双荧光素酶报告基因检测系统-promega

1、Dual-Luciferase ? Reporter Assay试剂准备Luciferase Assay Buffer II10mlLuciferase Assay Substrate1vialStop & Glo? Buffer10mlStop & Glo? Substrate, 50X200ulPassive Lysis Buffer （PLB）, 5X30ml1. 1X PLB:力口 1 体积的 5X Passive Lysis Buffer （PLB）至厚体积的 dH0中，40C保存（一个月）。2. LARII ：将Luciferase Assay Substrate

2、重悬于 10ml Luciferase Assay Buffer II 中（-200C保存1个月，-700C保存1年）。3. 1X Stop & Glo 试剂：1 体积 50X Stop & Glo ? Substrate 加入49#积的 Stop & Glo? Buffer中（-200C保存15天）。（每次试验需要100ul）细胞处理1 .吸除细胞培养液2 . 1X PBSK柔的冲洗细胞3 .加入1X PLB （推荐用量）Volumes of 1XPLB to Use in Step 3.Passive LysisAtlive LysWPlate Size1XPLBD

3、ish/Plate Size1XPLB6-wel500M100 x 200mnn1ml12-well250pl60 x 15mmop i24-well100pl35 x 12mm20Qpl48-well65pl6-well250/96-well20ul12-well100pl4 .细胞溶解室温条件下，轻摇细胞15min,Cell LysiBar-wih ned.ahoni ttlli Rlrras 削Oi IX PBS.A£fct1KFLBMiami I口区Tl日阂man叫hibe or 将I *Kssay with Manual or Single-Injector Lumlnom

4、eter0L7 PredispenseI / lOOpI d LAR II into luranonelH tut»Plate iin<20pl a PlB Lysite>eiiDiswcselOOplol LARIIJteasuie lliefly luciMase activity.Dispense lOOpI X Stop & GIO®Meaajre H夕加 luciferase activity.Progran kjrninomeler_ Transler 20ql of PLBI ( Lysale. MixMeasure llrefly luc

5、iferase adiviy.Dispense 100/olStep AGIos 而轲Repeal cycle tor ranahlng wels inplateSDual-Luciferase® Reporter Assay andDual-Luciferase® ReporterlOOO Assay SystemsNSTRUCTIM6FOR 收Of PROOUCTS(1910 Et9®ANDtlWDual Luciferase与 and Dual-Luciferasee1000 Assay ProtocolsAssay with 06-Well PlateBe

6、fore you b网iirm<ry$ 1 ar(1210 dispv HlOpI otLAR II aid Stop & Gioe Reagent, restkeiy.Foe (neasuremenls. useal-lo 2-$econd delay anda5- to 10-second read time.(inside lumnometer)Additidial ptotoool inromkxi Is ivaiiabit In lectrfcal Manual 4TMM0 aailatle online at瞬时转染和报告基因实验采用脂质体介导技术转染。重组质粒分别为

7、p-629/+100 ， p-401/+100 ，p-238/+100 ， p-80/+100 ， p-25/+100 。 pGL3- basic 为阴性对照; 同时以转染phRL-tk（ 海肾荧光素酶） 作内对照。具体转染方法参照转染（PolifectamineReaent） 说明书进行。1. 将质粒DNA（3.2闻）与phRL-tk （0.8 闻）按1:4混合后为A液，混匀30s, PolyFect（QIAGEN）与无血清无抗生素的DME腋1:50混匀后为B液，混匀30s;2. A+B混匀（B加入A）15s,室温下孵育5-10 min;3. 吸出六孔板中的培养液，用无血清无抗生素的DMEMc 3遍，然后加入AB混合液，每孔0.8mL;4. 6h后，加入2mL完全DMEM;5. 24h 后，倒出旧培养液，换为完全DMEM;6. 100闻 HQ或 B（a）P 处理 lh 或 24h; （200 pMMMS24h-溶解于 MeSO, Sigma）; （HQ不引起OGG升高）7. 采用Promega公司