RocheLightCycler中文操作说明

1、LightCycler480中文操作说明罗氏医学仪器公司/应用科学部门February 2008目录1 .启动机器与软件32 .软件设定一开启新实验53 .样品编辑94 .结果分析125 .报告186 .数据转移至其它计算机（数据输出与输入）197 .使用者管理19启动机器与软件?启动机器1 .机器主开关位于机器右后方。2 .机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯 （右）由闪烁橘色灯转 变成稳定橘色灯，警示灯（左）由橘色转变成绿色（约三分半钟），表 示机器已经启动完成。左警示灯右警示灯机器状态橘*闪烁*橘*闪烁*正在初始化绿橘机器启动完成96/384孔盘还未放入绿橘*闪烁*96/384孔盘正

2、在放入中绿绿机器启动完成96/384孔盘已经放入绿*闪烁*绿*闪烁*实验进行中3,按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之 96或384孔 盘。放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。?启动软件1 .开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入WindowsoUser name: OPERATORPassword: LC4802 .开启LightCycler 480软件，并输入正确的使用者与密码:.软件设定-开后新实验?设定新实验1.软件开启后，会进入主画面。点选New Experiment”。m LhlCycleru 480 Softwar? release 1.2.0rO625Woidow；

3、I OverviewLightCycler 480 Software release 1.2.0.0625Version 12.0.109Macros L Filter-Test IDLot ID2,出现实验设定窗口 按钮。任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的5立. ActaniH 1#瓜*，彳网我3国港田L上刀而，!：i_1j jmai : u_L lB皆E*W：I ItA4r IEii|PiiiW*iriEuLf! IL |三I tw-nK 出呢k W火Sa. ：0 MlDC：QOS 10 C；Q7；1C?点选各个program即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说明 书来设定，利用

4、十与增加或删除步骤。需要设定的参 数包含 Target ( C )目标温度， Acquisition Mode (荧光侦测模 式)，Hold (hh:mm:ss)停留时间。Ramp Rate (C/s)为升降温速 度，范围如下：Ramp Rate (C /s) Heating up Cooling down96-well Block1.0 -4.4 C/s1.0 2.2 C/s384-well Block1.0 -4.8 C/s1.0 - 2.5 C/s?若设定温度低于50 C,请把Ramp Rate调整成1.5C/s (96 well)或 2.0 C/s (384 well)。5 .将实验步

5、骤储存成 Template以便下次进行套用。点选左下角Save As Template”即可把止匕步骤储存起来。6 .若要进行套用时，请直接点选窗口左下角Apply Template ，选择欲套用之实验步骤 即可。7 .设定完成后点选 Start Run ”开始进行实验。?实验进行中会进入另一个 Data窗口，窗口下方按键功能如下:? End Program :结束此 Program,进入下一个 Program。? + 10 Cycles :实时增加循环数目。? Abort Run :马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结 果将不储存。8 .跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。

6、三.样品编辑?将样品分群1 .点选窗口左边的 Subset Editor”。2 .点选New”新增新的群组，并将其命名。3 .利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角Apply，此时被选取的样品位置会呈现实心的蓝色，如下图。4 .以此方式依序将所有样品群组编辑完毕。?样品必须分群才能够独立分析，但是样品是否分群并不影响样品 的Cp值。?编辑样品名称hcnpl. LH，日mfri Hm-bonipM ILfLiMbi小1LdrtDFFIHtYiiMJw：2,输入每个位置之样品名称（Name内重复门1咐，她沔:D3SflPhwjt: llUil 3-uslff11亍i-y min 12匚心rl

7、fWlUk Qvanl1c制即匚。mpI at ID|hew Fhperinwrrt(Repl. Of)。1.点选窗口左边的 Sample Editor”。Pfigrjiin N加gLnLCL&i 1上门耳：粒*1工自力SutKSHL EdEMSdinnplEGSin 叫rpHgmLng ucw esollag用由I QuantTm CallingSWTiptMas.第 hv 工 m iA2 aaEiplc N3,若要更快速输入,Fi rst duF l 3 可直接在左边的图上点选欲编辑之样品:Samples口? 若A1, A2与A3为三重复，在 A2与A3 Repl. Of字段上都填上 A1

8、 即为三重复。?在编辑过程中，可利用Ctrl+C复制文字，Ctrl+V 贴上文字。4.根据实验分析模式，编辑 Abs Quant （绝对定量），Rel Quant （相对定 量），或 Genotyping 分页，设定 Sample Type绝对定量（Abs Quant）:Sdinple TypeUnknownHRIIMHI IIVII IMHiami mi IIFHIII HI iiiviUnknown1 bvi iaa ,. am mhbi Mla raaa-ar amSr.andardUnknown：未知浓度样品Standard :已知浓度标准品相对定量(Rel Quant):Sample

