伊文思蓝(EB)检测血脑屏障(BBB)通透性_第1页
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文档简介

1、1、测定血脑屏障完整性原理时间：2021.03.07创作：欧阳德伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂,因其分 子量大小与血浆白蛋白相近，而且在血液中与血浆 白蛋白有很高的亲和力，由于正常状态下血浆白蛋 白无法透过血脑屏障，所以染色时，如神经系统是 完整的，与血浆白蛋白结合的依文思蓝无法使其看 色。相反如果神经系统血脑屏障被破坏，依文思蓝 就可以进入神经系统并使其着色。在荧光波长470 与540 nm各有一强峰，680 nm处有一弱峰。其 在组织中的含量常使用化学透析法和比色法进行检 测。脑组织中血脑屏障的破坏，可以引起毛细血管的通 透性增加，结合EB的白蛋白可通过BBB进入脑组织,应用化学比色法

2、甲E胺测定脑组织EB渗岀量，可以反映血脑屏障的开放程度，并在此基础上 进一步探讨不同细胞移植干预与BBB通透性的效应 关系。伊文思蓝灌注染色法结合共聚焦激光扫描显微镜观 察脑切片中EB荧光强度，可以检测血脑屏障中血 管形态的改变，同时对脑组织中渗入的EB含量进 行定量分析。两者结合可以从形态学、组织定量上相互补充完 善。2、实验准备试剂：2%EBs 1 %戊巴比妥钠、0.9%氯化钠、20U/ml肝素钠、二甲基甲酰胺器材：冰冻切片机、共聚焦激光扫描显微镜、分光 光度计、恒温箱、离心机、注射器、输液器、解剖 器械等3、测定方法1、各组动物处死前0.5h （也有的为lh、2h）尾静 脉（或股静脉）注

3、入2%EB （2ml/kg,也有的用3、4ml/kg）（剂量与提前时间成反比？）2、1 %戊巴比妥钠30-40 mg/kg麻醉后打开胸腔， 心内灌注肝素生理盐水（0.9%氯化钠+20U/ml肝 素钠）200-300ml （有文献提岀当右心房流出液体 变清澈时即可停止灌注），断头取脑作矢状切取半 脑分离海马，一半脑组织进行冰冻切片，应用冰冻 切片机行10-20pm切片，于共聚焦激光扫描显微 镜下观察EB通透情况。3、另一半脑组织称重，剪碎置于二甲基甲酰胺（lml/100mg脑组织，也可用三氯乙酸、甲酰 胺）60°C孵育 24h, 1000r/min 离心 5min （有的 作者认为脑组织在甲酰胺中匀浆呈胶状，上清液不 能通过离心取得，水浴后直接取上清液比色），用 分光光度计检测波长为620 nm的吸光度。取采用软件（Oringen7.0）进行数据分析，根

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