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1、会计学1DNA文库的构建文库的构建第1页/共46页第2页/共46页第3页/共46页限制限制性内性内切酶切酶克隆、转化、培养、鉴定克隆、转化、培养、鉴定基因组基因组DNA基因组文库基因组文库第4页/共46页第5页/共46页第6页/共46页第7页/共46页第8页/共46页第9页/共46页第10页/共46页第11页/共46页第12页/共46页第13页/共46页第14页/共46页第15页/共46页第16页/共46页基因组DNA文库限制性内切酶限制性内切酶基因组DNA基因重组转化细菌体外包装第17页/共46页第18页/共46页第19页/共46页可以在原核中表达。第20页/共46页第21页/共46页第22

2、页/共46页cDNA文库的构建：基因重组反转录反转录酶酶mRNAmRNAcDNAcDNA第23页/共46页第24页/共46页RNA： tRNA、rRNA、mRNA(1%5%） 真核生物的mRNA具有一个polyA的3末端，可以被用于mRNA的分离； oligo(dT):polyA 杂交链在高盐离子浓度下可以保持，在低盐离子浓度下或较高温度下就会分开，利用这一性质从RNA中分离纯化mRNA。 第25页/共46页第26页/共46页第27页/共46页第28页/共46页第29页/共46页许多位点同时发生，而不仅仅从3-末端的oligo(dT)引物一处开始。第30页/共46页第31页/共46页第32页/共46页第33页/共46页第34页/共46页RNase H ：特异水解与：特异水解与DNA 杂交的杂交的RNA上的磷酸二酯上的磷酸二酯键，产生带有键，产生带有3OH和和5P的产物的产物第35页/共46页第36页/共46页第37页/共46页第38页/共46页第39页/共46页第40页/共46页第41页/共46页第42页/共46页第43页/共46页基因组基因组DNADNA文库文库cDNAcDNA

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