HPLC和LC—MS对唑草酮原药的检测方法比较

1、HPLC和LCMS对唑草酮原药的检测方法比较摘要：在对唑草酮进行残留分析试验的过程中，对其浓度的分析检测方法有很多。通过HPLC和LC-MS对唑草酮原药的检测比较，得到HPLC对唑草酮的LOD为0.011mg/L，LOQ为0.036mg/L；LC-MS对唑草酮的LOD为0.036ng/L，LOQ为2.04ng/L，且HPLC和LC-MS对唑草酮原药的检测方法都具有易操作、别离特性好的特点，但LC-MS的检出限比HPLC低，推荐LC-MS适合用来分析唑草酮含量较低的样品，而HPLC适合用来分析唑草酮含量较高的样品。关键词：唑草酮；HPLC；LC-MS中图分类号：O657文献标志码：A文章编号：1

2、003-935X202104-0048-08KH+7mmDComparisonofDetectionMethodsofCarfentrazoneJZEthylbyHPLCandLC-MSKH+7mmDWT5BZJZNIETianying，CHENHongshen，LINShaoxia，YANGHongboWT5BZ1.GuizhouAcademyofTestingandAnalysis，Guiyang550002，China；2.CollegeofLifeSciences，GuizhouUniversity，Guiyang550025，ChinaJZKH+7mmDWT5HZAbstract：W

3、T5BZTherearemanymethodsfordeterminingthecarfentrazone-ethylconcentrationaspartofresidueanalyses.Thedetectionofcarfentrazone-ethylbyHPLCandLC-MSwascompared.TheLODandLOQbyHPLCwere0.011mg/Land0.036mg/L，respectively.TheLODandLOQbyLC-MSwere0.036ng/Land2.04ng/L，respectively.BoththeHPLCandLC-MSdetectionmet

4、hodsforcarfentrazone-ethylareeasytooperate.ThecharacteristicsofseparationpropertiesaregoodbutthedetectionlimitofLC-MSislowerthanthatofHPLC.LC-MSissuitablefortheanalysisofsamplescontaininglowconcentrationsofcarfentrazone-ethylandHPLCforthosehavinhighcontentsamplesoftheherbicide.唑酮草酯属原卟啉原氧化酶抑制剂，即通过抑制叶

5、绿素生物合成过程中原卟啉原氧化酶而引起细胞膜破坏，使叶片迅速枯槁、死亡，适用于小麦、大麦、燕麦、水稻、玉米、大豆、柑橘、咖啡、棉花、高粱、葡萄園、草坪等田块除草【1】。目前有关唑草酮在水稻、小麦及甘蔗中的残留分析方法相继出现2-11。提取的唑草酮经过了石油醚萃取，弗罗里硅土柱净化后，乙酸乙酯洗脱，正己烷定容后采用气相色谱检测【3】。建立的分析方法虽能满足试验需要，但在实际操作过程中较为繁琐，且在分析唑草酮含量较低样品时检出限有时候往往达不到。本试验通过对高效液相色谱仪AgilentHPLC1220和液相色谱质谱连用仪Agilent1260-6410B，具有ESI离子源；Masshunter色谱

6、数据处理机或色谱工作站所建立的唑草酮分析方法的比较，丰富和优化了唑草酮分析方法，以期为后续开展唑草酮检测分析试验提供参考。1用HPLC建立的唑草酮检测分析方法1.1试验方法1.1.1方法提要试样用水溶解，以乙腈+水含0.1%磷酸为流动相，用AgilentExtend-C18柱和VWD检测器，用外标法定量。1.1.2试剂和溶液乙腈色谱纯，MerckKGaA，批号：JA028530；磷酸分析纯，天津市富宇精细化工，批号：20210908；超纯水电阻率：18.25M/cm；盐酸分析纯，成都市科龙化工试剂厂，批号：20210311；唑草酮标准品质量分数，99.5%，Dr.EhrenstorferGmb