9、 Type Cone, et Unknewn Target Unknown Target Callfcranor Target Standard Target Wecjatxve Reference Unknown. Reference Calibrator Pefereace Standard Reierenjce Negative JL ULJ-廿 J 33|Target：目标基因 Reference :参考基因Calibrator:Control 样品 Standard :已知浓度的样品 Unknown：未知浓度样品?其它分析模式之分页在此不赘述，请自行参考 LightCycler 48

10、0 Instrument Operator slManua5,若设定成 Standards之样品请输入浓度。6.若想要将此样品编辑储存成 Template,可点选窗口左下角Save AsTemplate”即可，下次实验时可点选Apply Template ”进行套用。ApplyTemplatelbba jjaALtL4 aaaau.i i. rSave AsTemplate3四.结果分析?点选左边的Analysis”，选取分析模式，并选择所需分析之群组，如下图：|fr-i|v |ji； N q-clhri!*pM24WLllAiUJWin 如.西|网0. I gEEirhxt 5-Jibi D

11、e. l-*e- (1*-1合PqHGqE CgiTpfLWi L!hCb db ScMiw.in4gaKLTVdns 怔 “mTi 4J.llJbg|R)1.3.ikm. a. Ii|r i分析模式说明Abs Quant / 2nd Derivative MaxAbs Quant / Fit PointsColor CompensationGene ScanningGenotypingRelative QuantificationTm Calling绝对定量（自动法）绝对定量（手动法）色差校正（多色实验校正用）基因扫描（适用于High ResolutionMelting Curve, HRM

12、 分析）基因分型（适用于HybProbe之基 因分型实验）相对定量Tm分析绝对定量(Absolute Quantification)1.点选下方的Calculate”即可得至U样品之Cp与标准曲线WiZd HgMAE 画 44Jd JIM / Ml Umm tied-*1 1Inrfnm-inliDin备 iilmK|lQmrn(il4ii, (Tr Jic.4i aJblai)二。116例阖|酬 ftillnencencrai5 葡n-g HaimCl* NcdHn1 ,D1a.u自4 u二口0ft 上*卡 口 guitdrILLIl 1 1 雷hy篮a E. C& I i 09 l r H

13、cfcrcicv C F3L# E TarEt Un.ii E, JO jC-Eeare V llj 1Z Target On.An K4- Wi 腼足* U 1* r 誉:rn上 Oncii Hl 1 . E刷i MiaHUT步四M口 iTDFhzIm .061/10 .01UICL AVI口vn,1JJL1 1DCK； 力 OE-l ： 畀 i.K-J : flIV NdIe31-1*ppiyx-z a.6.数值和图形输出与绝对定量相同（请参考绝对定量）?基因分型(Genotyping)1,进入基因分型的窗口中。jt pw“jw U JUfc/当Pirt-vraMiL Vkhul Ljil

14、MK-vcl-rK WU Jt4 Nkjt CtmnKKliMJDaAatwo： My CEmi|wiini*0* fi一-P 呵1Hr shm FT*r山八r女药口 r hum p*南 mintFL -SflBVlE 1K RHiL.4IH f 土Mi.j，i 网N Frpl cE SST71E 2H * L t iGHllfi 1F N4Utlfi ) ffl F*：i! rf FwnlF M? EL CE 3OT71E，I叼 P“ii +TmH w膈妙AS.S4 行.仃CfB79g7口 出小0.71KA卬 .al间尊收审呷.，Flhf Cirih.| Ubii Cfihfk I _ if

15、 Mni Pia Jta | lbPHlik 13 I, g WJI. R.H. . .2,确认波峰数目niiiMHian rri lii aiiiar-aii iiHiii n viiSiiii!ii inMax Peaksg“一”4,点选 Calculate即可得到每个样品之 Tm值五.报告（Report）1 .将分析后结果储存后即可点选报告键数据储存2 .勾选想要呈现的报告内容。3 .点选Generate”即可产生报告。4 .点选PDF”即可将此报告储存成.pdf档案格式翦i 图 Cfinpirttr句声AiIhIIiSiiirtiin HU BamtiLHJmhI I 口d B 3 M0M 1H FifeHTtEfTl3 PkriKDi0 5pmI Inwiwnl 0 Fsiai Hst 叮-d ijuuitidDeih1k SeTI呻舟因Mr sh备“wllg囱匚Iillff |T ll IIXI$1TifflpUrtHI六.数据转移至其它计算机(数据输出与输入)?数据输由1