食品中菌落总数的测定实验

1、食品中菌落总数的测定实验1、 实验目的：了解稀释平板计数的原理, 掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法 5认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。2、 原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每 个 单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落， 即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可 换算出样品中的含菌数。 但是， 由于待测样品往往不易完全分散成 单个 细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使

2、用菌落形成单位(colony-forming units, cfu) 而不以绝对菌落 数来表示样品的活菌含量。该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而 且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以 获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水 等含菌指数或污染度的检测3、 试剂和材料4 ?仪器恒温培养箱： （ 36 C 士 1 C, 30 C 士 1 C 。 ）均质器或振荡器无菌吸管： 1 ml （0.01 ml 刻度）、 10ml （0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸头无菌锥形瓶：容量250 ml 、 500 ml 、无菌培养皿：直径9

3、0 mm菌落计数器2 ?样品1 ）平板计数琼脂（ plate count agar ， PCA 培养基：蛋白豚5.0 g 、酵母浸膏2.5 g、葡萄糖1.0 g、琼脂15.0 g 蒸馆水1 000 ml、pH 7.0 ±0.2。将所有成分加于蒸馆水中，煮沸溶解，调节 pH 分装试管或锥形瓶-121 C 高压灭菌 15 min o 注： 用平板计数琼脂， 称取 23.5 g 于 1 000 ml 蒸镭水中， 加热煮沸至完全溶解，121 C 高压灭菌 20min ，冷却至 45-47C左右备用。2 ）无菌生理盐水：氯化钠（ NaCI ） 5.875g 蒸憾水（纯净水）500ml 称取 5

4、.875 g NaCI 溶于 500ml 蒸馆水中， 121 C 高压灭菌 20min 。3?器材100ml 无菌水、 9ml 无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。四、操作及实验步骤1 ?样品的稀释：25 g （ml）样品+225 ml稀释液，均质。10倍系列稀释。每递增稀释一次，换用 1次1 ml无菌吸管或吸头。（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）选择2个？ 3个适宜稀释度的样品匀液，各取1 ml分别加入无菌培养皿内。吸取 1 ml空白稀释液 作 空白对照。每皿中加入15 ml? 20 ml平板计数琼脂培养基，并 转动平 凡 使其混合均匀。2?培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ± 1 C培养48 h 士 2 h。水 产品30 士 1 C培养72 h ± 3 h 0 （如果有弥漫生长的菌落时，可 在凝 固后的 琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 ml ）,凝固后翻转平 板。）成单位3.菌落计数：记录稀释倍数和相应的菌落数量菌落计数以菌落形(colony-forming units,CFU表示。+ 0,1 n2 ） d五、计算公式： 式中：N样品中菌落数；刀C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和n1 第一稀释度（低稀释倍数）平