细胞培养实验器材的包装和消毒

1、细胞培养实验器材的包装和消毒 一.包装 包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭遇污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，应严格包装后再举行消毒灭菌处理。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、金属盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。包装分为局部包装和全包装两类，前者用于较大瓶皿，普通用硫酸纸和牛皮纸等将瓶口包扎好；后者适于较小培养瓶皿、吸管、注射器、金属器械和胶塞等，以下为常用瓶皿、吸管、无菌衣帽等的包装办法，其他物品可参照处理。 1瓶皿类纸罩以瓶口，外罩两层牛皮纸用绳扎紧。 2小平皿、胶塞、刀剪等器械可装入金属饭盒再以牛皮纸包装，绳扎好。 3吸管、滴管类吸管和滴管的接口塞堵上脱脂棉（松紧度相宜），装入消毒

2、筒内；滤器、滤瓶、橡皮管等都要用牛皮纸包瓶口等，外罩一层牛皮纸包好，再用方型包布包好，绳扎好。 4无菌衣、帽、口罩，均以牛皮纸或包布包好，绳扎好。 目前，多数试验室都采纳一次性的商品化用材，包括无菌衣、帽和口罩，一次性培养板和瓶皿等（表1-2），免去了上述繁杂的处理过程，用法便利。 二.消毒灭菌 消毒与灭菌贯通组织细胞培养的各个环节，必需严格仔细，以防发生污染。包括操作面与空间、培养器具和培养用液的灭菌等。其办法分为物理法、化学法和生物法等。物理法指干热、湿热、滤过、紫外线及射线等；化学法指用法化学消毒剂和防腐剂等：生物法指应用抗生素和抗真菌剂等。 1干烤适用于玻璃器皿，160170,9012

3、0分钟或1804560分钟。金属器械、橡胶和塑料制品不能用法。 2高压蒸气灭菌用于玻璃器皿、滤器、橡皮塞、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等。因物品不同其有效灭菌压力和时光不同，如某些培养用液、橡胶制品、塑料器皿等用68kpa(115）高压灭菌10分钟；布类、玻璃制品、金属器械等用103kpa(121.3）高压灭菌1520分钟。压力与温度的相关性见表1-3。 清洗器材包装灭菌后简单浮现消毒的与未消毒的互相混淆，为了防止混淆带来的严峻后果，可在包装后，用密写墨水在包装表面做好标志，即用毛笔等蘸水以密写墨水密写墨水的配制：氯化钻（coc12·6h20)2g,30l0ml,蒸馏水8

4、8ml在包装上做一记号，未经灭菌的这种墨水不带痕迹，凡经高温处理后，密写墨水即浮现字迹，从而可以判定它们是否消毒灭菌过。 3.滤过除菌适用含有不耐热成分的培养基和试剂的除菌，用孔径为200450nm大小的滤板可除去细菌和真菌等，用200nm孔径的滤板通过两次，可使支原体达到某种程度的去除，但不能除去病毒。 滤器分为抽滤（负压）式和加压式两种，抽滤式滤器与抽滤瓶相连，用真空泵抽气形成负压使液体滤过。因为抽气造成负压抽吸，用法时要注重防止倒流而引起污染，关键是在抽气时应使气体缓慢回流，即先用止血钳夹住抽气管后再关机，防止气体回流；加压式滤器为密闭式容器，加人待滤过的液体后，通过气体（通常用n2,0

5、2或c02）造成容器内压力将液体滤过，用法时注重压力不得过大，不应超过20kpa。常用滤器有： (1)蔡氏滤器：蔡氏滤器为不锈钢的金属结构，中间夹有一层石棉制成的一次性纤维滤板，滤板有一定厚度，承压力较好，是过滤血清等黏稠液体较抱负的滤器。滤板规格为eks1,eks2,eks3等，国产板分甲1、甲2、甲3，eks3与甲3除菌效果好。 (2）玻璃滤器：该滤器为漏斗状的玻璃制品，中间是一层高温烧结的玻璃滤板，固定于漏斗的内壁上。规格为g1g6，其型号的孔径大小与用途见表1-4。细胞培养普通采纳g5和g6，过滤时滤器的过滤装置见图1-5，可用于过滤除血清等较黏稠液体以外的各种培养用液，可有效过滤除菌

6、。玻璃滤器只能采纳抽滤式，而且抽滤的速度较慢，滤器的清洁与灭菌处理较棘手。 (3）微孔薄膜滤器：当需滤过的溶液是很难得到并且其量很少时，可选用注射器微孔薄膜滤器，结构与蔡氏滤器一样，中间夹着一层很薄的纤维素酯薄膜，其孔径规格有600nm,450nm和220nm三种，以220nm薄膜滤过除菌的效果最好。因为滤膜较薄且光洁、易移动，滤器的上、下层相应部位各设一个凹槽以放置一硅胶垫圈，便于固定滤膜。安装滤膜时应注重正确放置，而且要将滤膜的光面对上，滤器不宜安装过紧，以免将滤膜挤压破碎。当用微孔薄膜滤器过滤较大量（5001000ml)液体时，可选用直径为10cm或15cm的滤器，通常用法两层滤膜，上层

7、为450nm，下层为220nm，以确保过滤平安牢靠。若过滤小量液体（数毫升内）时，可选用直径2.5cm的滤器，以注射器的推进压力过滤液体（图1-4)。目前试验室广泛应用无菌包装的一次性微孔薄膜滤器，实用于衔接加压蠕动泵过滤较多液体的和挺直衔接注射器过滤少量液体的两种滤器可供挑选。 4紫外线紫外线挺直照耀用于消毒试验室内空气及操作台表面，有时对不耐热的塑料培养皿和微孔反应板等的处理，也可用紫外线挺直照耀。在房间内紫外线灯的安装不宜高于2.5m，普通在进入无菌室之前或做完试验后，均开灯照耀2030分钟举行消毒；若照耀台面上的培养皿或其他物品时，被照物距紫外线灯距离0.5lm，直射30120分钟。紫

8、外线消毒必需直射，否则会存有死角。 5射线主要指60co、加速器等发出的y射线，用于不耐热的塑料制品或一次性用品的灭菌。普通将物品清洗整洁、晾干后，用塑料袋封闭包装，再摆放于包装纸箱内，用20000100 000rad的射线照耀其灭菌效果最牢靠。 6熏蒸消毒试验室、无菌室、超净工作台内或c02孵箱内的消毒可用蒸气熏蒸，遇有上述空间浮现污染致细胞浮现污染时，或试验室两个月一次的常规消毒等，均可用57.5g，加1015 ml，混合放入一开放容器内，立刻可见白色甲醛烟雾，消毒房间须密闭24小时，起码要封闭4小时以上。 7化学消毒剂常用、擦手及擦拭培养瓶盖和外壁等；来苏、等用于试验室、无菌室的桌面、物体表面的消毒，或放消毒缸内用法。 8生物法消毒应用抗生素举行消毒，预防污染。不同种类抗生素适用于杀灭或抑制不同微生物，适用于培养用液。常用的抗生素有、和等。作用的