植物生理指标

1、植物生理指标1、植物酶液提取：1) PVPP同体,PVP单体与金届元素结合)酚类吸附剂，酚的羟基与蛋白质 的球基形成氢键，酿导致蛋白质聚合。或polyclarAT (Polyclar-AT is insoluble PVP,also called as PVPP(PolyVinyl PolyPyrrolidine).It binds phenols etc more efficiently than PVP and is easily removableby filtration or a low speed spin) 去除酚的害防止SB颜色干扰。PVP的肽键中的氧与酚羟基上的质子牢固结合，

2、防止酚与酶 中肽键结合，保护了酶。2)母液制备：0.1mol/L二硫苏糖醇DTT: 100mg至微量离心管，+650ul水0.5mo/L EDTA : 93gEDTANa,10g NaOH,定容至U 500ml 10mg/mlBSA : 100mgBSA丁9.5ml水中2、可溶性总糖测定(蕙酮比色法)(1)原理：糖+硫酸一糠醛，其与蕙酮形成绿色络合物，620nm下显色。本实 验采用浓硫酸，倒入水中产生大量热，促进反应发生。(2)标准曲线绘制：取略大丁0.01g的葡萄糖，105度烘干至包重，取0.01g定容至100ml,配成100ug/ml的溶液。取200mg蕙酮，溶丁100ml浓硫 酸，冷却，

3、保存丁棕色瓶。(注意：不需定容，量取100ml硫酸倒入烧杯 即可，定容混匀时产气热溅出。注意硫酸中是否存在杂质。蕙酮非常敏感， 不能用勺等挖取，只能直接倒，否则就会污染。溶液配后呈亮黄色，放置 顷刻不变色。)标糖溶液ml00.2 0.4 0.6 0.8 1.0蒸僻水ml2.5 2.3 2.1 1.9 1.7 1.5蕙酮溶液ml6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5糖含量ug020406080100总体积9ml，快摇2-3s,室温冷却10-15min,显色，620nm.实验结果：实际上并不理想，因abs均偏低，可试将标糖浓度适当升高葡萄糖含量ug20406080100abs0.50.40

4、.30.20.10050100150葡萄糖浓度2007083W溶性糖标准曲线系歹01线性(系列1)3、电导率（DDS-11A）1）接通电源前观 察表头指针是 否指零，若有偏 差调节表头下 方凹孔，使其恰 指零。2）接通电源，仪器预热10分钟。3）将电极浸入去离子水中，须确保极片浸没，校正零4）根据数值选择量程，我选10ms5）常数设为14、培养液PH测定（PHS-3C）1）PH计在不使用时需使用KCL浸泡液浸泡， 用枪从上小孔和帽注满， 至 少浸泡24h。将PH4.0缓冲剂包定容至250ml,再加入56g分析纯KCL ,加热溶解。2）仪器使用前至少预热30min.3）首先进行定位调节、斜率调节

5、：将测量头用蒸僻水洗后，根据所测溶液 性质不同，放入不同溶液，待示数平衡，再分别调节定位、斜率至6.86,4.00.5、细胞活力测定（TTC法）1）植物生理学通讯TTC法测定红豆杉细胞活力 刘华1梅兴园21湖北 省卫生职工医学院生物教研室，湖北荆州434000 2华中理工大学生命科学 与技术学院，武汉430074）2）药品配置：0.4%（m/v）TTC红四氮哇溶液：0.2gTTC,加1.5ml 95%乙醇溶解， 用蒸僻水定容至50ml。随配随用，不宜久藏，遮光，变红不可用。3）原理：TTC氧化态为无色，被呼吸作用产生的H还原成红色的三苯基甲4)步骤：10ml试管：2.5ml 0.4% TTC+

6、2.5ml PH7.0 0.1mol/L PBS+0.2g鲜细胞,25度避光13-16h,倒掉液体，以蒸僻水洗细胞三次，加5ml 95%乙醇使细胞完全 脱色，70度水浴20min，以乙醇为对照，测485nm处吸光度，此数值可直接 作为细胞活力所测溶液偏丁定位调节斜率调节酸性PH6.86 PBSPH4.00邻苯二甲酸氢钾碱性PH6.86 PBSPH9.18四硼酸钠的衡量标准。一般所得值1-26、可溶性蛋白含量测定(考马斯亮蓝G250染色)1)原理：2)溶液配置：a)考马斯亮蓝溶液：100mg G250溶丁50ml 95%乙醇，加入100ml 85%(w/v)的 磷酸，定容至1000ml。丁棕色瓶

