抗原抗体反应的原理实用教案

1、第1页/共50页第一页，共51页。 第一节 免疫学技术的范畴(fnchu)与应用一、免疫学技术的范畴(fnchu)二、免疫学技术的应用特点第2页/共50页第二页，共51页。免疫学技术免疫学技术(jsh)(jsh)的范畴的范畴1、对具有免疫活性物质的定性(dng xng)、 定量测定2、对免疫系统的组成成分的数量、 状态的测定第3页/共50页第三页，共51页。 免疫学技术(jsh)的应用特点1、对象(duxing)“包罗万象”2、方法“兼容并蓄”第4页/共50页第四页，共51页。 第二节 有关(yugun)免疫学基本概念一、抗原的概念与属性二、免疫(miny)细胞的概念与分类三、免疫(miny)

2、应答的概念与过程第5页/共50页第五页，共51页。免疫(miny)原性可识别、可反应性（诱导机体产生免疫(miny)应答的特性）免疫(miny)反应性 选择结合性（和免疫(miny)应答产物特异性结合的特性）抗原抗原(kngyun)的概念与属性的概念与属性第6页/共50页第六页，共51页。免疫免疫(miny)细胞的概念与分类细胞的概念与分类免疫细胞（Immune cellsImmune cells） 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动(hu dng)(hu dng)相关的细胞。免疫活性细胞（Immune competent cellImmune competent cell，ICCICC）

3、能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效应产物的淋巴细胞。第7页/共50页第七页，共51页。 免疫细胞(xbo)的类型 红细胞 血小板 肥大细胞 中性(zhngxng)粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细胞第8页/共50页第八页，共51页。免疫应答的概念免疫应答的概念(ginin)与过程与过程免疫应答（immune response） 免疫系统接触(jich)抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出免疫效应的过程。免疫应答的阶段1、抗原识别阶段（antigen-recognizing phase）2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyt

4、e-activating phase） 3、抗原清除阶段（antigen-eliminating phase）第9页/共50页第九页，共51页。 第三节 抗原(kngyun)抗体反应的基本原理一、抗原抗体反应的原理二、抗原抗体反应的特点(tdin)三、影响抗原抗体反应的因素第10页/共50页第十页，共51页。抗原抗体抗原抗体(kngt)反应反应的原理的原理1、抗原抗体结合的作用力2、抗原抗体结合物析出(xch)原因第11页/共50页第十一页，共51页。引起抗原抗体(kngt)结合的作用力1、电荷引力（库仑(kln)引力）2、电子云引力（Van der Waals力）3、氢键结合力4、疏水作用力

5、第12页/共50页第十二页，共51页。抗原(kngyun)抗体结合物析出的原因析出(xch)+ + + + + + + + + + + + 电解质+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 第13页/共50页第十三页，共51页。 抗原抗体反应(fnyng)的特点1、特异性2、可逆性3、适合(shh)比例性第14页/共50页第十四页，共51页。特异性特异性抗原(kngyun)A抗原(kngyun)C抗原(kngyun)B特异性反应交叉反应无反应第15页/共50页第十五页，共51页。可逆性可逆性K（

6、亲和常数(chngsh)）=Ag+AbAg Ab第16页/共50页第十六页，共51页。适合适合(shh)比例性比例性抗体(kngt)含量抗原(kngyun)含量前带后带等价带第17页/共50页第十七页，共51页。网格网格(wn )学说（学说（lattice theory）抗体(kngt)过剩抗原(kngyun)过剩抗体抗体比例合适第18页/共50页第十八页，共51页。 抗原(kngyun)抗体反应的影响因素1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度(wnd)（37-42。C）第19页/共50页第十九页，共51页。 第四节 免疫学检测(jin c)技术的评价一、评价标准(biozhn) 二、特

7、异性与敏感性的关系第20页/共50页第二十页，共51页。评价评价(pngji)(pngji)标准标准Specificity（特异）Sensitivity（敏感）Simplicity（简便(jinbin)）Safety（安全）Saving（节约）第21页/共50页第二十一页，共51页。特异性与敏感性的关系特异性与敏感性的关系(gun x)特异性高、敏感性低 敏感性高、特异性低第22页/共50页第二十二页，共51页。第23页/共50页第二十三页，共51页。 第一节 抗原(kngyun)/免疫原制备的基本概念一、抗原(kngyun)制备的目的二、抗原(kngyun)的“纯度”三、抗原(kngyun)

8、制备的主要技术途径第24页/共50页第二十四页，共51页。抗原制备抗原制备(zhbi)的目的的目的免疫原：激活T、B细胞(xbo)半抗原：检测相应抗体第25页/共50页第二十五页，共51页。抗原抗原(kngyun)的的“纯度纯度”免疫原：保留足够的可被T、B细胞(xbo) 识别的抗原决定簇半抗原：尽可能减少影响反应特异 性的抗原决定簇第26页/共50页第二十六页，共51页。抗原制备的主要抗原制备的主要(zhyo)技术途径技术途径天然抗原(kngyun)分离、纯化半抗原(kngyun)人工合成、载体联接抗原(kngyun)肽 合成、基因工程制备第27页/共50页第二十七页，共51页。 第二节 完

