Rh弱D、Del的检测及意义

1、如有你有帮助，请购买下载，谢谢！1页Rh弱D、Del的检测及意义【摘要】 目的：探讨初筛为 Rh(D)阴性样本中弱 D Del 的检测及 临床意义。方法：采用常规血清学方法初筛 Rh( D)血型，用微柱凝 胶抗人球蛋白试验检测弱 D,用吸收放散试验检测 Del，用 PCR-SSP 法检测样本 RhD基因 8 个外显子结构。结果：常规血清学初筛 Rh(D) 阴性 60 例中经微柱凝胶抗人球蛋白试验确认为弱 D4 例，占 6.67%； 56 例 Rh(D)阴性标本经吸收放散试验后确认 13 例为 Del，占 21.67%; 对其中 2 例弱 D 和 5 例 Del标本的 D 基因 8 个外显子检测

2、都完整存在，排除了弱 D Del 的 10 例 Rh( D)阴性标本其基因检测有完全缺失和 部分缺失两种可能。 结论：为了临床输血安全， 常规血清学检测 R(h D) 阴性者，应当再用抗人球蛋白试验或吸收放散试验检测是否为弱D 或Del 。【关键词】 Rh 血型 吸收放散试验 D 抗原 弱 D DelRh 血型在临床输血中具有重要意义，也是人类红细胞血型系统 中最为复杂、最具多态性的系统。D 抗原抗体与输血的关系仅次于 ABO 血型，50%-75%Rh (D)阴性人接受 Rh (D)阳性的血可能产生抗-D, 导致免疫性输血反应。为了减少输血反应，正确检定Rh( D)阴性个体显得非常重要，现将我

3、们的检测结果报告如下。1 资料和方法1.1对象 2006 年 1 月-2007 年 4 月在本院用单克隆抗 -D 检测为如有你有帮助，请购买下载，谢谢！2页Rh(D)阴性的 60 例样本。1.2试剂和仪器1.2.1 RhD 试剂： A、 B2 种人源抗 -D 血清，由本科提供，抗 -D 效价为 1: 256 和 1: 128; a、b、c 三种单克隆（IgM+IgG）抗-D 分别 为加拿大Dominion公司 （批号为NDMGO4203德国Biotest公司 （批 号为1210905）和法国 DIAGAST 公司（批号为 410000）产品，由长春 博德生物技术有限责任公司提供，均在有效期内使

4、用。1.2.2DNA 制备：用 TakaRa（大连宝生物工程有限公司产品）基 因组 DNA 抽提试剂盒，扩增 RhD 基因 27、9、10 共 8 对外显子。1.2.3“ 0”型 RhD（+）试剂红细胞：随机取已知 Rh（D）阳性“ O 型红细胞 3 份，洗涤 3 次后混合配成 0.8%红细胞悬液，当天配制。1.2.4仪器：微柱凝胶抗球蛋白反应卡、 专用孵育器、 离心机均 由瑞士达亚美公司提供。1.3 方法 Rh （D）常规血型血清学初筛采用盐水试管法，按人类红细胞血型学实用理论与实验技术操作；弱D 检测采用微柱凝胶间接抗人球法，按照说明书操作; Del 检测采用阴性标本与两种不同 来源的人源

5、抗-D 血清（A、B）和三种不同批号的单克隆抗-D（a、b、c）作吸收放散试验， 按人类红细胞血型学实用理论与实验技术 操作； D 基因外显子检测采用序列特异性引物 PCR（ sequence specific primer polymerasechain reaction , PCR-SSP,按照说明书操作。2 结果如有你有帮助，请购买下载，谢谢！3页初筛为 Rh（ D）阴性的 60 例样本，检出弱 D 4 例，占 6.67%;排 除弱 D 的 56 例 Rh （D）阴性标本，检出 Del 型 13 例，占 21.67%;其 中 2 例弱 D 5 例 Del 型标本 D 基因 8 个外显子（

6、2、3、4、5、6、7、9、10)检测都完整存在(见图 1)，排除了弱 D、Del 的 10 例 Rh(D) 阴性标本其基因检测有完全缺失和部分缺失(见图2)。3 讨论Rh 血型中 D 抗原因能引起溶血性输血反应及新生儿溶血病而倍受重视，根据 D 抗原的数量和质量及抗原性不同的差异，可分为 5 种:D (常见的 D 抗原)、弱 D(WeakD)、表位不完全型 D( Partial D)、表 位不完全型弱 D 增强 D。正常 D(+)红细胞表面约有 10 00030 000 个抗原表位，弱 D型表位仅 704 000 个；弱 D 表现型的分子生物学 基础主要是点变化引起的 RhD 膜内或跨膜区域

7、而非细胞外的氨基酸改 变，这些突变影响 Rh(D)蛋白插入膜的效率，进而影响膜上的 Rh(D) 蛋白的数量，反映在这些红细胞上的表现是 Rh(D)抗原数量的下降， 这也是弱 D 表现型需要用间接抗人球蛋白试验来鉴定的原因。据文献 报道，有 0.2%1%的人和更多的非洲裔美国人 D 抗原减弱1;本资 料发现 4 例弱 D 表现型，即盐水法凝集反应为阴性，而微柱凝胶间接 抗人球法阳性，占初筛 Rh( D)阴性的 6.67%,与文献2报道基本一 致。Del 型有非常弱的 D 抗原，是一种只能通过吸收放散试验才能检出的 Rh(D)血型，还可以在约 20%勺 Rh 阴性个体中检出3。文献报 道称此个体在湖北地区占 22.67%4 ,海南地区占 29.25%5 ,云南地 区占20.65%6，安徽地区占 15.6%7;本组资料中 Del 型占 21.67%, 与云南地区如有你有帮助