综合项目一--不同蔬菜水果中基本营养成分分析

1、综合项目一不同蔬菜水果中基本营养成分分析实验一总糖含量的测定（3,5- 二硝基水杨酸法）一、实验目的1、掌握总糖的测定原理。2、学习用比色法测定还原糖的方法。二、实验原理三、实验试剂1、2mol/L 氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至 50mL。2、3,5- 二硝基水杨酸试剂：称取0.325g 3,5- 二硝基水杨酸溶于15mL热蒸馏水中，溶解后移入50ml 容量瓶中，加入 2mol/L 氢氧化钠溶液 16.25mL，再加入 2.25ml 丙三醇，摇匀，冷却后定容至50mL。3、2mg/mL葡萄糖标准溶液：称取0.04g 葡萄糖，加少量的蒸馏水溶解后，定容至 20m

2、L。4、6mol/L 盐酸：取 25mL浓盐酸用蒸馏水稀释至50mL。5、6mol/L 氢氧化钠：称取12g 氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的制作取 6 支试管，按下表加入2mg/mL葡萄糖标准溶液和蒸馏水：管号2mg/mL葡萄糖蒸馏水 /mL葡萄糖浓度OD标准溶液 /mL540mg/mL101020.20.80.430.40.60.840.60.41.250.80.21.66102在上述试管中分别加入 3,5- 二硝基水杨酸试剂 2mL，摇匀后于沸水浴中加入 2min 进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水 9mL，摇匀，在 540nm

3、 波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（ mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，得出回归方程。2、总糖的提取称取 1g 实验材料（如新鲜果蔬），充分研磨后， 放在锥形瓶中， 加入 6mol/L 盐酸 10mL，蒸馏水 15mL，在沸水浴中加热 30min。水解完毕后，冷却至室温后，加入 8mL 6mol/L 氢氧化钠，最终用蒸馏水定容至 50mL，此为总糖水解液，用于总糖测定。3、总糖含量的测定取 4 支试管，按下表加入不同溶液：总糖水解液3,5- 二硝基管号蒸馏水 /mL水杨酸试剂OD/mL540/mL1102201230124012加完试剂后，摇匀后于沸水浴中加入2min

4、 进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9mL，摇匀，在 540nm波长处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收值平均值在标准曲线上查出相应的糖含量（mg/mL）。4、计算总糖的百分含量总糖 =（C×V / m × 1000）×稀释倍数× 0.9 × 100%式中 ,C 为总糖提取液的浓度mg/mL；V 为总糖提取液的总体积mL；m为样品质量 g五、实验结果1、葡萄糖标准曲线的绘制（ 1）光吸收值测得结果管号2mg/mL葡萄糖蒸馏水 /mL葡萄糖浓度OD540标准溶液 /mLmg/mL101020.20.80.430.40.60.840.

5、60.41.250.80.21.66102（ 2）葡萄糖标准曲线图：（ 3）回归方程为：2、样品总糖含量的测定（ 1）材料 _总糖含量的测定总糖水解液3,5- 二硝基管号蒸馏水 /mL水杨酸试剂OD/mL540/mL1102201230124012样品的光吸收值平均值为。根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为_。请说明具体计算过程：从而得出样品 _总糖的百分含量为 _。请说明具体计算过程：（ 2）材料 _总糖含量的测定总糖水解液3,5- 二硝基管号蒸馏水 /mL水杨酸试剂OD/mL540/mL1102201230124012样品的光吸收值平均值为。根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为_。

6、请说明具体计算过程：从而得出样品 _总糖的百分含量为 _。请说明具体计算过程：（ 3）材料 _总糖含量的测定总糖水解液3,5- 二硝基管号蒸馏水 /mL水杨酸试剂OD/mL540/mL1102201230124012样品的光吸收值平均值为。根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为_。请说明具体计算过程：从而得出样品 _总糖的百分含量为 _。请说明具体计算过程：3、对比分析不同样品总糖含量。实验二蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝法）一、实验目的1、学习用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的基本原理与方法。2、了解考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的优缺点。二、实验原理三、实验试剂1、0.15mol/L 氯化钠溶液：

