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文档简介

1、SDS-PAGE电泳具体步骤SDS电泳具体步骤一、清洗玻璃板1、洗洁精轻轻擦洗2、自来水冲3、蒸馏水冲4、筐里晾干5、梳子用水洗二、配胶材料 : 玻璃板、梳子、架子、枪(100-1000 、20-200 、 2-20) 、DDW、30%Arc-Bis 、 Tris(pH8.8)、Tris(pH6.8)、10%SDS、10%AP、 TEMED。1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧2、配分离胶3、加入玻璃板中4、加入乙醇 1ml等待 ,.5 小时5、用注射器吸出乙醇，6、用水冲洗分离胶3 次，第 4 次最后 ( 加入 AP、TEMED前) 再用注射器吸出7、配浓缩胶8、将玻璃板加满9、放入小梳子等待 ,.

2、5 小时三、上样材料 : 蛋白、 marker 、针筒、电泳槽、电泳液、枪(2-20ul) 1、把玻璃板取下，放入小架子，固定于电泳槽( 大玻璃板朝外 ) ，拔梳子， ( 若只有一块胶，对面用塑料板 )2、将小架子加满电泳液，标记位置，用针筒抽电泳液通膜3 、根据要求上样蛋白 ( 如海马 ) ，最外侧加马克，用2-20ul枪 四、电泳1、放入电泳盒中，盒中加少量电泳液，放上盖子2、开电泳机电压先60V，马克到达分离胶后调制110V，等待约2 小时 五、转膜材料 :6张滤纸、 1 张 PVDF膜 ( 根据分离胶剪，无水甲醇中浸泡1min2min) 、转膜夹、转膜缓冲液1、取胶，将浓缩胶轻轻刮去，

3、去掉多余的分离胶，2 、将裁好的胶、浸过甲醇的 PVDF膜和滤纸放入转膜缓冲液中，10min 左右，3、黑色板在下面，纸胶膜纸( 注意赶走气泡 ) 4 、转膜夹放入电泳槽，放满转膜缓冲液，外面放冰块，加满水等待 120 分钟，电压 100V六、免疫反应材料 : 丽春红、 TBST、5%牛奶、一抗、二抗1、取出一小盒，加入少量丽春红，( 用完回收 )2、把膜取出，扔掉胶，依次放丽春红 TBST， ( 摇床上 ) 3 、膜剪成小条带，放入方格盒，放入 TBST(摇床 ) ，几分钟后放入 5%牛奶中封闭抗原(摇床)等待 1小时4、配一抗 : 配 5%的牛奶 (5g 牛奶，加 TBST至 100ml) ，将抗体放入牛奶中。5、包一抗 : 将膜放入盛有抗体的5%的牛奶中，摇床上1 小时 6 、4?冰箱中过夜7、第 2 天，取出膜， TBST中洗， 10 分钟 X3 次8、加入二抗，封膜，摇床上，1.5 2h七、化学发光准备材料 : 黄色枪头、 20-200ul 枪、剪刀、镊子、保鲜膜、板、solution、reagent 、小盒中的膜1、 取出膜， TBST中洗， 10 分钟 X3 次2、膜放入盒中3、加 solution、reagent 至膜上， (A:B=1:1 ，约 60ul) 4 、膜放入保鲜膜上包好5

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