细胞培养2PPT学习教案

1、会计学119071907年年 Ross Harrison Ross Harrison （美国）（美国）将蛙胚神经管区的一片组织移植到蛙的淋巴液凝块中，将蛙胚神经管区的一片组织移植到蛙的淋巴液凝块中，这些组织在体外不但存活若干周，而且居然从细胞这些组织在体外不但存活若干周，而且居然从细胞中长出了轴突（神经细胞）。中长出了轴突（神经细胞）。意义：公认的组织培养开始标志；意义：公认的组织培养开始标志；解决了轴突发生的争论；解决了轴突发生的争论；培养方法将培养物放在盖玻片上并培养方法将培养物放在盖玻片上并倒置于凹玻片腔中培养。倒置于凹玻片腔中培养。第1页/共45页 1923 Alexis Carrel

2、 (surgeon)Aseptic techniquesCarrel Flask1912-1946Culture Chicken Embryo FibroblastPlasma+tissue homogenate在没有抗生素的条件下，使鸡胚心脏细胞维持生存在没有抗生素的条件下，使鸡胚心脏细胞维持生存34年，先后传代年，先后传代3400次。次。第2页/共45页19341934年年 荷兰温特荷兰温特 发现生长素，并证实了对植物细胞发现生长素，并证实了对植物细胞 培养的作用培养的作用19371937年年 高特里特高特里特, ,诺比考特诺比考特( (法法) ) 几乎同时离体培养几乎同时离体培养 了胡萝

3、卜组织，并使细胞增殖了胡萝卜组织，并使细胞增殖19401940年年 Earle Earle 建立了可无限传代的建立了可无限传代的C3HC3H小鼠的结缔组小鼠的结缔组 织细胞系织细胞系L L系（曾在体外经甲基胆蒽系（曾在体外经甲基胆蒽 转化）。转化）。19511951年年 Gay Gay 建立了人第一个细胞系人体宫颈癌建立了人第一个细胞系人体宫颈癌 HelaHela细胞系（原报道为鳞癌，细胞系（原报道为鳞癌，19711971年更年更 正为腺癌）。正为腺癌）。第3页/共45页5第4页/共45页6无机分子：水（结合水，游离水）无机分子：水（结合水，游离水） 无机离子（无机离子（NaNa+ +,K,K

4、+ +,Ca,Ca2+2+,Mg,Mg2+2+) )第5页/共45页7第6页/共45页8微丝微丝(microfilament,MF)中等纤维中等纤维(intermediate filament,IF)微管微管(microtubule,MT)第7页/共45页9第8页/共45页培养细胞的生物学特征培养细胞的生物学特征1.贴壁型细胞贴壁型细胞2.悬浮型细胞悬浮型细胞上皮细胞型上皮细胞型成纤维细胞型成纤维细胞型游走细胞型游走细胞型多形性细胞多形性细胞第9页/共45页112.接触抑制接触抑制3.密度抑制密度抑制第10页/共45页12第11页/共45页13第12页/共45页14三个生长阶段：三个生长阶段：

5、 原代培养期原代培养期从体内取出组织接种培养到第一次传代的从体内取出组织接种培养到第一次传代的 阶段，一般维持阶段，一般维持14周。周。 传代期传代期 衰退期衰退期第13页/共45页15第14页/共45页16第15页/共45页17第16页/共45页18 正常细胞会因为细胞接触而发生相正常细胞会因为细胞接触而发生相互抑制分裂和限制运动的现象。互抑制分裂和限制运动的现象。对数生长期对数生长期最具活力时期（细胞分裂旺盛，分最具活力时期（细胞分裂旺盛，分 裂相增多。）裂相增多。） 细胞分裂指数细胞分裂指数(mitotic index(mitotic index，MI)MI) MI MI( (分裂相个数

6、分裂相个数10001000个细胞个细胞) )100100 第17页/共45页19 新分裂细胞数新分裂细胞数= =死亡细胞数死亡细胞数 （稳定期）（稳定期）注：细胞代谢活动仍在进行中注：细胞代谢活动仍在进行中第18页/共45页20第19页/共45页21第20页/共45页22第21页/共45页23第22页/共45页24v成分：成分： 无机盐无机盐 葡萄糖葡萄糖 v作用：作用： 维持渗透压，调节维持渗透压，调节pHpH， 供给能量和无机离子供给能量和无机离子第23页/共45页25第24页/共45页26第25页/共45页27第26页/共45页28终浓度：终浓度：0.1% 0.5% 常以常以DMEM/F

7、12培养液配制培养液配制过滤除菌过滤除菌-20 保存保存第27页/共45页29第28页/共45页30第29页/共45页31第30页/共45页32促生长因子及激素促生长因子及激素 pH渗透压渗透压第31页/共45页33第32页/共45页34第33页/共45页35第34页/共45页36第35页/共45页37v 取材过程有可能带入支原体、病毒，对培养的细胞取材过程有可能带入支原体、病毒，对培养的细胞 产生潜在影响，可能导致实验失败或实验产生潜在影响，可能导致实验失败或实验 结果的不结果的不 可靠性可靠性v 每批血清之间都有差别，其成分不能保持一致每批血清之间都有差别，其成分不能保持一致v 血清中含有一些物质对细胞会产生毒性作用血清中含有一些物质对细胞会产生毒性作用第36页/共45页38第37页/共45页39第38页/共45页40v19511951年年,EarleEarle,EarleEarle基础合成培养基基础合成培养基MEMMEM (minimum essential media) (minimum essential media)第39页/共45页41第40页/共45页42第41页/共45页43HamF12 1