7、称取0.2633g 氯化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至 30mL。2、0.1mg/mL牛血清白蛋白标准溶液：（1）母液：称取 0.01g 牛血清白蛋白溶于10mL 0.15mol/L 氯化钠溶液中，配成浓度为 1mg/mL的溶液。（2）标准液：取母液1mL，用 0.15mol/L氯化钠溶液定容至10mL，配成0.1mg/mL 的牛血清白蛋白标准溶液。3、考马斯亮蓝 G-250 试剂：称取 0.005g 考马斯亮蓝 G-250 溶于 2.5mL 95% 乙醇，加蒸馏水 40mL，加 5mL 85%磷酸，最后加蒸馏水定容至 50mL。四、实验步骤1、绘制标准曲线取 6 支试管，按下表加入各种试剂

8、。试剂加完后混匀，室温静置 3min，以 1 号管为空白调零，在 595nm处测定其吸光值。以蛋白质含量（ mg/mL）为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制蛋白质含量标准曲线，得出回归方程。试剂 /mL管号1234560.1mg/mL 牛血清白蛋白标准溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L 氯化钠溶液1.00.80.60.40.20考马斯亮蓝 G-250 试剂555555蛋白质浓度（ ug/mL）020406080100OD5952、总蛋白的提取称取 1g 实验材料（如新鲜果蔬），加 5mL蒸馏水研磨， 过滤后将滤液用蒸馏水定容至 10mL。3、总蛋白测定取 3 支试管，分别加

9、 0.1mL 未知浓度的蛋白质样品液， 加 0.9mL 0.15mol/L氯化钠溶液，再加入 5mL考马斯亮蓝 G-250 试剂，摇匀，室温静置 3min，以 1 号管为空白管调零， 在 595nm处测其吸光值。 测定后，取样品的光吸收值平均值在标准曲线上查出相应的蛋白浓度（ ug/mL）。4、蛋白质含量（ mg/g）蛋白质含量（ mg/g）=（C×VT） / （ 1000× VS×WF）式中， C 为蛋白质提取液的浓度ug/mL；VT 为提取液总体积mL；VS为测定时加样量 mL；WF为样品鲜重 g。五、实验结果1、牛血清白蛋白标准曲线的绘制（ 1）光吸收值测得

10、结果试剂 /mL管号1234560.1mg/mL 牛血清白蛋白标准溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L 氯化钠溶液1.00.80.60.40.20考马斯亮蓝 G-250 试剂555555蛋白质浓度（ ug/mL）020406080100OD595（ 2）标准曲线图：（ 3）回归方程为：2、样品蛋白质含量的测定（ 1 ）样品 _的光吸收值分别为 _、 _、_，其平均值为 _。根据标准曲线的回归方程计算得出蛋白质浓度为_。请说明具体计算过程：从而得出样品 _蛋白质的含量为 _。请说明具体计算过程：（ 2 ）样品 _的光吸收值分别为 _、 _、_，其平均值为 _。根据标准曲线的回归

11、方程计算得出蛋白质浓度为_。请说明具体计算过程：从而得出样品 _蛋白质的含量为 _。请说明具体计算过程：（ 3 ）样品 _的光吸收值分别为 _、 _、_，其平均值为 _。根据标准曲线的回归方程计算得出蛋白质浓度为_。请说明具体计算过程：从而得出样品 _蛋白质的含量为 _。请说明具体计算过程：3、对比分析不同样品蛋白质含量。实验三维生素 C含量的测定（ 2,6- 二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的1、学习并掌握 2,6- 二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理与方法。2、了解水果与蔬菜中维生素C 的含量情况。二、实验原理三、实验试剂1、2%草酸：称取1g 草酸，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。2、

12、1%草酸：称取0.5g草酸，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。3、0.1mg/mL标准抗坏血酸溶液： 称取 0.0025g 抗坏血酸溶于少量1%草酸溶液中，最终加 1%草酸定容至 25mL。用棕色试剂瓶保存于4。最好临用前配制。4、0.05% 2,6- 二氯酚靛酚溶液：称取0.025g 2,6-二氯酚靛酚溶于 15mL含有 0.0052g 碳酸氢钠的热水中，冷却后加水定容至 50mL。滤去不溶物，用棕色试剂瓶保存于 4。约可保存 1 周。四、实验步骤1、样品的制备称取 10g 实验材料（如新鲜果蔬） ，加入 5-10mL 2%草酸，研磨成浆状，过滤后，将滤液定容至 25mL。2、标准液滴定

