实验五免疫学检测技术抗原抗体凝集实验和抗原抗体沉淀实验

1、一、凝集反应一、凝集反应( (一一) ABO) ABO血型鉴定实验血型鉴定实验第1页/共22页凝集反应：凝集反应：在一定浓度的电解质溶液中，在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性颗粒性抗原抗原( (如红细胞如红细胞) )与相应抗体结合与相应抗体结合后，出现肉眼可见的后，出现肉眼可见的凝集块凝集块。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。泛应用。 抗原抗原：能诱导机体产生体液抗体和细胞免疫应答，：能诱导机体产生体液抗体和细胞免疫应答，并能与抗体和致敏淋巴细胞在体外并能与抗体和致敏淋巴细胞在体外发生特异结合发生特异结合反反应的物质。应的物质。抗体

2、（免疫球蛋白）抗体（免疫球蛋白）：机体在抗原物质刺激下所形：机体在抗原物质刺激下所形成的一类成的一类能与抗原特异结合能与抗原特异结合的的血清活性成分血清活性成分。第2页/共22页人类人类ABOABO血型血型抗原抗原主要有主要有A A和和B B两种两种，根据，根据红细胞表面红细胞表面这这两种抗原的有无两种抗原的有无, ,可把可把血型血型分为分为四种四种。据此，将。据此，将抗抗A A和和抗抗B B的的抗体抗体分别与分别与待测红细胞待测红细胞混合，抗混合，抗A A或（和）抗或（和）抗B B的抗体与红细胞表面上的相应抗原的抗体与红细胞表面上的相应抗原结合结合而引起而引起红细胞凝集，红细胞凝集，据其凝集

3、情况便可判据其凝集情况便可判定出受试者的血型。定出受试者的血型。1.ABO1.ABO血型鉴定实验原理血型鉴定实验原理第3页/共22页红细胞表面红细胞表面AgAg血清中血清中AbAbA A型型A A抗抗B BB B型型B B抗抗A AABAB型型A A、B B、O O型型、抗抗A A、抗、抗B BABOABO血型的划分血型的划分第4页/共22页（1 1）ABOABO血型鉴定血型鉴定试剂盒试剂盒内含内含: :抗抗A A血清：血清：为蓝色为蓝色抗抗B B血清：血清：抗抗B B为黄色为黄色）（2 2）一次性采血针一次性采血针1 1枚、洁净玻片、枚、洁净玻片、7575酒精、灭菌棉签。酒精、灭菌棉签。（3

4、 3）生理盐水生理盐水2.2.实验材料实验材料第5页/共22页3.3.实验方法实验方法（1 1）取载玻片取载玻片1 1张，用记号笔划分为两格，分别注明张，用记号笔划分为两格，分别注明A A和和B B，各加，各加1 1滴滴标准抗标准抗A A和抗和抗B B的血清（抗体）。的血清（抗体）。 （每（每人一张玻片）人一张玻片）抗抗B 血清 抗抗A 血清 AB第6页/共22页3.3.实验方法实验方法（2 2）采血：）采血：酒精棉球酒精棉球消毒消毒耳垂或手指末端后，用耳垂或手指末端后，用采采血针刺血针刺破皮肤，取破皮肤，取1 1滴血（滴血（可用牙签可用牙签）直接放入抗）直接放入抗A A、抗抗B B血清血清。

5、+抗抗A血清血清 +抗抗B血清血清 AB第7页/共22页3.3.实验方法实验方法 不凝集（不凝集（- -） 凝集（凝集（+ +）如混合液由均匀红色如混合液由均匀红色混浊混浊状逐渐状逐渐变变为为透明透明，并出现大小不，并出现大小不等的红色凝集块者，即为等的红色凝集块者，即为红细胞凝集红细胞凝集；如混合液仍呈；如混合液仍呈均匀均匀混浊混浊状，则为状，则为不凝集不凝集。（3 3）手持玻片，前后左右轻轻转动，促手持玻片，前后左右轻轻转动，促其充分混匀。其充分混匀。AB第8页/共22页记录受检者红细胞凝集情况，根据记录受检者红细胞凝集情况，根据ABOABO血型鉴定表，判断受检者的血型。血型鉴定表，判断受

6、检者的血型。 实验结果实验结果 结论结论 抗抗A血清血清 抗抗B血清血清 + + + - - + - -4.4.实验结果实验结果玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内！玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内！第9页/共22页 ( (二二) )志贺杆菌玻片凝集实验志贺杆菌玻片凝集实验1. 1. 材料材料 志贺杆菌诊断志贺杆菌诊断血清血清( (已知抗体已知抗体) )； 待鉴定待鉴定细菌细菌2 .2 .原理原理( (玻片凝集玻片凝集) ) 将将已知抗体已知抗体直接与直接与未知抗原未知抗原物质（如细菌）物质（如细菌）混合混合，在电解质存在条件下，如两者对应便发生，在电解质存在条件下，如两者对应便发生特异性结合

