内蒙古高校科研项目申请书

1、附件2A表：内蒙古自治区高等学校科学技术研究工程申请书工程类别(在相应选项上划,)1、自然科学研究(V)重点工程()一般工程()自筹经费工程2 、人文社会科学研究()重点工程()一般工程()自筹经费工程学科门类：二级学科课题 名称：甘露糖结合凝集素基因多态性及血清表达与COP0者急性加重的相关性研究工程负责人： 孙丽蓉所在 学校：包头医学院第二附属医院申请日期：2021年8月14日内蒙古自治区教育厅科学技术处制2021年6月填表说明1 .学科门类根据国家质量技术监督局 1992年公布的?学科分类与代码?,填写一级和 二级学科.2 .申请书一律用A4纸双面打印,于左侧装订,A表一式1份,B表一式

2、5份.3 .本表各栏除特别规定外,均可以自行加行、加贡.4 .为填报内容提供的证实材料,统一装订在申请书最后局部.工程负责人承诺我确认本申请书及附件内容真实、准确.如果获得资助,我将认真履行工程负责人职 责,积极组织开展研究工作,合理安排研究经费,按时报送有关材料并接受检查.假设申请 书及附件内容失实或在工程执行过程中违反科研工程治理的有关规定,本人将承当全部责 任.负责人签字：孙丽蓉20 1 4年08 月14日工程依托学校承诺已经根据工程申报要求对工程申请人的资格及工程申请书内容进行了审核.工程如获 资助,我单位将根据教育厅要求和工程申请书内容,落实工程研究所需配套经费及其他条 件；根据科研

3、工程治理有关规定,认真履行工程承当单位的治理责任.学校公章20申 请 者姓名孙丽蓉性别女出生年月1962.10.19职称教授所在院系包头医学院第二附属医院呼吸科职务科主任最后学历硕士研究生最后学位硕士外语语种英语外语水平国家六级专业领域COPD通讯地址包头医学院第二附属医院呼吸科邮政编码014030办公动程组其他成员情况不包括工程负责人,最多不能超过9人姓名职称年龄所在单位专业工程分工签名苏日娜住院医 师28岁包医第二附 属医院呼吸内科工程实施张毅主治医 师34岁包医第二附 属医院呼吸内科统计数据马显军主治医 师31岁包医第二附 属医院呼吸

4、内科收集资料高扬副主任 医师41岁包医第二附 属医院呼吸内科收集资料李水霞主治医 师35岁包医第二附 属医院呼吸内科收集资料孔祥成住院医 师28岁包医第二附 属医院呼吸内科整理资料李冬梅副主任 医师45岁包医第二附 属医院呼吸内科整理资料申请者承当省级以上工程及完成情况工程批准单位工程名称批准时间是否完成内蒙古科研工程Il-1、IL-6基因多态性与 COPD 肺动脉高压相关性研究2021是申请者本人进三年来的主要研究成果：1、eNOSS因多态性与COPD市动脉高压相关性研究?中华结核和呼吸病杂志?2、人B防御素1基因多态性与慢性阻塞性肺疾病关系的研究?医学研究杂志?3、IL-1,IL-6 的基

5、因多态性与COPD市动脉高压的相关性研究?医学研究杂志?4、COP陈统性炎症与原发性高血压的相关研究5、COPW动脉弹性与血管内皮功能的关系?临床肺科杂志?6、COP陈统性炎症与大动脉弹性的相关性研究?国际呼吸病杂志?工程方案进度第一阶段：查找资料,拟定题目(2021.1-2021.03 )第二阶段：采集标本,订购试剂及预实验(2021.4-2021.06 )第三阶段：预实验(2021.07-2021.09 )第四阶段：实验阶段(2021.10-2021.09 )第五阶段：数据整理,实验结果分析(2021.10-2021.12)工程成果形式慢性阻塞性肺疾病的发病率及死亡率逐年上升,是一种具有气

6、流受限特征的疾病,气流受限不完全可逆,呈进行性进展,与对有害气体和有害颗粒的异常炎症反响有关. 急性加重在COPLB者的发病和死亡中起着关键作用,频繁的感染引起 COP反复急性发 作,导致肺功能下降加速、合并症的发生、住院,.以致致残,导致生活质量的降低因此, 这种疾病带来了巨大的经济及社会负担.甘露糖结合外源凝集素( MBL是凝集素途径活 化补体中的一种关键分子.其主要作用是在血浆作为一种模式识别受体,通过结合暴露 在侵入细菌外表的甘露糖引发先天性免疫防御反响.从而起到反抗外界微生物感染的作 用.COP或基因多态性会引起 MBLf£成下降.从而引起COPD、性加重.MBL缺乏的CO