9、全抗原/免疫原的制备(zhbi)方法一、颗粒性抗原(kngyun)的制备二、可溶性抗原(kngyun)的制备第28页/共50页第二十八页，共51页。颗粒性抗原颗粒性抗原(kngyun)的制备的制备1、采集(cij)、分离抗原2、无害化处理第29页/共50页第二十九页，共51页。可溶性抗原的制备可溶性抗原的制备(zhbi)与纯化与纯化1、处理与粉碎2、蛋白质分离3、单一组分提取(tq)4、抗原纯度鉴定 第30页/共50页第三十页，共51页。处理处理(chl)与粉碎与粉碎组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理(wl)、化学、生物 第31页/共50页第三十一页，共51页。蛋白质分离蛋白质分离(fnl)

10、选择性沉淀(chndin)：盐析 有机溶剂沉淀(chndin) 水溶性非离子型聚合物沉淀(chndin) 透析技术：超滤技术： 第32页/共50页第三十二页，共51页。单一单一(dny)组组分提取分提取层析技术(jsh)：凝胶过滤 离子交换 亲和层析 离心技术(jsh)：差速离心 密度梯度离心电泳技术(jsh)：电泳洗脱 等电聚焦第33页/共50页第三十三页，共51页。凝胶层析凝胶层析(cn x)（分子筛）（分子筛）第34页/共50页第三十四页，共51页。离子交换离子交换(l z jio hun)层层析析+第35页/共50页第三十五页，共51页。亲和层析亲和层析第36页/共50页第三十六页，共

11、51页。抗原抗原(kngyun)纯度鉴定纯度鉴定方法：层析性质(xngzh)测定 电泳法 免疫法指标：电泳纯 免疫纯第37页/共50页第三十七页，共51页。 第三节 半抗原免疫原制备(zhbi)的方法一、载体的选择(xunz)二、半抗原与载体的联接第38页/共50页第三十八页，共51页。载体载体(zit)的的选择选择蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH聚合(jh)多肽载体：多聚赖氨酸高分子聚合(jh)物载体：PVP、羧甲基纤维素第39页/共50页第三十九页，共51页。半抗原与载体半抗原与载体(zit)的的联接联接1、连接方式：物理法（吸附） 化学法2、化学连接方法： 直接(zhji)联接

12、法： 间接联接法：第40页/共50页第四十页，共51页。半抗原与载体半抗原与载体(zit)直接联接直接联接碳化二亚胺法碳化二亚胺法蛋白质-COO + R-N+=CN-R H-N+-R蛋白质-COO-C-NH-R + 半抗原-NH2 O蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH R第41页/共50页第四十一页，共51页。半抗原与载体半抗原与载体(zit)直接联接直接联接 戊二醛法戊二醛法蛋白质- NH2 + 半抗原-NH2 + COH-（CH2 ） 3 - COH蛋白质-N=CH-（CH2 ） 3 CH=N-半抗原第42页/共50页第四十二页，共51页。半抗原与载体直接半抗原与载体直接(

13、zhji)联接联接 氯甲酸氯甲酸(ji sun)异丁酯法异丁酯法半抗原半抗原-COOH + Cl-COO-CH2 CH（CH3）2 O O半抗原半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质蛋白质- NH2 半抗原半抗原-CO- NH -蛋白质蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2 第43页/共50页第四十三页，共51页。半抗原与载体半抗原与载体(zit)间接联接间接联接琥珀琥珀(h p)酸酐法酸酐法 O O半抗原半抗原-CH2 OH + C-O-C CH3 CH3 O半抗原半抗原-CH2 O-C-(CH2 ) 2-COOH第44页/共50页第四十四页，共51页。半抗原与载体半抗

14、原与载体(zit)间接联接间接联接O-（羟甲基）羟胺法（羟甲基）羟胺法半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH 半抗原-C=N-O- CH2 - COOH 第45页/共50页第四十五页，共51页。半抗原与载体半抗原与载体(zit)间接联接间接联接一氯醋酸钠法一氯醋酸钠法半抗原- - OH + Cl- CH2 - COONa半抗原- - CH2 - COOH 第46页/共50页第四十六页，共51页。半抗原与载体半抗原与载体(zit)间接联接间接联接重氮化的对氨基重氮化的对氨基(nj)苯甲酸法苯甲酸法HOOC- -NH2 + NaNO2 HOOC- -N=N半抗原半抗原- - OH + HOOC- -N=N半抗原半抗原- -N=N- -COOH OH 第47页/共50页第四十七页，共51页。本章本章(bn zhn)小结小结1、免疫学技术的应用范畴2、免疫学的基本概念3、抗原(kngyun)抗体反应的原理、特点、影响因素4、抗原(kngyun)制备的方法第48页/共50页第四十八页，共51页。思考题思考题1、免疫学技术的应用范畴有哪些？2、体外抗原抗体反应有哪些特点？3、可溶性抗原的制备涉及哪些技术？4、如何使半抗原具有(jyu)免疫原性？举例说明 半抗原与载体的联接方法。第49页/共50页第四十九页，共51页。感谢您的观看(gunkn)！第50页/