DNA甲基化对核小体结构的影响ppt课件

1、DNA甲基化对核小体构造的影响报告人：沈伟2019.10.9DNA Methylation Increases Nucleosome Compaction and RigidityJohn S. Choy,Sijie Wei,Ju Yeon Lee,Song Tan,Steven Chu,and Tae-Hee Lee* Department of Chemistry, The Pennsylvania State University, University Park, Pennsylvania 16802, United States J. AM. CHEM. SOC.VOL. 132,

2、NO. 6, 2019 Effects of DNA Methylation on the Structure of NucleosomesJu Yeon Lee and Tae-Hee Lee* Department of Physics, Bio-X Program, Stanford UniVersity, Stanford, California 94305, and Department ofChemistry and Department of Biochemistry & Molecular Biology, The PennsylVania State UniVersi

3、ty,UniVersity Park, PennsylVania 16802 J. Am. Chem.Soc. 2019, 134, 173175 JACS核小体：H2A H2B H3 H4 200碱基对的DNADNA甲基化有什么用？ 同卵双胞胎也有不同 性状不全是由碱基的顺序决议 基因转录以染色质的解螺旋为前提 表观遗传 CPG岛-启动子 CpG甲基化-核小体的构造 了解基因表达 新药开发治疗CpG甲基化有关的疾病 ATTENTION: 癌症共同特征之一： 启动子区甲基化-抑癌基因失活 启动子附近的甲基化CpG岛可防止转录酶结合 转录抑制因子结合甲基化的CpG岛,即经过蛋白的作用致使染色质交

4、联从而阻止转录 另外由于DNA和组蛋白结合在一同，还能够是甲基化改动了核小体的构造甲基化如何影响性状？甲基化如何影响性状？anyway，并不否认前两种假设存在 我们关怀的： 可否证明第三种假设属实呢？-怎样检测？单分子检测更加直观，全面，准确(fuorescence resonance energy transfer,FRET)单分子荧光共振能量转移技术SM FRET measurementsSingle molecule fluroescence intensities were taken with a sensitive CCD camera (iXon+897, Andor Techn

5、ology, Belfast UK) in a prism coupled total internal reflection (TIR) geometry based on a commercial microscope (TE2000, Nikon, Tokyo Japan) with modifications. The excitation is perpendicularly polarized along the TIR incidence.Imaging was done in a buffer with 10mM HEPES pH 7.6, 50mM NaCl, 5mM MgC

6、l 2 ,1mM DTT, 6% glycerol and 0.4% glucose. Glucose oxydase (0.08 U/uL, Sigma Aldrich) and Catalase (2.3 U/uL, Sigma Aldrich) mixture was used to elongate the dye photobleaching lifetime. 荧光共振能量转移效率实际公式主要检测什么？荧光共振能量转移效率实践丈量公式-可以由测得的荧光能量转移效率和求得的常量R0来计算出：能量供体与受体间的间隔R即DNA两端的实践间隔 测得不同的FRET效率 代表不同的DNA实践两

7、端间隔 表示DNA不同的缠绕方式 不同的核小体构造单分子的构建天然凝胶电泳cy3，cy5 channel两种核小体带FRET检测结果蓝色表示FRET效率红色绿色表示荧光强度，即所占数量 FRET 0.29FRET 0.4FRET 0.29-0.4DNA甲基化如何影响核小体构造？ DNA与组蛋白作用的强弱 强那么DNA短，构造封锁 弱那么DNA长，构造松散 除了FRET效率支持这个解释， 荧光的各向异性也可以解释偏振度FRET效率高对应的荧光偏振度也高，阐明核小体构造更严密 进一步的，该课题组做了更深化的研讨发现 CpG基甲基化 DNA严密包裹组蛋白中心拓扑构造的变化。两种不同的核小体构建两种核小体甲基化前后的FRET效率对比601+39核小体甲基化前后偶极子取向角变化conclusion CpG甲基化对核小体的构造的以下影响：