7、h，批号：21211。1.1.3仪器高效液相色谱仪：AgilentHPLC1220；色谱数据处理机或色谱工作站；微量进样器：100L；pH计：FE20。1.1.4液相色谱操作条件色谱柱：AgilentExtend-C18柱；250mm×4.60mmi.d.，5m；进样体积：20L；流速：0.8mL/min；流动相：01%磷酸水溶液-乙腈，体积比12KG-*388；柱温：30；检测波长：245nm；运行时间：7min。1.1.5方法选择性用上述分析方法测定95%唑草酮原药，试验结果唑草酮保存时间为3.940min，唑草酮与杂质峰间的别离度为8.53，大于1.5，方法对测定试验溶液中唑草

8、酮具有特定选择性图1。1.1.6测定在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标准曲线中间点的标样溶液，直至相邻两针唑草酮峰面积的相对变化小于1.2%后，进行测定。1.2方法验证1.2.1线性相关性试验称取唑草酮标样0.01003g置于25mL容量瓶中，用乙腈并稀释至刻度，得到浓度为400mg/L的唑草酮标准储藏液。将标准储藏液用乙腈稀释，得到浓度为10mg/L的唑草酮标准溶液。用上述浓度为10mg/L的唑草酮标准溶液，用乙腈稀释，得到唑草酮浓度为0.10、0.20、0.50、1.00、2.00mg/L的系列标样溶液。按“1.1.4节的色谱操作条件进行分析，以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵

9、坐标绘制标准曲线，得到唑草酮线性方程为y=3397x+1.07，其线性相关系数为0.9998，线性相关性的测定结果见表1和图2、图3。1.2.2重复性试验取“1.2.1节配制的浓度为0.2mg/L的唑草酮标准溶液，按“1.1.4节的色谱操作条件进行精密度试验测试，结果见表2和图4。1.2.3检出限和定量限取“1.2.1节配制的浓度为0.1mg/L的唑草酮标准溶液，按“1.1.4节的色谱操作条件重复测定6次，S/N3和S/N10时溶液浓度为该方法的检出限和定量限。试验结果说明，所建立的方法对唑草酮LOD为0.011mg/L，LOQ为0.036mg/L。详细结果见表3。2.1试验方法2.1.1方法

10、提要试样用水溶解，使用Agilent1260-6410BLC/MS/MS测定，以水含0.1%甲酸溶液+乙腈为流动相，AgilentXDB-C18柱和MSD检测器，对试样中的唑草酮进行测定，外标法定量。2.1.2试剂和溶液乙腈：色谱纯MerckKGaA，批号：JA028530；甲酸：色谱纯天津市科密欧化学试剂，批号：20210424；超纯水：电阻率，18.25M/cm；唑草酮标样：质量分数，=99.5%，批号：21211。2.1.3仪器液相色谱质谱连用仪：Agilent1260-6410B，具有ESI离子源；Masshunter色谱数据处理机或色谱工作站；色谱柱：AgilentXDB-C18柱；

11、50mm×4.60mmi.d.，1.8m；微量进样器：100L。2.1.4仪器操作条件HPLC操作条件进样体积：20L；流速：0.3mL/min；柱温：35；流动相：25%水含0.1%甲酸溶液+75%乙腈体积比；保存时间：唑草酮3.32min。MSD操作条件离子源：ESI源，正离子模式；离子源参数：枯燥气体，N2；气体温度，300；气体流速，8L/min；Nebulizer，40psi；Capillary，4000V；监测模式：MRM；监测离子参数见表4、图7。2.1.5方法选择性建立上述分析方法测定95%唑草酮原药，试验结果说明，试样中唑草酮保存时间为3

