岛津液相色谱仪维护教材1

1、岛津液相色谱仪维护教材岛津液相色谱仪维护教材岛津企业管理（中国）有限公司 分析中心 液相色谱故障排除经验 液相色谱常见问题第一部分液相色谱简易流程图输液泵输液泵进样器进样器 色谱柱色谱柱柱温箱柱温箱检测器检测器溶剂溶剂数据处理数据处理废液废液1.等度系统储液瓶储液瓶脱气机脱气机泵单元泵单元手动进样器手动进样器色谱柱色谱柱检测器检测器废液瓶废液瓶1234567储液瓶储液瓶脱气机脱气机泵单元泵单元自动进样器自动进样器色谱柱色谱柱检测器检测器废液瓶废液瓶低压梯度单元低压梯度单元混合器混合器2.低压梯度系统123456789储液瓶储液瓶脱气机脱气机泵单元泵单元自动进样器自动进样器色谱柱色谱柱检测器检测

2、器废液瓶废液瓶混合器混合器3.高压梯度系统12345678液相色谱故障排除经验故障的确定 至少要重复出现两次以上初步判断故障引起的原因 方法或硬件由经验或平时的积累确定故障原因 平时做好观察和记录当不能确认故障原因时 采用排除法逐一考察可能引起故障的因素确定故障能否自行处理 不要贸然拆卸不熟悉的部件常见故障因素仪器环境： 实验室的温度、湿度、酸度等 实验室震动、灰尘等问题 电源及地线问题使用条件： 流动相（pH值、均匀度、气泡等） 样品（样品分解、氧化、样品溶剂等） 色谱柱（污染、堵塞、塌陷等）硬件问题： 输液泵 进样器 检测器日常保养-做好平常的保养可以有效的降低故障的发生率-做好平常的保养

3、可以延长仪器的使用寿命常做的保养 保证仪器的使用环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘） 泵的保养（使用缓冲盐时要清洗柱塞，水和盐不要长期 保存在泵里） 进样器要经常清洗，避免污染物吸附或堵塞管路 尽量进行样品前处理 色谱柱要定期清洗，保证柱效及使用寿命 系统中不要长期保存水和盐，长时间不用时应将仪器所 有部分全部更换为70以上的甲醇，避免细菌的滋生及 盐的析出。液相色谱常见问题 压力异常（偏高、波动） 漏液 保留时间漂移 基线问题（漂移、噪声） 峰形异常压力 压力是液相色谱中最重要的指标，要经常关注压力的变化。 保留时间的变化经常是由于压力问题引起的。 不同溶剂即使在相同流速和温度的情况下压力也是不

4、同的。 记下仪器正常状态时，在固定条件下（流动相、流速、温度等）的 压力显示值。压力高首先要确认是色谱柱堵塞还是系统堵塞色谱柱堵时，确认可能造成堵塞的样品的性质，相应选择合适的清洗溶剂。系统堵塞，首先应确认是哪一部份堵塞，依据情况由后向前进行排除。容易发生堵塞的部件 保护柱及色谱柱 线路过滤器 混合器过滤组件 管路连接处 进样器 检测器流通池压力低如果压力为零： 泵头中没有液体，充满气泡 单向阀完全堵死 柱塞杆折断 压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)如果有压力但是压力比正常时低： 漏液 单向阀堵塞压力波动压力在短时间内剧烈波动。 泵头中有气泡 单向阀脏 柱塞密封圈漏液经常漏液的部件泵：

5、 柱塞密封圈 排液阀手动进样器：转子密封圈磨损检测器： 流通池窗口（垫片损坏、透镜破碎）接头处漏液：（接头松动，接头脏，接头磨损，部件不匹配） 保留时间不稳定吸滤头脏泵输液不正常（压力波动、气泡等）流动相组分变化流动相缓冲能力不够色谱柱平衡时间不够柱温的变化柱子问题噪音大流动相污染、变质或由低品质溶剂配成漏液流动相、泵、检测器流通池内有气泡流动相各溶剂不相溶或混和不均匀检测池能量不足流通池被污染温度影响（检测器和柱温差别太大）其他电子设备的影响或电源、地线等基线漂移流动相污染，变质或由低品质溶剂配成流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)温度波动系统平衡时间不够流通池被污染或有气泡流通池窗口破

6、裂峰形问题死体积太大柱子被污染或堵塞色谱柱塌陷色谱柱化学或次级保留（硅羟基效应或重金属污染）流动相缓冲不足或不合适样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大样品过载（浓度或体积）柱温过低鬼峰流动相被污染进样阀残余峰样品中未知物色谱柱中的污染物日常使用注意点硬件基础知识容易出故障的部件及常见故障的排除 第二部分液相系统维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器色谱柱一、输液部分管线选择材料 不锈钢 Teflon PEEK (聚醚醚酮)尺寸 0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D.