7、PD&者感染加重的频率以及临床预后的作用目前尚未完全明了, 因此本研究旨在分析MBL!因多态性与COPA、性力口重的关系,为COPIW治提供依据, 进而起到减轻其经济及社会负担.B表：内蒙古自治区高等学校科学研究工程匿名评审书工程名称|甘露糖结合凝集素基因多态性及血清表达与 cop西者急性加重的相关性研究 起止时间 2021.1-2021.12研究方向|慢性阻塞性肺疾病一、本工程国内外研究现状及趋势,研究本课题的实际意义和理论意义限1000字慢性阻塞性肺疾病COPD的发病率及死亡率逐年上升,根据 2002年的统计数据, COPD：列世界上第四大主要死亡原因之一.感染在 COPD&

8、;者的发病和死亡中起着关键作 用,频繁的感染引起COP反复急性发作,导致肺功能下降加速、增加住院以及死亡率. 因此,这种疾病带来了巨大的经济和社会负担.因此需要了解COPDI者的感染易感性,为COPM治提供依据,提升患者生活质量,减轻其经济及社会负担.慢性阻塞性肺疾病,是一种具有气流受限特征的疾病,气流受限不完全可逆,呈进 行性进展,与对有害气体和有害颗粒的异常炎症反响有关.COPD勺发生及开展是环境、遗 传等多种因素共同参与的结果.比拟确切的原因有感染、吸烟、职业性粉尘和有害气体的 长期吸入、过敏等.目前文献阐述最为详尽的COPEft传因素是遗传性a1-抗议蛋白酶缺乏 症.频繁的感染,引起

9、COPDS复急性发作,增加患者的住院及死亡率.本项研究将讨论 MBLS因多态性,甘露糖结合外源凝集素MBQ是凝集素途径活化补体中的一种关键分子. 其主要作用是在血浆作为一种模式识别受体,通过结合暴露在侵入细菌外表的甘露糖激 活补体系统.研究发现 MBL2®因外显子1区的第54位密码子的多态性,由甘氨酸被大冬 氨酸所替代所致,其基因多态性导致血清 MB冰平下降.国外Dahl M等研究发现缺乏 MBL等增加COPD哮喘等疾病的易感性.研究发现 MBL 在黏液防御屏障中起着很重要的作用,并且出现在肺炎患者的支气管肺泡灌洗液中.很 多研究发现由MBL2基因第54位密码子的多态性引起的 MBL

10、M乏与COPD&者住院有着非 常强的关联,这种缺乏同样也与反复呼吸道感染有关.Yang IA等研穷发现MBLM乏会增加感染风险.MBL2®因编码区及启动子区的核甘酸多态性会影响血浆MB冰平.MBL下降与儿童呼吸道感染频率、肺部感染、成人中系统性红斑狼疮和侵入肺炎链球菌等疾病的发 生有关.在囊性纤维化中MBL2F降会增加肺功能受损程度及死亡.MBL缺乏在COPD患者感染加重的频率以及临床预后中的作用目前尚未完全明了,因此本 前瞻性研究旨在评估它们关系,从而将研究结果效劳于对COPD勺诊治上面.关于此项研究目前国内尚无相关性报道.二、工程研究的内容,预计突破哪些难题限 1000字

11、1、研究内容1、研究对象：病例组：选自包医二附院呼吸科住院 COP圜者,年龄与性别不限,COPDt符合2021 年中华医学会呼吸病学会修定的 COPDi断标准使用支气管舒张剂后 FEV1/FVC 70%.同时排除原发性高血压、冠心病、糖尿病、月中瘤、肝肾功能异常.并根据慢性 阻塞性肺疾病患者的病症、肺功能分级、急性加重的风险来综合评估.急性加重期需符合呼吸困难、咳嗽、咳痰、气短喘息等病症短期内明显加重超过日常变异范围,需要调整COPDI者的治疗方案.对照组：我院健康的体检者,无 COP刖史,无心、肝、肾疾病史,体检、常规化验无异常.2研究方法：根据急性加重次数分组：将本项研究中纳入的 COPD

12、&者分入2个组：一个组为反复加重者,入选2年内感染加重发作的平均次数?2次.另外一个组为入选2 年内感染加重的平均次数 2次的患者.MBLS因多态性的检测：每位受试对象均被抽取空腹静脉血2ml,放入血常规中,EDAT抗凝,-20 C冰柜可长时间保存.用盐析法提取白细胞中的基因组 DNA以SD 裂解白细胞,蛋白酶K消化蛋白和乙醇沉淀获得基因组 DNA利用聚合酶链反响-限制性片段长度多态性PCR-RFLP技术分析MBL2®因外显子1区的第54位密码子的多态性.MBL1因第54号密码子存在GGC/GAC变异,表现为野生纯合子 A/AGGC/GGC杂合子 A/BGGC/GAC变异型纯

