三七总皂苷对肝纤维化小鼠血清中转化生长因子汇总

1、三七总皂苷对肝纤维化小鼠血清中转化生长因子(1)余万桂，张恒文， 贺尚荣，晏年春【关键词】三七摘要：目的观察三七总皂甘对肝纤维化小鼠血清中TGF0 1及IL1的影响，探讨三七总皂甘抗肝纤维化可能的免疫学机理。方法用CC14复制小鼠中毒性肝纤维化模型，同时给与三七总皂昔治疗，酶联免疫吸附实验(ELISA法)测定血清中TGF0 1及IL1的水平，并行肝脏病理组织切片检测。结果三七总皂昔能显 著降低肝纤维化小鼠血清中TGF0 l及IL1的水平，减轻肝纤维化程度。结论三 七总皂甘具有抗肝纤维化作用，其机理可能与降低血清中TGB pl及IL1的水平有关。关键词：三七总皂甘；肝纤维化；转化生长因子0 1;

2、白介素1;小鼠Effects of Panax notoginseng Saponins on TGF 0 1 and IL1 in Mice Serum withLiver FibrosisAbstract:Objective To observe effects of Panax notoginseng saponins(PNS)on TGF0 1 and IL1 of serum in mice with 1iver fibrosis.MethodsThe model of CCl4 inducedliver fibrosis was established in mice and th

3、ey were treated with PNS.Serum 1evelof TGF01and IL1 weredetermined and observedtissuepatho1ogy.ResultsItsignificantly decreased 1evel of TGF0 1 and IL1in serum with PNS treatment，and the 1iver fibrosis was improved.Conclusion PNShas reversal effects on mice with hepatic fibrosis , it may be correlat

4、ed with dropserum level of TGF0 l andIL1.Key words:Panax notoginseng Saponins ; Hepatic fibrosis ; TGF0 1; IL1；Mice中医认为肝纤维化主要是气滞血瘀所致，因此采用活血化瘀药物治疗。三 七既有滋补强壮之功，又是活血化瘀之主药。已有研究说明，三七总皂苷对CCl4诱发小鼠血清谷丙转氨酶的升高有明显的抑制作用，还能抑制成纤维细 胞、肝星状细胞增殖及细胞内外工型胶原的生成等1，2。转化生长因子B1(TGF0 1)及白介素1(IL1)是肝纤维化形成过程中的二个重要的细胞因子， 具有活化贮脂细胞(

5、FSC)使其转化为成纤维母细胞(MFb),导致细胞外基质(ECM)异常沉积的特性，参与纤维化形成3，4。本实验在用四氯化碳复制小鼠中毒性肝纤维化模型根底上，测定血清中TGF0 l及ILl的水平。观察三七总皂昔对肝纤维化小鼠血清中TGF0 1及IL1的影响，探讨三七总皂甘抗肝纤维化可能 的免疫学机理。1材料1.1动物昆明种小鼠42只，雌雄各半，体重2022 g,由广州军区陆军总医院动 物中心提供。1.2药物三七总皂甘由湖北中医药学院中药系提供，纯度95%1.3试剂IL1试剂盒购自北京邦定泰克生物，TGF0 1试剂盒购由 上海森雄公司提供。20%勺CC14橄榄油溶液配制：取四氯化碳分析醇20 ml

6、加橄榄油化学醇80 ml混合而成。四氯化碳由重庆东方试剂厂出品，橄榄油由上海化学试剂站分装厂出品。1.4主要仪器酶标仪MK3型,Labxystem Dragon公司生产；SHZ8卵 水浴箱为江苏省太仓医疗器械厂产品。2方法2.1造模与分组实验共设为3组：空白对照组对照组，n=12:颈部皮下注射橄榄油5 ml/kg，5 d 1次，正常饮水，饲与全价颗粒饲料。肝纤维化模型组模型组，n=12:颈部皮下注射20%勺CCl4橄榄油溶液5 ml/kg , 1次/5d,直到实验结束，共持续6周5,正常饮水，饲与全价颗粒饲料。三七治 疗组治疗组，n=12:在预实验取得最正确剂量后，造模的同时给予三七总皂甘 皮

7、下注射，30mg/kg,1次/d ,其余同肝纤维化模型组。2.2观察指标及其测定方法2.2.1对小鼠一般情况及体重的观察每天观察小鼠的一般病症，饮食变化，行为及毛发变化。2.2.2 TGF 0 1、ILl的检测 实验结束后，各组小鼠断头取血，别离出血 消，酶联免疫吸附试验ELISA法测定血清中TGF0 1及IL1的水平，具体操作 均按试剂盒说明。2.2.3病理形态学观察常规HE染色观察肝组织学变化，将肝纤维化分为04级6 ,0级：无纤维化；I级：纤维结缔组织仅局限于汇管区或汇管区扩大，有向小许开展的趋势；R级：纤维结缔组织增生进入肝小叶2/3并有与工级同样的改变；田 级：纤维结缔组织进入肝小叶

8、达中央静脉周围；IV级： 纤维结缔组织在全小叶 多处弥漫性增生，假小叶形成，并有与田级同样的改变。2.3统计学处理肝纤维化分级结果比拟采用等级资料的秩和检验，两均数比拟采用t检验。P0.05为有统计学意义。3结果3.1小鼠一般情况对照组处死前均存活，每只体重增加9.63.4g，模型组死亡4只， 至6周末处死前，每只体重增加2.6 2.0g ,显著低于对照组P0.01。三七治 疗组实验中死亡1只，每只体重增加6.62.8g，显著高于模型组P0.01。死亡者未列入统计。3.2各组小鼠肝组织病理学变化模型组肝细胞有较广泛的点状坏死，伴炎症细胞浸润，肝细胞增生较为明显，汇管区结缔组织增生。治疗组，肝组

9、织切片检测可见修复的肝细胞索，炎症细胞浸润轻于模型组。见表1。表1各组小鼠肝纤维化病理学分级及评分略3.3各组小鼠血清中TGF0 1, IL1的水平模型组小鼠血清TGF0 1, IL1显 著地高于对照组，治疗组小鼠血清TGF0 1, IL1显著地低于模型组。见表2。 表2各组小鼠血清中TGF0 1, IL1测定结果略4讨论本研究以CC14复制小鼠肝纤维化动物模型，使肝细胞发生变性坏死，通过炎症肝脏结缔组织增生，分割肝小叶，最后导致肝硬变。肝纤维化的实质是由于胶原和其他细胞外基质ECM珀合成与降解失衡，导致ECMfc肝内过量沉积 6。ECM勺沉积和降解间的平衡由多种细胞因子调控，其中TGF0 1及IL1的调控作用尤为关键。TGF0 1在肝纤维化中的主要作用是促进ECM成并抑制其降 解，也有间接促HSCJ曾殖作用3。肝纤维化患者TGF0 1水平升高，其升高 与肝纤维化严重程度一致4。IL1主要由单核巨噬细胞分泌，作用于人的贮脂细胞、纤维母细胞、增加胶原合成，Dolar等7检查了43例慢性病毒性肝炎患者和肝硬化患者血清II1水平，发现其与肝纤维化程度呈正相关。Aanstssalos等还发现IL1可加强TGF0 1的合