7、 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.管线材料不锈钢 (可用于所有连接)能承受几千 kgf/cm2 压力酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时)PEEK (可用于所有连接)能承受高达 250 kgf/cm2压力可在整个pH范围(pH 1-14)内使用 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管)化学惰性大能承受 5 kgf/cm2 压力接头不锈钢接头 / 垫圈 主要用于输液泵、进样器的连接能承受 400 kgf/cm2压力一旦固定，垫圈不可再动PEEK接头 主要用于色谱柱、检测器的连接易于安装能承受 250 kgf/cm2压力容易产生死体积不

8、锈钢接头垫圈PEEK接头死体积死体积可能会引起分离度变差和重现性变差等问题.管线公螺母死体积好的连接差的连接选择原则1、采用 “HPLC” 级溶剂2、避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂3、对试样有适宜的溶解度4、溶剂粘度要小5、与检测器相匹配流动相溶剂的等级HPLC级优级纯分析纯都经过蒸馏和0.45 m过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒）优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.22 m过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱流动相水 / 甲醇梯度ODS 柱鬼峰梯度曲线1 mL/min, 10 mins 内，0-100% 甲醇，在最高点保持5 mins.鬼

9、峰的出现流动相水的等级纯水蒸馏水去离子水波长 (nm)纯水去离子水水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯水中去除了无机和有机的污染物吸光率流动相选择缓冲液的步骤 1 确定最佳分离状态时的流动相pH 2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液（即使浓度稀也具 有较强能力的缓冲液） 3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长210 nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）流动相代表性弱酸的pKa pK1 pK2pK3醋酸4.87柠檬酸3.134.766.40磷酸2.167.2112.32流动相 使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损、阻塞: 用含5%甲

10、醇的水溶液冲洗30 min（1 mL/min），再用甲醇冲洗30 min 用纯水冲洗泵头清洗管路 易受到细菌和霉菌的影响不能直接用有机溶剂冲洗缓冲盐溶液缓冲液的使用流动相的更换不互溶的流动相不能直接更换缓冲盐不能直接用有机溶剂更换水正己烷异丙醇缓冲盐有机溶剂水过滤：0.45 m或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液时。滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜： 不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜： 适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以 用于强酸， 不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样

11、适用于水溶性样品和有 机溶剂溶剂前处理吸滤头吸滤头部件号：228-45707-91吸滤头部件号： 228-21984-01吸滤头材料：不锈钢(或陶瓷)烧结，孔径10 m故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用异丙醇（或5稀硝酸），超声波清洗， 再用蒸馏水 清洗泵工作示意图 凸轮柱塞杆柱塞密封圈单向阀 泵头流动相入口流动相入口流动相出口流动相出口LC-20AT串联式柱塞往复泵串联式柱塞往复泵LC-20AD 并联式微体积柱塞往复泵并联式微体积柱塞往复泵柱塞泵的基本结构 LC-10ATvp LC-10ADvp 单向阀单向阀单向阀LC-20AT 输 液 泵串联式柱塞往复泵串联式柱塞往复泵选配件支架

12、压力传感器泵头主进口单向阀泵头固定座辅助进口单向阀主泵头主泵头 副泵头副泵头单向阀LC-20AD 输 液 泵并联式微体积柱塞往复泵并联式微体积柱塞往复泵选配件支架进口单向阀出口单向阀进液口泵头固定座泵头 泵头泵头 泵头泵头单向阀单向阀压力传感器单向阀单向阀结构球座吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头抛光面宝石球流动相单向阀工作原理单向阀结构请不要分解阀心A和阀心B重新组装后性能不被保证，输液可能不稳定注意：LC-20AT主入口阀部件号部件号:228-45704-92LC-20AD入口阀LC-20AT副入口阀部件号部件号: 228-45704-91LC-20AD出口阀部件号部件号: 228-