7、而形成肉眼可见的特异性结合而形成肉眼可见的凝集物凝集物，即为，即为阳性阳性，可判断细菌种类。可判断细菌种类。第10页/共22页 生理盐水生理盐水 志贺诊断血清志贺诊断血清 + + 待检菌待检菌 待检菌待检菌 2人一个玻片3.3.实验方法实验方法混匀第11页/共22页 4.注意事项：注意事项： （1）生理盐水、诊断血清要生理盐水、诊断血清要适量适量； （2）待检菌待检菌为肠道为肠道致病菌致病菌，注意，注意无菌操作无菌操作， 玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内； （3）用接种环取待检菌时，用接种环取待检菌时，不要挑取琼脂不要挑取琼脂； 待检菌与生理盐水、诊断血清混

8、匀时，待检菌与生理盐水、诊断血清混匀时， 不要涂得太宽不要涂得太宽，否则影响结果观察。，否则影响结果观察。3.3.实验方法实验方法第12页/共22页 现象现象结论结论 待检菌待检菌 待检菌待检菌 实验内容实验内容 + + 生理盐水生理盐水 志贺诊断血清志贺诊断血清5.5.结果观察与判断结果观察与判断第13页/共22页 二、沉淀反应二、沉淀反应 1.1.目的目的：了解：了解双向琼脂扩散双向琼脂扩散试验的原理和用途试验的原理和用途2.2.基本原理基本原理 可溶性可溶性抗原抗原（如血清、毒素、细菌浸出液等）如血清、毒素、细菌浸出液等）与与相应相应抗体抗体结合结合，当两者，当两者比例合适比例合适、并有

9、适量、并有适量电电解质存在解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线沉淀线，称为称为沉淀反应。沉淀反应。常用于常用于定性检测定性检测，也可用于，也可用于半定半定量检测量检测。第14页/共22页 二、沉淀反应二、沉淀反应 2.2.基本原理基本原理 将将抗原抗原与与抗体抗体分别分别加入加入琼脂凝胶板琼脂凝胶板上相邻近的上相邻近的小孔内小孔内，让它们相互向对方，让它们相互向对方扩散扩散。当两者在最适当。当两者在最适当比例处比例处相遇相遇时，即时，即形成一条清晰的形成一条清晰的沉淀线沉淀线。根据有。根据有否出现沉淀线，可用已知的抗体否出现沉淀线，可用已知的抗体鉴定未知的抗原鉴定

10、未知的抗原，或或用已知的抗原鉴定用已知的抗原鉴定未知的抗体未知的抗体。 第15页/共22页3.3.材料材料 （1 1）人血清、兔抗人血清。人血清、兔抗人血清。 （2 2）1.5%1.5%琼脂（用生理盐水或巴比妥琼脂（用生理盐水或巴比妥缓冲液配成）。缓冲液配成）。 （3 3）载玻片、移液枪、水浴锅、玻璃载玻片、移液枪、水浴锅、玻璃管等。管等。 二、沉淀反应二、沉淀反应 第16页/共22页4. 4. 方法方法1)1)制备琼脂玻片制备琼脂玻片：将已知加热溶化的：将已知加热溶化的1.5%1.5%琼脂琼脂3.5ml(3.5ml(已制备好已制备好, ,在水浴锅中在水浴锅中) )，迅速倾入载玻片，迅速倾入载

11、玻片上。上。（每（每2 2人倒一个玻片）人倒一个玻片）2)2)打孔打孔：待凝固后用：待凝固后用打孔器打孔器( (玻璃管玻璃管) )按下图样打按下图样打孔。（孔径孔。（孔径3mm3mm，孔距，孔距4mm4mm）（）（每每1 1人打一个梅花）人打一个梅花） 二、沉淀反应二、沉淀反应 第17页/共22页3)3)加样加样 以上方孔为第以上方孔为第1 1孔孔，按，按顺时针顺时针方向分别称为方向分别称为2 2、3 3、4 4、5 5和和6 6孔，孔，中央孔为中央孔为7 7孔孔。7 7孔孔加入加入1:101:10人血清人血清10 10 l l( (已稀释好已稀释好) ) ，1-51-5孔加入孔加入对倍稀释对倍稀释的的兔抗人血清（兔抗人血清（原液，原液，1:21:2，1:41:4，1:81:8，1:161:16） 10 10 l l ；6 6孔加入孔加入生理盐水生理盐水10 10 l l ，作为作为阴性对照阴性对照孔。孔。AbAb(1:4)Ab(1:8)盐水盐水人人AgAb(1:2)Ab(1:16)1 12 23 34 45 56 67 7每孔加样每孔加样10 l注意移液枪的使用！注意移液枪的使用！第18页/共22页4)4)温育 置湿盒3737温育12-24 h12-