分离以尿素为氮源的微生物(上课)

1、此实验课题意义何在？此实验课题意义何在？怎么怎么分离分离出能分解尿素的微生物呢？出能分解尿素的微生物呢？菌种可能在什么环境中较多？菌种可能在什么环境中较多？氮源真的唯一吗？氮源真的唯一吗？ 1、琼脂作为微生物固体培养基不可缺少的组成琼脂作为微生物固体培养基不可缺少的组成 成分，成分，其其优点是：优点是： 其主要成分不能被微生物利用；其主要成分不能被微生物利用； 可使培养基可使培养基固化固化； 不影响不影响培养基中其他营养物质被培养基中其他营养物质被微生物微生物吸收。吸收。2、琼脂的成分、琼脂的成分 琼脂是一种未被纯化的混合物，主要成分为琼脂是一种未被纯化的混合物，主要成分为琼琼脂糖脂糖和和琼脂

2、果胶，琼脂果胶，还含有少量的还含有少量的含氮化合物含氮化合物，及其，及其它有机杂质和不溶性杂质。它有机杂质和不溶性杂质。用用琼脂糖琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂代替琼脂作为微生物培养基的固化剂. . 尽可能使培养基中只含尽可能使培养基中只含尿素尿素一种含氮化合一种含氮化合物，以防止琼脂中的物，以防止琼脂中的含氮化合物含氮化合物被以尿素为氮被以尿素为氮源的细菌利用，有利于对这类细菌的筛选。源的细菌利用，有利于对这类细菌的筛选。对培养基的灭菌方法？对培养基的灭菌方法？G6玻璃砂漏斗过滤玻璃砂漏斗过滤以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基 是是分

3、离分离尿素尿素细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性实验组实验组 对照组对照组培养基类型培养基类型是否是否接种接种 目的目的 结果结果只生长尿只生长尿素细菌素细菌生长多种生长多种微生物微生物是是选择培养基选择培养基平板划线法平板划线法 稀释涂布法稀释涂布法 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先左右，再取样，将样品装入事先灭菌灭菌好的好的信封中。信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。前都要灭菌。制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择性培

4、养基选择性培养基。制备基础培养基。制备基础培养基。移液枪（微量可调移液管）移液枪（微量可调移液管）稀释倍数稀释倍数目的目的细菌细菌10104 4、10105 5、10106 6放线菌放线菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 4 实验中提供的选择培养基的配方实验中提供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中的中，尿素是培养基中的惟一氮源惟一氮源，因此，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。但实际上，微生物的培养是一个非生长。但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他常复

5、杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。要的微生物，还需要进一步的验证。 在在实验中，实验中，酚红酚红作为酸碱指示剂被添加到作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是了培养基中，其变色范围是pH6.4pH6.48.28.2，在酸，在酸性情况下呈性情况下呈黄黄色，碱性情况下呈色，碱性情况下呈红红色，色，这种添这种添加了酸碱指示剂的培养既可以加了酸碱指示剂的培养既可以鉴鉴别和分离别和分离出能出能够产生脲酶分解尿素的微生物，称为够

6、产生脲酶分解尿素的微生物，称为鉴别培鉴别培养基养基。 尿素在被脲酶催化分解前是尿素在被脲酶催化分解前是中性中性的，由于尿素在的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了脲酶的催化下分解产生了NH3NH3，溶液会呈，溶液会呈碱碱性。性。 鉴别培养基鉴别培养基 酚红酚红选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基六、例题解析六、例题解析 例例1 1对细菌群体生长规律测定的正确的表述是对细菌群体生长规律测定的正确的表述是A A在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B B至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C C接种一个细菌接种一个细菌 DD及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 解析：细菌群体解析：细菌群体

7、生长规律的测定生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。是人们在一定条件下进行的。这些条件是：一这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间才能通过样品推测细菌总数。若接种

8、多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。定的接种量。答案：答案：A A例例2 2在微生物群体生长规律的测定中，种内在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是斗争最显著最激烈的时期是A A调整期调整期 B B对数期对数期 C C稳定期稳定期 DD衰亡期衰亡期解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时候，种内斗

9、争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在由此可知，在稳定期稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已经开始减少，目已经开始减少，pHpH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争

10、主要是与无机环物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。境的斗争。答案：答案：C C1.1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ ） A.A.在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B.B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C.C.接种一个细菌接种一个细菌 D.D.及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 2.2.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（ ） A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微

11、生物的特定性状与其他微生物加以区别3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( )( ) A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A AC CD D4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（ ） A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3

12、、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。5.5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（） A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C例例3 3（20052005年江苏）抗生素作为治疗细菌感年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意义。义。青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是是 ， 青霉素是青霉菌的青霉素是青霉菌的 代谢产物。代谢产物。在生产和科研中，常选用处于在生产和科研中，常选用处于 期的青霉菌作期的青霉菌作为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛，为