀的完全实验记录表样品名称： 编号： 分析时间：平行样品编号No.No.样品重（g）容量瓶编号灰分溶液定容容量（ml）测定时移取灰分溶液量（ml）：滴定样品时KMnO4消耗量（m1）滴定空白时KMnO4消耗量（m1）KMnO4标准溶液浓度(mol/L)平

50、行样品Ca（%）重复性（相对偏差%）样品Ca（%）项目八  饲料中总磷含量的测定 （钒钼黄比色法）一、实验目的通过饲料样品中磷的测定，掌握用钒钼黄比色法测定饲料样品中总磷含量的原理和方法。二、实验原理将试样中有机物破坏，使其中的磷变为游离状态，在酸性溶液中，磷与钒钼酸铵生成黄色的磷-钒-钼酸复合体【（NH4）3PO4·NH4VO3·16MoO3】，其颜色深浅与磷的含量成正比，在波长420nm下进行比色测定，即可求出样品中的磷含量。此法测得为总含磷量，其中包括动物难以吸收的植酸磷。化学反应式如下：H3PO4 + NH4VO3 + 16(NH4)2MoO4

51、+ 29HNO3 =（NH4）3PO4·NH4VO3·16MoO3 + 29NH4NO3 + 16H2O三、仪器设备1、样品粉碎机或研钵；2、分样筛：孔径0.45mm（40目）；3、分析天平：感量0.0001g；4、分光光度计：有10mm比色池，可在420nm下测吸光度；5、高温炉：电加热，可控制温度在550±20；6、坩埚：瓷质；7、容量瓶：50ml、100ml或1000ml；8、容量瓶或具塞比色管：50ml；9、移液管：10ml；10、洗耳球；11、洗瓶。四、试剂1、钒钼酸按显色剂：称取偏钒酸铵（分析纯）1.25g，加硝酸250ml。另取钼酸铵（分析纯）25g

52、，加蒸馏水400ml使之溶解，在冷却条件下将后者倒入前者，并加蒸馏水稀释至1000ml，摇匀备用。2、磷标准溶液：将磷酸二氢钾（分析纯）105烘干1h，干燥器冷却30min后，准确称取0.2195g溶于少量蒸馏水，无损的转入1000ml容量瓶，加浓硝酸3ml，然后以蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用。此溶液每ml含磷50g。五、测定方法与步骤1、试样的分解（同钙的测定，直接利用其试样分解液）2、标准曲线的绘制 准确移取磷标准溶液(50g/m1)0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，15.0ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml。用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min以上。以0ml溶液为参比，用10mm比色池，在420nm波长下，用分光光度计测各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。3、样品的测定 准确移取试样分解液25ml（含磷量50500g）于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色试剂10ml，按上述的方法显色和比色测定，测得试样分解液的吸光度。用标准曲线查得试样分解液的含磷量。六、结果计算式中：m一样品重（g）；（注