12、.32min，目标峰可实现基线别离，不存在其他杂质干扰现象。2.1.6测定在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标准曲线中间点的标样溶液，直至相邻两针唑草酮标样峰面积的相对变化小于2%后，进行测定。2.2方法验证2.2.1线性相关性试验称取唑草酮标样=99.5%0.01003g，置于25.00mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，得到浓度为400mg/L的唑草酮标准储藏液。将标准储藏液用乙腈稀释，得到浓度为10mg/L的唑草酮标准溶液。将上述浓度为10mg/L的唑草酮标准溶液用乙腈稀释，吸取适当该储藏液配制成梯度系列标准溶液，按“2.1.4节仪器操作条件进行分析，以唑草酮浓度为横坐标，峰

13、面积为纵坐标绘制标准曲线，得到唑草酮线性方程为y=14.79x+18.55，其线性相关系数为0.9998，线性相关性的测定结果见表5和图7、图8。2.2.2重复性试验取“2.2.1节配制的浓度为50ng/mL的唑草酮标准溶液，按“2.1.4节仪器操作条件连续测试6次，计算相对标准偏差，验证方法的精密度，结果见表6和图9。2.2.3检出限和定量限取“2.2.1节配制的浓度为50ng/mL的唑草酮标准溶液，按“2.1.4节色谱操作条件重复测定6次，根据S/N值计算出LOD和LOQ值，试验结果说明，所建立的方法对唑草酮LOD为0.63ng/mL，LOQ为2.04ng/mL表7、图10。3结论JP本试

14、验用AgilentHPLC1220和Agilent1260-6410B建立了唑草酮原药的2种分析方法，2种方法相比较有以下特点：1用HPLC建立的分析方JP+1法测定95%唑草酮原药，保存时间为3.940min，唑草酮与杂质峰间的别离度为8.53，大于1.5，线性方程为y=33.97x+1.07，其线性相关系数为09998；用LC-MS建立的分析方法测定95%唑草酮原药，保存时间为3.32min，目标峰可实现基线别离，不存在其他杂质干扰现象。且相邻两针唑草酮标样峰面积的相对变化小于2%，线性方程为y=14.79x+18.55，其线性相关系数为0.9998，且2种分析方法操作起来都较简单。22种

15、分析方法相比照而言，用LC-MS建立的分析方法检出限0.036ng/L要比HPLC建立的分析方法檢出限0.011mg/L低106个数量级，且LC-MS的定量限2.04ng/L也比HPLC的定量限0.036mg/低106个数量级。在具体试验过程中，遇到唑草酮含量较低的样品，推荐用本试验建立的LC-MS分析方法来分析低浓度ng/L的唑草酮样品。HS+7mmHT8.5H参考文献：【1】胡耐冬，刘长令.新型三唑啉酮类除草剂唑酮草酯J.精细与专用化学品，2021，1114：21-24.【2】张志勇，王冬兰，吴长付，等.唑草酮在水稻和稻田中的气相色谱检测J.江苏农業学报，2021，271：195-198.

16、HTHJ【3】张夏力，刘新刚，路彩红，等.气相色谱-串联质谱方法测定小麦中唑草酮的残留及消解动态J.植物保护，2021，381：115-119.【4】杨玉霞，莫仁甫，王天顺，等.毛细管气相色谱法测定唑草酮在甘蔗及其土壤中的残留量J.西南农业学报，2021，246：2230-2233.【5】胡西洲，程运斌，胡定金.农药多残留分析中QuEchERS方法介绍J.现代农药，2021，54：24-29，44.【6】曹新梅，仲苏林，吴建兰，等.唑草酮20%微囊悬浮剂高效液相色谱分析方法J.农药科学与管理，2021，315：38-40.【7】吴进龙，张志一，单炜力，等.唑草酮原药高效液相色谱分析方法研究J.农药科学与管理，2021，292：9-12.8USPofficial.USPproposesrevisionofgeneralchapterValidationofcompendialprocedures：AddingasectiononLifeCycleManagementS/OL.2021-12-01.2021-08-20. ：/JP2 /gmp-ne