13、45705-91单向阀LC-10ADvp出口阀LC-10ATvp出口阀部件号部件号: 228-34976-91LC-10ADvp入口阀部件号部件号: 228-39093-92LC-10ATvp入口阀部件号部件号: 228-32166-91LC-2010 出口阀部件号部件号: 228-37147-92LC-2010 入口阀部件号部件号: 228-37149-91单向阀清洗-污染故障：宝石球或球座受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施： 打开排液阀，用注射器推异丙醇清洗 取下柱子，换上阻尼管，以异丙醇为流动相输液 拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗注意：超声清洗时开口端向上放置。注意：超声清洗

14、时开口端向上放置。故障：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1)用针筒抽出口单向阀以产生负压，使宝石球与垫片分开 2)打开排液阀，用注射器推异丙醇清洗 3)拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀清洗-粘结柱塞密封圈柱塞密封圈LC-20ADLC-20ABLC-10ADvp LC-2010部件号： 228-35146柱塞密封圈LC-20ATLC-10ATvp部件号：228-35145取下和安装柱塞密封圈工具柱塞密封圈的更换故障：密封圈磨损导致密封不良现象：系统压力波动大或漏液措施：更换密封圈注意点：1、拆卸泵头前，柱塞杆复位 （PSET）2、新密封圈用异丙醇浸泡15 m

15、in 后再安装流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈柱塞杆柱塞杆LC-10ADvp用部件号：部件号：228-35281-91柱塞杆LC-10ATvp用部件号：部件号：228-35009-92柱塞杆LC-20AD/LC-20AB用部件号：部件号：228-35281-95柱塞杆LC-20AT用部件号：部件号：228-35009-93柱塞杆LC-2010用部件号：部件号：228-35281-93 柱塞杆LC-2010HT用部件号：部件号：228-35281-95 柱塞杆更换更换柱塞密封圈后仍然频繁漏液时柱塞密封圈使用寿命短时柱塞杆损伤时柱塞隔膜更换柱塞时，应同时更换隔膜。隔膜损坏导致泵头后部漏液时，应更换隔

16、膜。注意：只有D系列泵有隔膜， T系列泵由于设计不同，没有隔膜。隔膜LC-20AD/LC-20AB/LC-10ADvp/LC2010用部件号：部件号：228-32784-91线路过滤器故障：堵塞现象：系统压力偏高措施：异丙醇（或5稀硝酸）， 超声波清洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1 mL/min，如压力0.3 MPa，则堵塞。排液阀压力传感器线路过滤器流动相线路过滤器（10Avp、20A）部件号：部件号：228-48607-91线路过滤器组件部件号：部件号：228-35871-91(LC-2010) 228-35871-96(LC-2010HT)线路过滤器安装螺母（10Avp、

17、20A）部件号：部件号：228-39082-91过滤器的更换旧过滤器的取出新过滤器的安装排液阀漏液 故障：排液阀垫圈损伤或密封不良现象：打开排液阀进行排气时，从装有排液阀的螺口处漏液措施：排液阀手柄按逆时针方向旋转取下F 确认垫圈表面有否损伤。F 有损伤，进行更换；F 附有脏物，擦洗掉，再确认。LC-20A系列泵部件号：228-45574-91LC-10Avp系列泵部件号：670-11518排液阀混合器混合器不同体积的连接方法混合器过滤组件常见故障：堵塞 混合器堵塞往往是由于混合器过滤组件堵塞引起的。处理方法： 按图中结构卸下过滤组件，5%稀硝酸或其他溶剂超声清洗或更换新的组件注意：请勿随意拆

18、卸其它部分标准或半微量混合器用(10Avp、20A）部件号：228-18872-93二、进样部分进样器 自动进样器 手动进样器(7725/7725i） 原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入7725i手动进样阀 手动进样器的原理图MBB流路MBB设计截面图 MBB（Make Before Break）设计使切换过程中，流动相不间断流动。流动相连续流过转子密封槽和MBB流路直到切换到位MBB流路切换示意图7725/7725i手动进样器结构图定子密封部件号：228-32211-31转子密封(Vespel)部件号：670-12098-51(Tefzel)部件号：670-12098-

