膳食纤维含量测定方法

1、酶-重量法1.原理：样品分别用 *淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖昔酶进行酶解消化以去除蛋白质和可消化的淀粉。总膳食纤维(TDF )是先酶解，然后用乙醇沉淀，再将沉淀物过滤，将TDF残渣用乙醇和 丙酮冲洗，枯燥称重。不溶性和可溶性膳食纤维(IDF和SDF)是酶解后将IDF过滤，过滤后的残渣用热水冲洗，经枯燥后称重。SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后再过滤，枯燥，称重。TDF、IDF和SDF量通过蛋白质、灰分含量进行校正。2.适用范围AOAC991.43本方法适用于各类植物性食物和保健食品。3.仪器3.1烧杯：400或600ml高脚型。3.2过滤用塔蜗：玻料 滤板，美国试验和材 料学会(A

2、STM ) 40-60叩，Pyrex 60ml(Corning No.36060 buchner ,或同等的)。如下处理：(1)在灰化炉525C灰化过夜。炉温降至130 C以下取出塔蜗。(2)用真空装置移出硅藻土和灰质。(3)室温下用2%清洗溶液浸泡1小时。(4)用水和去离子水冲洗土甘蜗；然后用15ml丙酮冲洗然后风干。(5)在枯燥的塔蜗中加0.5g硅藻土，在130 C烘干恒重。(6)在枯燥器中冷却1小时，记录土甘蜗加硅藻土重量，精确至0.1mg。3.3真空装置：(1)真空泵或抽气机作为控制装置。(2)1L的厚壁抽滤瓶。(3)与抽滤瓶相配套的橡皮圈。3.4振荡水浴箱：(1)自动控温使温度能保持

3、在98+2 Co(2)恒温控制在60 Co3.5天平：分析级，精确至 坦.1mg。3.6马福炉：温度控制在525 J5C。3.7枯燥箱：温度控制在105和130均C。3.8枯燥器：用二氧化硅或同等的枯燥剂。枯燥剂两周一次在3.9 PH计：注意温控，用pH4.0、7.0和10.0缓冲液标化。3.10移液管及套头：容量100和5ml。3.11分配器或量筒：(1) 15 =0.5ml ,供分配78%的乙醇，95%的乙醇以及丙酮。(2)40 =0.5ml，供分配缓冲液。3.12.磁力搅拌器和搅拌棒。4.试剂全过程使用去离子水，试剂不加说明均为分析纯试剂4.1乙醇溶液：(1)85%:加895ml95%乙

4、醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。(2)78%:加821ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。4.2丙酮：4.3供分析用酶：在0-5 C下储存。(1)热稳定 *淀粉酶溶液：Cat. No. A3306 , Sigma Chemical Co. , St.Louis, MO63178 ,或Termamyl 300L , Cat. No. 361-6282 , Novo-Nordisk , Bagsvaerd, Denmark,或等效的酶。(2)蛋白酶：Cat. No. P3910, Sigma Chemical Co.，或等效的。当天用MES/TRIS缓冲液 中现配50mg/ml酶溶液。(3

5、)淀粉葡糖昔酶溶液：Cat. No. AMG A9913 , Sigma Chemical Co.,或等效的。4.4硅藻土：酸洗(Celite 545 AW , No.C8656 , Sigma Chemical Co.，或等效的)。4.5洗涤液：两者挑一。(1)铭酸：120g重铭酸钠Na2Cr2O7 2H20, 1000ml蒸储水和1600ml浓硫酸。(2)实验室用液体清洁剂，预备急需清洗的(Micro , International130 C烘干过夜。Products Corp. , Trenton , NJ08016,或等效的)。用水配制2%溶液。4.6 MES-TRIS缓冲液：0.05

6、mol/L，温度在24 C时pH值为8.2。(1)MES : 2- (N-吗咻代)磺酸基乙烷(No.M-8250 , Sigma Chemical Co.或等效的)。(2)TRIS:三羟(羟甲基)氨基甲烷(No.T-1503 , Sigma Chemical Co.或等效的)。在1.7L的蒸储水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS ,用6mol/L NaOH调pH到8.2,用水定容至2L。(注意：24C时的pH为8.2,但是，如果缓冲液温度在20C, pH就为8.3,如果温度在28C, pH为8.1。为了使温度在20-28C之间，需根据温度调整pH值。)4.7盐酸溶液：0.561mol

