总糖和还原糖的测定费林试剂热滴定法

1、总糖和还原糖的测定费林试剂热滴定法目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。实验原理：还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。在碱性溶液中，还原糖能将Cu2* Hg2* Fe3+、Ag埒金届离子还原，而 糖本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类的这种性质常被用丁糖的定性和定量测定。本实验采用费林试剂热滴定法。费林试剂由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫酸铜和业甲 基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，洒石酸钾钠和业铁袱化钾。将一定量的甲 液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH CuSO牛Cu（O

2、H）2+ Na2S。存碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与洒石酸钠反应，生成可溶性 的络合物洒石酸钾钠铜：COOKIH-COH、ICu +2H20HCOHICOONa反应生成的氧化业铜沉淀与费林试剂中的业铁袱化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便丁观察滴定终点。Cu2O + K4Fe（CN）6+ H2OCu2O + K4Fe（CN）6 + H2OK2Cu2Fe（CN）6 +2KOH滴定时以业甲基蓝为氧化一还原指示剂。因为业甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜 离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型业甲基蓝还原为无色的还原型的 业甲基蓝，即达滴定终点。根据样液量可计算出还原糖含量。试剂和器材

3、:COOKH- LOHCU(OH)2十 |H-c-oHCOONaCOOKCOOK|IpLJQH-COH、IHCOH6|Cu+SH9C 6 iHl-C-OH /T_J|HLJC_QHICH2OHCOOH+ (CHQH)+Cu2O|jCOOH+H2CO3一、试剂费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜(CuSO4 5H2O及0.05g业甲基蓝，溶于蒸僻水中并稀释到1000mL乙液：称取50g洒石酸钾钠及75g NaOH溶于蒸僻水中，再加入4g业铁割化钾K4Fe (CN 6,完全溶解后，用蒸僻水稀释到1000mL贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。0.1%葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98100C十燥至恒重的无

4、水葡萄糖，加蒸 僻水溶解后移入1000mL容量瓶中，加入5mL浓HCl(防止微生物生长)，用蒸僻水稀释 到1000mL6mol/L HCl :取250mL浓HCl (35吟38%用蒸僧水稀释到500mL碘一碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸僻水中。6mol/L NaOH:称取120gNaO溜于500mL蒸僧水中。0.1%酚猷指示剂。二、材料藕粉，淀粉。三、器材试管3.0 X 20cm (X 1);移液管5mL(x 2);烧杯100nL( X 1); 250mL锥形瓶；调温 电炉；滴定管25mL(X 1)。操作方法：一、样品中还原糖的提取准确称取1g藕粉，放在100mL烧杯中，

5、先以少量蒸僻水调成糊状，然后加入约40mL蒸僻水，混匀，于50。叵温水浴中保温20min,不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤 液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸僻水定容至刻度，即为还原糖提取液。二、 样品中总糖的水解及提取准确称取1g淀粉，放在大试管中，加入6mol/L HCl 10mL，蒸僻水15mL在沸水浴中 加热0.5h，取出12滴置丁白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解 完全，则不呈现蓝色。水解毕。冷却至室温后加入1滴酚猷指示剂，以6mol/L NaOHS液中和至溶液呈微红色，并定容到100mL过滤取滤液10mL于100mL量瓶中，定容至 刻度，混匀，即为稀释10

6、00倍的总糖水解液，用丁总糖测定。三、 空白滴定准确吸取费林试剂甲液和乙液各5.00mL,置丁250mL锥形瓶中，加蒸僻水10mL从滴 定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s,趁热以每2s 1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄 糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算：F二W式中：F 10mL费林试剂(甲液和乙液各5.00mL)相当丁葡萄糖的量，mgC-葡萄糖标准溶液的浓度， mg/mLV标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL四、 样品糖的定量测定(1)样品溶液预测定：吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL,

7、置丁250mL锥形瓶中，加蒸 僻水10mL加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s,趁热以先快后慢的速度从滴定管 中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。待溶液由蓝色变浅时，以每2s 1滴 的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。 样品溶液测定：吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL,置丁锥形瓶中，加蒸僻水10mL加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的总体积少1mL的样品溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s 1滴的速度继续滴加样液，直至蓝 色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值。五、结果处理还原糖(以葡萄糖计)%=5 mo总糖(以葡萄糖计)%=5 mo mxKxlOOO其中：m-样品重量，g；式中：F10mL费林试剂(甲液和乙液各5.00mL)相当丁葡萄糖的量，mgV标定时平均消耗还原糖或总糖样品溶液的总体积，mL (100ml)V1还原糖或总糖样品溶液的总体积，mL100 - mg换算成g的系数。注意事项(1)费林试剂甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则洒石酸钾钠铜络合物长期在 碱性条件下会慢慢分解析出氧化业铜沉淀，使试剂有效浓度降低。(2)滴定必须是在沸腾条件下进行，其原因一是加快还原糖与Cu2+的反应速度；二是 业甲基蓝的变色反应是可逆的，还原型的业甲基蓝