13、准确吸取标准抗坏血酸溶液 1mL置于 50mL锥形瓶中，加 9mL1%草酸，以 0.05% 2,6- 二氯酚靛酚溶液滴定至淡粉色， 并保持 15s 不褪色，即达到终点；取 10mL1% 草酸作空白对照， 按以上方法滴定。 记录所用染料溶液的体积 （mL），计算出 1mL 染料溶液所能氧化抗坏血酸的量（ mg）。3、样品滴定准备吸取样品滤液2 份，每份为 10mL，分别放入 2 个锥形瓶内，另取 10mL1%草酸作空白对照滴定；按上面的操作滴定并记录所用染料溶液的体积（mL）。4、维生素 C 含量的计算取 2 份样品滴定所用染料体积平均值，代入下列公式中计算100g 样品还原型抗坏血酸含量。维生

14、素 C含量（ mg/100g 样品） =（VA-VB）× C×T×100/ （ D ×W）式中， VA为滴定样品所好用的染料的平均用量mL；VB为滴定空白对照所用的染料的平均用量mL；C 为样品提取液的总体积mL；D为滴定时所取的样品提取液体积 mL；T 为 1mL染料能氧化抗坏血酸质量mg（由操作 2 计算出）； W为待测样品的质量 g。五、实验结果1、标准抗坏血酸溶液滴定时，所用染料溶液的体积为 _，从而计算出1mL染料溶液所能氧化抗坏血酸的量为_。2、样品维生素 C 含量的测定（ 1）样品 _滴定时所用染料溶液的体积分别为_和_。其平均用量为 _。

15、则样品维生素 C 含量为 _。请说明具体计算过程。（ 2）样品 _滴定时所用染料溶液的体积分别为 _和_。其平均用量为 _。则样品维生素 C 含量为 _。请说明具体计算过程。（ 3）样品 _滴定时所用染料溶液的体积分别为 _和_。其平均用量为 _。则样品维生素 C 含量为 _。请说明具体计算过程。3、对比分析不同样品维生素C 含量。实验四纤维素含量的测定（比色法）一、实验目的1、学习并掌握比色法测定纤维素的原理与方法。2、了解水果与蔬菜中纤维素的含量情况。二、实验原理三、实验试剂1、60%硫酸：量取 30mL浓硫酸，缓慢倒入15mL蒸馏水中，最终加水定容至50mL。2、浓硫酸3、2%蒽酮试剂：

16、将 1g 蒽酮溶解于 50mL乙酸乙酯中， 存放在棕色试剂瓶中。4、100ug/mL纤维素标准液：（1）母液：称取 25mg纤维素，放入烧杯中，将烧杯放入冰浴中，然后加冷的 60%硫酸 15-17mL，在冷的条件下消化处理 20-30min ，用 60%硫酸定容至 25mL。（2）吸取母液 5mL放入另一个容量瓶中，将容量瓶放入冰浴中，加蒸馏水定容至 50mL。四、实验步骤1、纤维素标准曲线的绘制取 6 支试管，按下表加入不同试剂：试剂 / mL管号123456100ug/ mL纤维素标准液00.40.81.21.62蒸馏水21.61.20.80.40纤维素含量 ug/ mL020406080

17、100OD620将各管摇匀后，向每管加入0.5mL 2%蒽酮，再沿管壁加入5mL浓硫酸，缓慢摇匀后，静置1min。然后在 620nm下，测得不同含量纤维素溶液的吸光值。以测得的吸光值为Y 值，以对应的纤维素含量为x 值，绘制标准曲线， 得出回归方程。2、样品纤维素含量的测定（1）称取 1g 实验材料（如新鲜果蔬）置于烧杯中，将烧杯置于冷水浴中，加入 60%硫酸 15mL，并消化 30min，然后将消化好的纤维素溶液转入25mL容量瓶中，并用 60%硫酸定容至 25mL。然后用布氏漏斗过滤于另一个烧杯中。（2）取上述溶液 2mL于试管中，加入0.5mL 2%蒽酮试剂，并沿管壁加5mL浓硫酸，缓慢摇匀后，静置12min，然后在 620nm波长下测定光吸收值。3、纤维素百分含量纤维素百分含量 =（ X× 10-6 ×a / W ）× 100%式中， X 为按按回归方程计算出的纤维素含量ug；W为样品重量 g；10-6 为微克换算成克的系数； a 为样品稀释倍数。五、实验结果1、纤维素标准曲线的绘制（ 1）光吸收值测得结果试剂 / mL管号123456100ug/ mL纤维素标准液00.40.81.21.62蒸馏水21.61.20.80.40纤维素含量 ug/ mL02040