13、合子 B/BGAC/GAC PCRK应引物参考文献设计.PCR反响体系:10 X 扩增缓冲液 5ul ; 0.2mMdATP dCTR dGTP dTTP 5ul ;上游引物5' 一5UM 各 2.0ul ;GTAGGACAGAGGCATGCTO引物3'-CAGGCAGTTTCCTCTGGAA耐热DN臊合酶1.0U; DNA真板1.0ul .扩增条件为94c预变性3min,其后94c预变性 3min、55c退火1min、72c延伸1min,共35个循环,最后72c延伸7min.酶切反响体系：10X内切酶缓冲液2.0ul , PCFT增产物8ul ,加BanI酶1.0ul ,灭菌

14、去离子水9.0ul总体积20.0ul混匀,37c水浴6小时.酶切产物用2啾脂糖凝胶电泳,在紫外投射仪 中观察记录并拍照,分析并判断基因型.10hMBLt度的测定：所有处于稳定的COP的人及对照健康人均经禁食及无吸氧 后,于6:008: 00AM肘前静脉采集外周血标本.血液经 4000r/min离心除去血细胞, 所有血清标本保存于-70oC待测.采用MBL的ELISA试剂盒采用固相酶联免疫法检测血 M MBLW质量浓度,在450nm紫外线灯下读吸光值.2、预计突破难题：1) MBL-2基因多态性的检测2) MBLM度的测定3) MBL-2基因多态性与血清MBLM度的关系4) MBLM乏组的定义5

15、) )严格执行同一标准的诊断标准和入选排除标准,严格按实验流程操作.三、现有研究根底,课题组开展此项研究具备的条件限 500字1 .申请者本人主持了 vveNOSS因多态性与COPD市动脉高压相关性研究 >> , <<慢 性阻塞性肺疾病合并肺动脉高压患者 eNOSS因多态性分析 >>, <<人B防御素1基因多 态性与关系的研究>>,<<COPIW动脉高压与内皮型一氧化氮合酶第四内含子 VNTR；态 相关性研究>>,<<IL-1,IL-6 的基因多态性与COPD市动脉高压的相关性研究 >冷科研

16、工作,并在国家级、省级刊物发表论文十余篇,积累了丰富的临床、科研经验.2 .课题组人员结合专业知识、通过反复查阅国内外文献资料,对本研究的国内外研 究现状及趋势,研究本课题的实际意义和理论意义有了较全面的熟悉.3 .具备专业的分子生物实验室.4 .已具备的实验条件及资料：肺功能仪、微量移液器、PCRT增仪、照相机、低温冰箱、电热恒温水槽、酶标仪、研究对象充足.四、研究思路、工作方案、技术路线(限 600字)1、根据急性加重次数分组：将本项研究中纳入的COP圜者分入2个组：一个组为(反 复加重者),入选2年内感染加重发作的平均次数?2次.另外一个组为入选2年内感染 加重的平均次数 2次的患者.2

17、 、MBL基因多态性的检测：每位受试对象均被抽取空腹静脉血2ml,放入血常规中,EDATB凝,-20 C冰柜可长时间保存.用盐析法提取白细胞中的基因组DNA以SDS裂解白细胞,蛋白酶K消化蛋白和乙醇沉淀获得基因组 DNA利用聚合酶链反响-限制性片段长度多 态性(PCR-RFLP技术分析MBL2®因外显子1区的第54位密码子的多态性.MBL1因第54 号密码子存在 GGC/GAC勺变异,表现为野生纯合子 A/A(GGC/GGC)杂合子 A/B(GGC/GAC) 变异型纯合子B/B(GAC/GAC) PCRg应引物参考文献设计.PC网应体系：10X扩增缓冲液 5ul ; 0.2mMdAT

18、P dCTP dGTP dTTP 5ul ;上游引物(5' GTAGGACAGAGGCATGCTC-3 游引物(3'-CAGGCAGTTTCCTCTGGAAG(D-25uM 各 2.0ul ;而寸热 DN咪合酶 1.0U; DNAf 板1.0ul.扩增条件为94c预变性3min,其后94c预变性3min、55c退火1min、72c延 伸1min,共35个循环,最后72c延伸7min.酶切反响体系：10X内切酶缓冲液2.0ul , PCRT增产物8ul ,加BanI酶1.0ul ,灭菌去离子水9.0ul总体积20.0ul混匀,37c水浴 6小时.酶切产物用2啾脂糖凝胶电泳,在紫外投射仪中观察记录并拍照,分析并判断基 因型.3、MBLt度的测定：所有处于稳定的COPDI人及对照健康人均经禁食及无吸氧 10h后, 于6:008: 00AM肘前静脉采集外周血标本.血液经 4000r/min离心除去血细胞,所有血 清标本保存于-70oC待测.采用MBLB ELISA试剂盒采用固相酶联免疫法检测血清 MBLB质 量浓度,在450nmK外线灯下读吸光值.五、工程经费预算单位：万兀工程经费总额1 5万|申请资助数额配套资金数