7、/L,加93.5ml6mol/L盐酸到700ml水中，用水定容至1L。5.操作方法5.1.样品制备：(1)固体样品：如果样品粒度0.5mm，研磨后过0.3-0.5mm (40-60目)筛。(2)高脂肪样品：如果脂肪含量10%，用石油酰去脂。每克样品用25ml，每次提取完静 置一会儿再小心将烧杯倾斜，慢慢将石油酰倒出，共洗三次。(3)高碳水化合物样品：如果样品干重含糖50%，用85%乙醇去除糖份，每克样品每次10ml，共洗三次轻轻倒出，然后在40C烘箱中不时翻搅枯燥过夜，并研磨过0.5mm筛。5.2.样品消化(1)准确称取双份1.000 =0.005g样品(M1和M2),置于高脚烧杯中。(2)在

8、每个烧杯中参加40ml MES-TRIS缓冲液，在磁力搅拌器上搅拌直到样品完全分散。(防止团块形成，使受试物与酶能充分接触)。(3)用热稳定的淀粉酶进行酶解处理：加1001热稳定的淀粉酶溶液，低速搅拌。用铝箔 片将烧杯盖住，在95-100C水浴中反响30分钟。(起始的水浴温度应到达95C)。(4)冷却：所有烧杯从水浴中移出，凉至60 C。翻开铝箔盖，用刮勺将烧杯边缘的网状物 以及烧杯底部的胶状物刮离，以使样品能够完全的酶解。用10ml蒸储水冲洗烧杯壁和刮勺。(5)用蛋白酶进行酶解处理： 在每个烧杯中各参加100引蛋白酶溶液。用铝箔盖住，在60 C持续摇动反响30分钟(开始时的水浴温度应达60C

9、),使之充分反响。(6)pH值测定：30分钟后， 翻开铝箔盖， 搅拌中参加5ml0.561mol/L HCL至烧杯中。60C时用1mol/LNaOH溶液或1mol/L HCL溶液调最终pH为4.0-4.7。(注意：当溶液为60 C时 检测和调整pH ,因为在较低温度时pH会偏高。)(7)用淀粉葡糖昔酶溶液酶解处理：搅拌同时加100引淀粉葡糖昔酶溶液。用铝箔盖住， 在60 C持续振摇反响30分钟，温度应恒定在60 C。5.3测定5.3.1.总的膳食纤维测定(1)用乙醇沉淀膳食纤维：在每份样品中，参加预热至60C的95%乙醇225ml,乙醇与样 品的体积比为4 ： 1。室温下沉淀1小时。(2)过滤

10、装置：用15ml78%乙醇将硅藻土湿润和重新分布在已称重的塔蜗中。用适度的抽 力把塔蜗中的硅藻土吸到玻板上。(3)酶解过滤，用78%乙醇和刮勺转移所有内容物微粒到塔蜗中。形成胶质，用刮勺破坏外表，以加速过滤。)(4)抽真空，分别用15ml的78%乙醇，95%乙醇和丙酮冲洗残渣各2次，将塔蜗内的残渣抽干后在105 C烘干过夜。将塔蜗置枯燥器中冷却至室温。塔蜗重量，包括膳食纤维残渣和硅藻土，精确称至0.1mg。减去土甘蜗和硅藻土的干重，计算残渣重。(5)蛋白质和灰分的测定：取成对的样品中的一份测定蛋白质，用本书前述或GB-960.52方法测定。用(NX6.25作为蛋白质的转换系数)。分析灰分时用平

11、行样的第二份在525C灼烧5小时，在枯燥器中冷却，精确称至0.1mg,减去塔蜗和硅藻土的重量，即为灰分重量。5.3.2.不溶性膳食纤维测定：(1)称适量样品按5.2进行酶解，过滤前用3ml水湿润和重新分布硅藻土在预先处理好的 塔蜗上，保持抽气使塔蜗中的硅藻土抽成均匀的一层。(2)过滤并冲洗烧杯，用10ml70C水洗残渣2次，然后再过滤并用水洗，转移到600ml高脚烧杯，保存用以测定可溶性膳食纤维，按5.3.3。(3)用抽滤装置，分别用15ml78%乙醇，95%乙醇和丙酮各冲洗残渣2次。(注意：应及时用78%乙醇、95%乙醇和丙酮冲洗残渣否那么可造成不溶性膳食纤维数值的增(注意：如果一些样品大。)(4)按5.3.1.5用双份样品测定蛋白质和灰分。5.3.3.可溶性膳食纤维测定：(1)将不溶性膳食纤维过滤后的滤液收集到600ml高脚烧杯中，比照烧杯和滤过液，估计 容积。(2)加约滤出液4倍量已预热至60C的95%乙醇。或者将滤液和洗过残渣的蒸储水的混 合液调至80g，再参加预热至60C的95%