性激素对系膜细胞增殖的影响

1、性激素对系膜细胞增殖的影响由肾小球肾炎和高血压性肾小球硬化所致的终末期肾功能衰竭中男性 发病率高于女性。多种肾脏病发展男性快于女性力。肾小球硬化包括细胞增殖和细胞外基质合成,我们实验观察性激素对体外培养大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖和基质合成的直接影响。一、材料和方法1 .MC的培养与鉴定：雄性 SD大白鼠4只，68周龄，150200 g,由河 南医科大学动物实验中心提供。MC勺培养与鉴定按谟贻璞等建立的方法进行 2 o2 .性激素对MCJ曾殖的影响：（1）对活细胞计数的影响：将亚培养第五代 MC 种于24孔（10 000个/孔）培养板内，在含0.5%胎牛血清的RPMI-1640液中分别 加入

2、10 nmol/L的雌二醇（E2）、雌三醇（E3）、雌酮（E）和睾丸酮（T）继续培养24 小时、48小时、72小时和7天，空白组不加性激素，仅加一般培养液，台盼蓝 染色后，计数板上计活细胞数。（2）对3H-TdR掺入的影响：将亚培养第五代 MC 种于24孔（10 000个/孔）培养板内，在含0.5%胎牛血清的RPMI-1640培养液中 培养24小时，使细胞同步于 G期，然后分别加入10 nmol/L的E、曰、E和T 继续培养24、48、72小时及7天，空白组不加性激素，仅加一般培养液，收集 细胞的前6小时每孔再加入0.5 pCi 3 H-TdR（中国原子能研究所提供）；再添 加0.02%胰蛋白

3、酶/EDTA液消化细胞30分钟，收集MC于液闪瓶中，液闪仪记录 每孔cpm值。3 .性激素对MC交原合成的影响：将亚培养第五代 MC#于24孔（20 000个 /孔）培养板内，待细胞基本长满孔底后，在含 0.5%胎牛血清的RPMI-1640液中 分别加入10 mmol/L的E和T,空白组中不加性激素，分别于 24h,48h,72h和 7天收取上清液，放免测定其IV型胶原（C-IV）、层粘连蛋白（LAM）含量。试剂盒 由上海海军医学研究所提供。二、结果1.性激素对MCJ曾殖的影响：巳在48小时使MG曾殖50%持续7天。E对 MCt曾殖无影响。已在48小时使MQ曾殖一倍以上。T在48小时对MG曾殖

4、无影 响，但在7天时对MQ曾殖的影响与E2相似，见表1、表2。表1性激素对MCt数的影响（活细胞个数/ml）组别孔数24h48h72h7天1空白组614978± 110730012± 9 3736554± 322143217± 2947E26*19572± 1321*45069± 2138*|57631 ±4073厂一*65384± 3457E613824± 105629987± 135735498± 299842376± 2958E36*22576± 1924*7

5、0132± 3379*84503± 3924*90058± 3946T615012± 110030185± 2546_ , _ _ _ *40544± 2978*64983± 3749与空白组比，* P <0.05 , * P <0.01表2 性激素对M（3H-TdR掺入的影响（cpm）组别孔数24h48h72h7天空白组614732± 117318992± 144723145± 114330251 ±1024E2617254± 1386?*29037±

6、 1987*36766± 3159一 . _ _ _ _ *47157± 3069E614698± 109719011±135822988± 290849983± 2913E36_ . . _ _ *19547± 1227*40059± 2138._ _ . _ _ *51687± 3467*60152± 1423T613992± 108319153± 1747*30284± 2543_ _ . _ _ _ *48254± 3015与空白组比，* P &l

7、t;0.05 , * P <0.012.性激素对胶原合成的影响：巳抑制C-IV、LAM合成，与空白组相比较，24小时、48小时、72小时和7天时C-IV分别减少5% 18% 15%口 17% LAM分别减少3% 22% 28%口 22%上述变化在48小时时有显著性差异（P<0.01）,持续7天。T对C-IV、LAM勺合成无显著性影响（P>0.05）,见表3、表4。表3性激素对C-IV合成的影响（pg/L）组别孔数24h48h72h7天空白组6180.17 ±19.32198.36 ±15.84212.35 ±21.74240.17 ±2

8、8. 49E26170.09 ±11.54*162.14 ±13.32*180.15 ±17.73*200.13 ±21.95T6179.99 ±12.86196.47 ±14.57209.47 ±19.94243.04 ±22.14与空白组比，* P <0.01表4性激素对LA的成的影响（小g/L）组别孔数24h48h72h7天空白组616.53 ±2.2819.32 ±2.2420.17 ±3.2124.63 ±4.32615.92±1.99*15.07

9、±1.93*14.53 ±1.09*19.33 ±2.72T617.01 ±2.5419.92 ±3.2721.12 ±2.0725.01 ±3.04与空白组比，* P <0.01三、讨论近来有报道MG曾殖促进肾小球硬化。在肾脏疾病的发展过程中可能由于性 别的不同导致性激素对 MCE有丝分裂影响的不同。本实验中，我们研究了 巳、 E、E和T对体外培养雄性 SD大鼠肾小球 MQ曾殖的直接影响。E2(10 nmol/L) 在24小时、48小时、72小时和7天刺激MCR和3H-TdR掺入DN4曾力口。在雌 激素中，日显示最强

10、的促有丝分裂活性，E的促有丝分裂作最小，无统计学意 义。T(10 nmol/L)在48小时对MOW一定的促有丝分裂作用，但无统计学意 义。然而，当MOt性激素共同孵育7天后，E2和T的促增殖作用相似。上述结 果与国外作者报道一致 o尽管MCJ曾殖可能促进肾损害，但肾病进程中性腺 相关的差异不能在上述基础上解释，因为E2和T对MCJ曾殖的长期影响相似。有研究表明肾小球细胞外基质积聚可能是肾小球硬化发生的先兆。我们观察到巳在微摩尔浓度时抑制C-IV和LAM成，而T对MO勺胶原合成无影响， 与国外作者报道一致 3 ，但其确切机制未明，需进一步探讨。我们实验研究认为，性激素对 MCft能有直接影响。E

11、2和T对MG曾殖的影 响相同，对MC胶原合成的影响不同。提示雌激素对肾小球疾病进展有延缓作 用。作者单位：刘章锁罗红梅张明轩 郑州，河南医科大学第一附属医院肾内科 450052郭长江河南省医学科学研究所内分泌室闫秀兰河南省济源市人民医院内二科参考文献1 Silbiger S,Neugarten J:The impact of gender on progressive renal functional inpairment.Am J kidney Dis,1995,25:515-517.2 谌贻璞，高进，邢宝才，等. 肾小球系膜细胞培养，北京医科大学学报，1989， 21： 335-336.3 Kwan G,N