浙江大学生物化学实验甲 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 ppt课件

1、用正交法测定几种要素对酶活力的影响1、正交法简介在消费实际中,试制新产品、改革新工艺、寻求好的消费条件等,都需求先做实验。而实验总要破费时间，消耗人力、物力、因此人们总希望做实验的次数尽量少，而得到的结果尽能够的好。要到达这个目的，就必需事先对实验作合理的安排，也就是要进展实验设计。实践问题是复杂的，对实验有影响的要素往往是多方面的。我们经常需求调查各要素对实验影响的情况，但在多要素、多程度实验中，假设对每个要素的每个程度都相互搭配进展全面实验，需求做的实验次数就会很多。用正交法测定几种要素对酶活力的影响 比如对两个7程度的要素，假设两要素的各个程度都 相互搭配进展全面实验，要做72=49次实

2、验，而3个7程度 的要素要进展全面实验，要做73=343次实验。作这么多次 实验，要破费大量的人力、物力，还要用相当长的时间， 显然是非常困难的。有时，由于时间过长，条件改动，还 会使实验失败。 人们在长期的实际中发现，要得到理想的结果，并 不需求进展全面实验，即使要素个数、程度都不太多，也 不用作全面实验。我们总是希望在不影响实验结果的前提 下，尽能够的减少实验次数，正交实验设计就是处理这个 问题的有效方法。用正交法测定几种要素对酶活力的影响2、正交法的原理正交实验设计的主要工具是正交表。正交实验设计是经过借助于正交表，简化表格计算，正确分析结果，从而找到实验的最正确条件，分清要素的主次，这

3、样就可以通过比较少的实验次数到达好的实验效果。实际证明，正交法是一种多、快、好、省的方法，目前已被广泛运用于工农业消费和科学实验中。本实验运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度、pH值这四个要素对酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、酶浓度、温度和pH值时酶活力最大。3、正交法的设计过程以本实验为例用正交法测定几种要素对酶活力的影响 、根据实验目的，确定要考核的实验目的。 、确定要调查的实验要素和各要素程度。 要经过对实践问题的详细分析选出主要要素，略去 次要要素，这样可使要素的个数少些，从而减少实验次数 和计算。本实验取四个要素，即底物浓度s、酶浓度 E、温度、pH值。每个要素选三个程度程度

4、即在要素 的允许变化范围内，要进展实验的“点。实验要素和选 用程度如表1所示。 因素水平 s(ml)E(ml)温度（）pH10.50.850720.20.537930.80.2608表1 要素、程度表用正交法测定几种要素对酶活力的影响 作要素、程度表时，各要素的程度最好不要按大小 顺序陈列。 如按普通方法，对四个要素三个程度的各种搭配都 要思索，共需做34=81次实验，而用正交表只需做9次实验。 、选择适宜的正交表 首先根据各要素的程度选择相应程度的正交表，同 程度的正交表有好几个，终究选哪一个要看要素的个数， 普通只需正交表中要素的个数比实验要调查的要素的个数 稍大或相等就行了。这样既能保证

5、到达实验目的，而实验 的次数又不至于太多，省工省时。 正交表的表示：正交表 Lntq用正交法测定几种要素对酶活力的影响 L：正交表的代号； n：处置数实验次数 t：程度数； q：要素数 实验次数n=qt-1+1 本实验选用四要素，每个要素选三个程度，因此可 选用正交表L934。 、在所选的正交表上进展表头设计 把要素放入正交表头的任务，叫做表头设计。如本 实验是一项四要素各三程度的实验，因此表头设计时，可 将四个要素依次放在L934的第1，2，3，4列上。见表 2所示。用正交法测定几种要素对酶活力的影响正交表都具有以下两个特性：a、在每一列中，各程度出现的次数相等，即在任何一列中，数字1、数字

6、2和数字3都出现三次几个程度就均出现几次1233931238231372132613225321243331322212111114321 程度 要素实验号表2 表头设计用正交法测定几种要素对酶活力的影响 b、任何两列中，横行组成的数对出现的次数相等， 均出现一次这里有9个不同的数对，均出现一次，即 1，1、1，2、1，3、2，1、2，2、 2，3、3，1、3，2、3，3各出现一次。 以上这些特点保证了用正交表安排的实验方案是均 衡搭配的，因此分析数据比较方便，可进展综合比较，结 果比较可靠。 4、 酶活力的测定原理蛋白质 小片段肽段 铜-肽络合物 胰蛋白酶Folin-酚试剂甲 (硫酸铜的碱性

7、溶液)Folin-酚试剂乙(磷钼酸和磷钨酸的混合液)钼蓝 + 钨蓝蓝色，680nm处具特征光吸收，OD680与肽含量成正比，可据此定量测定。用正交法测定几种要素对酶活力的影响5、实验安排先将本实验的四个要素依次填入L9表的要素1，2，3， 4中，再将各列的程度数用该列要素相应的程度写出来，便可得到如表3所示的实验安排表。见P109。表中试验号共9个，表示要做9次实验，每次实验的条件如每一纵行所示。实验的终止及酶活力的测定过程详见P109。6、实验结果及分析实验做好后，把9个数据填入表4实验结果栏内，按表中数据计算出各要素的一程度实验结果总和、二程度试验结果总和、三程度实验结果总和，再取平均值各

8、自被3除。最后计算极差。用正交法测定几种要素对酶活力的影响 极差是指同一列中，各程度平均值中的最大值与最 小值之间的差。普通地，各列的极差是不一样的，这阐明 各要素的程度改动对实验目的的影响是不同的。极差越大， 阐明这个要素的程度改动对实验目的的影响越大。极差最 大的那一列，阐明那个要素的程度改动对实验目的的影响 最大，那个要素就是我们要思索的主要要素。 而在同一列各程度实验结果的平均值中即某要素 下各程度平均值中，值最大所对应的那个程度即为该因 素的最适条件。各要素最好的程度合在一同就是最好的试 验条件，同时还要思索要素的主次。用正交法测定几种要素对酶活力的影响 对于主要要素，一定要按照有利于目的要求选取； 对于次要要素，那么可以思索实践实验条件如本钱、实验 条件等来选取适当程度，而得到符合实验实践的最优或 较优实验条件。这一过程就称为直观分析法。见表4。 最后以A/3，/3，/3值为纵坐标，要素的 程度数为横坐标作图留意：作图时，程度数应从小到大 陈列，并经过各图确定最适的酶促反响条件。0表4 实验结果分析计算表 水平 因素试验号1s(ml)2E(ml)3温度()4pH值试验结果A6601 0.51 0.81 501 71 0.52 0.52 372 91 0.53 0.23 603 82 0