19、56转子密封适用范围进样量和检测器响应的关系示意图进进 样样 量量 定量环体积一半定量环体积一半三倍定量环体积三倍定量环体积全量注入全量注入部分注入部分注入响应值响应值交叉污染的原因 红色表示残留样品进样口清洗（1）将附件进样口清洗器连接在针管上， 不应使用微型注射器清洗。（2）清洗液（试样溶剂或不含盐的流动相 等）用注射器吸入（3）在进样状态下，将针孔清洗器压接在 针导管上，流入清洗液1ml左右（4）使用缓冲盐后，用水清洗流路和针孔（5）清洗液可能反喷，因此注射器应慢慢 地推压进样口清洗器手柄组件针导管针管手动进样器操作注意点：1）进样时，进样针应插到底2）不使用时将针头留在进样器内3）进样

20、应使用液相色谱专用平头进样针4）样品溶液pH小于10, 常用密封垫的Vespel材质，适用pH10, 否则换Tefzel或PEEK材质的密封垫pH 0-145）清洗应使用专用针口清洗器故障处理定子面漏液 调紧压力调整螺钉，如果不成功则应更换转子或定子面组件针密封漏液从进样口取出针，用铅笔的橡皮头将针导管轻轻压入自动进样器Purge功能仪器开机时，清除管路中可能存在的气泡；清洗液改变时，替换清洗液；建议时间设定为25min。Rinse 功能样品进样过程中自动清洗针外壁，也可手动进行额外清洗。样品量 样品量应不少于样品瓶容积的1/3 ；1.5mL样品瓶底部2mm处液体剩余量约150uL。自动进样器

21、使用自动进样器清洗液选择反相 色谱模式：50%甲醇/50%水，为避免发生沉 淀，应选择不含盐的清洗液。若反相采用100有机相，采用100甲醇作为清洗液。离子交换色谱模式：100缓冲盐流动相，选择纯化水作为清洗液。正相色谱模式、GPC：使用与流动相相同的溶剂作为清洗液。执行Z-HOME操作，关掉电源，取出样品架，取下面板和和高压阀流路，用手拧松针密封圈并取下它。针密封（PEEK)部件号：228-42325-01自动进样器针密封的更换三、分离部分色谱柱的日常保养F购买新柱后一定要仔细阅读说明书，确认柱的使用条件以及清洗再生步骤，按照说明书条件测试色谱柱柱效，记录使用压力F定期检测柱压和柱效F不同流

22、动相之间转换时应注意溶剂的互溶性F确认样品不会在流动相中析出或带有固体不溶物，请使用0.45 m或0.22 m的一次性滤膜过滤样品，或者进行前处理。F为了延长色谱柱使用寿命，请使用保护柱。F定期用合适的溶剂清洗或再生色谱柱F长期不用时，清洗干净后，使用柱子说明书中指明的溶剂保存。柱子要从仪器上卸下并用堵头密封后保存。F定期用合适的流动相清洗保存的柱子，避免干涸。峰的变形根部变宽根部变宽有肩或分叉有肩或分叉峰变形的常见原因1. 样品劣化生成氧化物、分解物样品被污染2. 柱子劣化柱进口污染柱内存在空隙3. 方法问题样品过载溶解样品的溶剂选择不当二次保留效应所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化色

23、谱柱柱效降低原因 滤片或填料堵塞 样品或流动相中杂质吸附 机械振动产生空隙 填料变性滤片或填料堵塞 使用保护柱 缓冲液和溶剂使用0.45 m滤膜过滤 样品溶液使用0.45 m滤膜过滤措施：反向连接色谱柱，使用清洗溶剂以小流量送液打开柱头，清洗或更换滤片样品或流动相中杂质吸附 杂质会产生拖尾峰 使用高溶解性溶剂清洗色谱柱仅几毫米深度会被污染色谱柱取出污染填料，装填新的填料机械振动产生空隙不要撞击色谱柱，如：色谱柱掉落或柱压急剧变化 。8945612370 xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx000 0 000 0LC-20AD :输液时不要打开排液阀溶解样品的溶剂选择不当最好不要选择高溶解性的试剂作为溶解样品的溶剂甲醇 作为溶剂Caffeine乙醇 作为溶剂Caffeine乙醇 作为溶剂Caffeineu最好注入少量样品溶解性效应低溶解性溶剂