7、常温保存30天。蓝黑色过滤后形成棕褐色 稀释成淡蓝色；b) 50mmol/LPBS PBS直接稀释对PH无太大影响。c) 100ug/ml标准蛋白溶液：精确称取牛血活蛋白10mg,加水定容至100ml3)步骤：a)标准曲线绘制：6ml反应体系，盖盖摇匀程度均一，放置反应3分钟，测595nm处吸光度。比色在1h内完成。Ck23456100ug/ml标准蛋白溶液(ul) 02004006008001000蒸僻水(ul)混匀后10008006004002000G250溶液(ml)555555蛋白质含量(ug)020406080100b)样品测定：100ul样品提取液900ul蒸僻水5ml G250溶

8、液7、 苯丙氨酸解氨酶PAL（陈建勋）1）原理：PAL催化苯丙氨酸的脱氨反应， 使氨释放形成反式肉桂酸， 反式肉桂 酸在290nm处有重要吸收。此酶在植物体内次生物质代谢如木质素等起重要 作用。2）药品配置：PH8.8 0.1mol/L硼酸缓冲液0.02mol/L L-苯丙氨酸：0.330g L-苯丙氨酸，上述缓冲液定容至100ml3）步骤：1ml 0.02mol/L L-苯丙氨酸2ml PH8.8 0.1mol/L硼酸缓冲液100ul酶液（2份ck : 100ul提取缓冲液）混匀，290nm处测起始OD,精确计时,30度保温30分钟后,290nm处测 吸光度。以每30min吸光度增加0.01

9、所需酶量为1U.4）计算：PAL活性（U/gFW） = 30min内OD差值*酶液总体积0.1ml（酶液）*提取酶液时样品重*0.015）注意：a） PAL为诱导酶，除光诱导外，切割受伤，病害感染等也能诱导此酶活性升高。b）除直接用新鲜材料提取进行测定外，也可将诱导好的材料制成丙酮粉，然后 再提取测定。8、 过氧化氢酶CAT德 B.施特尔马赫著.钱嘉渊译.酶的测定方法M .第1版.中国轻工业出 版社，1992.p186-1881）原理：CAT催化H2O2分解，240nm处检测H2O2减少量。CAT以PH7.0, 37度时活性最高，冷冻，阳光，氧气降低酶活。2）药品：0.18%H2O2 :600

10、ul 30% H2O2用PH7.0 PBS稀释至100ml.现配。（一般情况下，配置的双氧水冬天两周用完，夏天一周，避光）25度预热的蒸僻水3）步骤:a）为检查在不加酶的情况下吸光度是否也降低，以蒸僻水为参比，用移液 管将1.0ml底物溶液和1.9ml蒸僻水滴入一只1厘米比色血，并调水温 至25C。在连续5分钟内240nm处测定吸光度，若吸光度的降低幅度超 过0.01 ,则在计算主值时须减去此值。b）以蒸僻水为对照，实验组：1ml0.18%H2O2+1.9ml蒸僻水+100ul酶液，在 连续5分钟内240nm处测定吸光度。（每隔1分钟读取一次结果，直至 每分钟吸光度的降低值达到稳定为止）c）计

11、算：在上述条件下，每分钟酶促分解1umol过氧化氢的酶量定为1个 酶活力单位。U/mg = E23 /0.0436 x Ew式中：E24卜240nm处每分钟内吸光度的降低值Ek每0.10ml所用酶液中含酶的重量（mg0.0436 240nm处1umol过氧化氢的吸光度3一反应混合液的总体积。4）注意：酶液浓度应为5-20u/ml 8、超氧化物歧化酶SOD （ NBT光还原法 陈建勋）1）原理：NBT在Met和核黄素存在下，照光后发生光化还原反应生成蓝色甲 朕，蓝色甲朕在560nm处有最大光吸收。SOD能够抑制这个还原反应，抑 制强度与酶活性在一定范围内成正比。2）药品配制：a） 50mmol/

12、L PH7.8 PBSb） 220mmol/L Met: 3.2824g Met,用50mmol/L PH7.8 PBS溶解定容至100ml.现配现用，丁4度冰箱保存1-2d.c） 1.25mmol/L NBT（氯化硝基四氮哇兰）溶液：避光现配，0.102gNBT,用50mmol/L PH7.8 PBS溶解定容至100ml.丁4度冰箱保存2-3d.d） 0.033mmol/L核黄素：2.52mg核黄素,用50mmol/L PH7.8 PBS溶解定容 至200ml丁棕色瓶，4度冰箱保存8-10d.3）步骤：反应总体积5ml ,两个光对照，两个暗对照比色时终浓度每个管中：50mmol/L PH7.8 PBS 4.05ml220mmol/L Met300ul13mmol/L1.25mmol/L NBT300ul75umol/L0.033mmol/L核黄素300ul2umol/L酶液50ul对照以缓冲液混匀